大家都知道，血清是細胞培養(yǎng)中成本最高且最捉摸不定的成分。單單是批次間差異，就可能使細胞形態(tài)大變。
圖：research gate
1 血清中哪些成分導(dǎo)致了批次差異？
血清不是化學(xué)成分確定的調(diào)配出來的溶液，而是含有巨多成分的復(fù)雜混合物，除去營養(yǎng)成分，其中還有很多具有生物活性的功能性的分子（或者說我們需要的就是這些成分）。
圖：research gate
正是這些復(fù)雜的成分導(dǎo)致了各廠商、甚至不同產(chǎn)地和批次的血清都有些微不同。這些功能性的分子又可以分為調(diào)節(jié)和支持兩類：
調(diào)節(jié)：生長因子、抑制因子、激素，如EGF、PDGF、IGF-1、γ-球蛋白、甲狀腺激素、甾體激素和殘留的抗生素等，將直接影響細胞的增殖速率、分化方向、代謝、部分基因表達和相關(guān)通路。
支持：粘附因子、胞外基質(zhì)蛋白等將影響細胞的貼壁、形態(tài)和細胞骨架結(jié)構(gòu)。
2 如何篩選血清、進行測試？
a 形態(tài)學(xué)觀察
在固定時間點（如對數(shù)期和平臺期）對比細胞大小、鋪展形狀、偽足及細胞間連接的均一性。確保生長狀態(tài)和貼壁情況一致。
但除了對細胞的形態(tài)特征進行判斷，還需要從分子水平對比。
例如在正常培養(yǎng)階段，提取細胞RNA進行待研究的基因的表達分析，看新血清是否會對該基因的表達產(chǎn)生上調(diào)或抑制，如果有，那說明該血清的存在可能會影響你的課題實驗的結(jié)果準確性。
b 生長曲線法
設(shè)置陰性對照（當(dāng)前使用的批次）和待測批次。以正常培養(yǎng)的濃度，接種相同細胞數(shù)，在24、48、72、96小時等時間點檢測細胞密度，或記錄細胞達到不同的密度所需要用到的時間。
如果細胞使用這一批次的血清時，其生長停滯期的時間較長，說明細胞需要對這個批次的血清進行較長時間的適應(yīng)后才能正常生長。
如果細胞進入對數(shù)增長期后，倍增速度快，也就是長得很快，說明這批次的血清對細胞的生長促進效果很明顯。
如果細胞進入平臺期后，其密度比以往的血清批次要更高，說明該批次的血清的經(jīng)濟效率更高，反之亦然。
檢測手段可以采用自動細胞計數(shù)儀，同時記錄活細胞數(shù)和活率；或使用CCK-8法間接反映細胞數(shù)量，將結(jié)果繪制成生長曲線。其中尤其需要關(guān)注的是對數(shù)生長期和細胞活率。
c 克隆形成實驗（針對干細胞或轉(zhuǎn)化細胞）
將細胞懸液稀釋到極低密度，接種到平板上，培養(yǎng)1~2周后染色計數(shù)克隆數(shù)。這比生長曲線更能反映血清對單個細胞增殖潛能的支持。
3 如何平穩(wěn)更換血清？
選定所用的血清后，應(yīng)盡量避免更換，并適當(dāng)囤一些同一批次的血清，以減少日后培養(yǎng)時因批次差異產(chǎn)生的影響。
圖：merck
但是肯定會有必須要更換血清的時候，此時建議采用梯度替換方法，逐步過渡，以減少對細胞的影響。具體操作如下：
首先，應(yīng)選擇處于對數(shù)生長期中期的健康細胞，增殖活性強。
建立過渡培養(yǎng)基：按75:25 → 50:50 → 25:75 → 0:100（舊血清：新血清）的比例，預(yù)先混合新舊血清，并用此混合血清配制完全培養(yǎng)基。混合后最好過濾除菌。
在每次變換比例后，特別是前兩次，需要格外注意細胞形態(tài)、貼壁情況和生長速度。如果出現(xiàn)明顯不適應(yīng)的情況（如大量漂浮、生長停滯這種狀態(tài)差的表現(xiàn)），應(yīng)退回上一比例多培養(yǎng)一代。
當(dāng)細胞在100%新血清培養(yǎng)基中，其生長曲線、形態(tài)和關(guān)鍵功能指標與使用原血清時相似，且能穩(wěn)定維持至少3代以上，就可以認為過渡成功了。
8.
一旦通過測試找到理想批次，就可以囤一些并分裝凍存。血清的凍存溫度為-20°C或-80°C，一旦解凍就需要盡快使用完。
圖：research gate
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