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摘 要： 建立高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定蒼術(shù)藥材中β-桉葉醇、蒼術(shù)素、蒼術(shù)酮的含量。樣品用甲醇超聲提取，以Waters XBridge C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）分離，以乙腈-水為流動(dòng)相，梯度洗脫，流量為1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm，柱溫為30 ℃，用標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量。β-桉葉醇、蒼術(shù)素、蒼術(shù)酮的質(zhì)量濃度分別在13.55?1 354.9、1.26?126.0、2.20?220.2 μg/mL范圍內(nèi)與色譜峰面積呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)均大于0.999，方法檢出限分別為0.2、0.01、0.06 mg/g，定量限分別為0.6、0.03、0.2 mg/g。樣品加標(biāo)平均回收率為95.7%?101%，測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.5%?1.4%（n=6）。該方法滿足蒼術(shù)藥材中3種成分的測(cè)定要求，可以用來(lái)控制蒼術(shù)藥材的質(zhì)量。

關(guān)鍵詞： 高效液相色譜法； 蒼術(shù)； β-桉葉醇； 蒼術(shù)素； 蒼術(shù)酮

中藥蒼術(shù)為菊科植物茅蒼術(shù)Atractylodes lancea (Thunb.) DC.或北蒼術(shù)Atractylodes chinensis (DC.) Koidz.的干燥根莖，具有燥濕健脾、祛風(fēng)散寒、明目的功效，主要用于治療濕阻中焦、脘腹脹滿、泄瀉、水腫、腳氣痿躄、風(fēng)濕痹痛、風(fēng)寒感冒、夜盲、眼目昏澀等癥狀[1?2]?，F(xiàn)代研究表明[3?5]，蒼術(shù)主要含有糖苷、萜類、揮發(fā)油、聚炔等成分，其中揮發(fā)油類成分是蒼術(shù)的主要有效成分之一，在防止胃損傷、抗炎、利尿、改善脾虛、促進(jìn)肝蛋白合成、抗病毒以及治療泌尿生殖系統(tǒng)疾病等方面具有良好的活性。

β-桉葉醇、蒼術(shù)素和蒼術(shù)酮等成分作為蒼術(shù)中的主要揮發(fā)性成分，在不同品種蒼術(shù)中的分布具有一定特點(diǎn)，且不同產(chǎn)地、炮制方式及栽培條件對(duì)蒼術(shù)成分的含量影響顯著。目前報(bào)道的蒼術(shù)含量測(cè)定方法主要是利用氣相色譜法或氣相色譜法-質(zhì)譜法測(cè)定某一種或兩種主要揮發(fā)性成分的含量[6?10]，而同時(shí)測(cè)定上述3種成分還未見(jiàn)報(bào)道。受氣相色譜條件限制，β-桉葉醇和蒼術(shù)素在常規(guī)分析中出現(xiàn)色譜峰部分重疊現(xiàn)象，分離度不佳，導(dǎo)致目標(biāo)成分定量準(zhǔn)確性降低，難以全面反映蒼術(shù)的整體情況；質(zhì)譜法對(duì)儀器要求高、檢測(cè)成本高、樣品適用性受限且對(duì)操作人員要求高，限制了其在普通場(chǎng)景下的廣泛應(yīng)用。部分研究采用高效液相色譜法[11?15]建立了蒼術(shù)中聚炔類成分的含量測(cè)定或指紋圖譜。筆者通過(guò)優(yōu)化色譜條件，并利用對(duì)照品定位的方式對(duì)蒼術(shù)中的成分進(jìn)行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ以及茅術(shù)醇等成分，雖然與相應(yīng)對(duì)照品保留時(shí)間相同或接近，但光譜掃描圖不盡相同，說(shuō)明色譜峰不純或成分指認(rèn)錯(cuò)誤。此外，還有些研究采用高效薄層或紅外的方法建立蒼術(shù)的指紋圖譜[16?17]，雖然具有一定的參考性，但無(wú)法準(zhǔn)確定量?！吨腥A人民共和國(guó)藥典》(以下簡(jiǎn)稱《中國(guó)藥典》)2025年版一部以聚乙炔類成分蒼術(shù)素作為蒼術(shù)質(zhì)量控制指標(biāo)，相比較《中國(guó)藥典》2020年版一部收載的蒼術(shù)標(biāo)準(zhǔn)，增加了總揮發(fā)油的含量測(cè)定，并將茅蒼術(shù)與北蒼術(shù)的含量分別定量。然而實(shí)際檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，茅蒼術(shù)的蒼術(shù)素含量普遍低于北蒼術(shù)，且多數(shù)不能達(dá)標(biāo)，而傳統(tǒng)卻認(rèn)為茅蒼術(shù)品質(zhì)更好。雖然新版藥典修訂了蒼術(shù)素含量的限度，但仍凸顯單一成分評(píng)價(jià)的局限性。為更加全面評(píng)價(jià)蒼術(shù)藥材的質(zhì)量，筆者通過(guò)優(yōu)化色譜條件，建立了高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定蒼術(shù)藥材中β-桉葉醇、蒼術(shù)素、蒼術(shù)酮3種成分的含量，以此分別評(píng)價(jià)茅蒼術(shù)與北蒼術(shù)的質(zhì)量狀況。該方法專屬性好、準(zhǔn)確度高，可用于蒼術(shù)藥材的定量分析，為完善蒼術(shù)藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供技術(shù)參考。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

高效液相色譜儀：Agilent1200型，配二極管陣列檢測(cè)器，美國(guó)安捷倫科技有限公司。分析天平：(1) XP205型，感量為0.01 mg； (2) XP26型，感量為0.001 mg，瑞士梅特勒-托利多集團(tuán)。超聲波清洗器：DTC-33J型，鼎泰(湖北)生化科技設(shè)備制造有限公司。超純水儀：Advantage A10 Milli-Q型，德國(guó)默克公司。蒼術(shù)素對(duì)照品：批號(hào)為111924-202207，純度(質(zhì)量分?jǐn)?shù))為99.7%，中國(guó)食品藥品檢定研究院。β-桉葉醇、蒼術(shù)酮對(duì)照品：批號(hào)分別為JB240678、JB247581，純度(質(zhì)量分?jǐn)?shù))分別為95%、85%，上海源葉生物科技有限公司。甲醇、乙腈：均為色譜純，美國(guó)賽默飛世爾科技公司。蒼術(shù)樣品：9批次茅蒼術(shù)樣品和7批次北蒼術(shù)樣品，經(jīng)安徽省食品藥品檢驗(yàn)研究院張亞中主任藥師鑒定為菊科植物茅蒼術(shù)Atractylodes lancea (Thunb.) DC.或北蒼術(shù)Atractylodes chinensis (DC.) Koidz.的干燥根莖，自采。實(shí)驗(yàn)用水為超純水。

1.2 色譜條件

色譜柱：Waters XBridge C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm，美國(guó)沃特世公司)；流動(dòng)相：A相為乙腈，B相為水；洗脫方式：梯度洗脫，洗脫程序見(jiàn)表1；流量：1.0 mL/min，柱溫：30 ℃；進(jìn)樣體積：10 μL；檢測(cè)波長(zhǎng)：210 nm。

表1   梯度洗脫程序

Tab. 1   Gradient elution program

1.3 溶液配制

分別精密稱取β-桉葉醇、蒼術(shù)素、蒼術(shù)酮對(duì)照品適量，置于10 mL棕色容量瓶中，加入甲醇，配制成β-桉葉醇、蒼術(shù)素、蒼術(shù)酮的質(zhì)量濃度分別為1 354.9、126.0、220.2 μg/mL的混合對(duì)照品儲(chǔ)備溶液，標(biāo)記為S6。精密量取混合對(duì)照品儲(chǔ)備溶液1、1、2、1、2 mL，分別置于100、50、50、10、10 mL棕色容量瓶中，加入甲醇稀釋至標(biāo)線，配制成系列混合對(duì)照品溶液，標(biāo)記為S1?S5。系列混合對(duì)照品溶液中3種成分的質(zhì)量濃度見(jiàn)表2。

表2   系列混合對(duì)照品溶液的質(zhì)量濃度

Tab. 2   Mass concentration of series mixed reference solution

1.4 樣品處理

精密稱取蒼術(shù)藥材粉末(過(guò)三號(hào)篩) 0.2 g，置于具塞錐形瓶中，精密加入10 mL甲醇，稱定質(zhì)量，超聲處理(功率為300 W，頻率為40 kHz) 30 min，取出，冷卻，再次稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過(guò)，取續(xù)濾液作為樣品溶液。

1.5 樣品測(cè)定

在1.2色譜條件下，分別測(cè)定系列混合對(duì)照品溶液和樣品溶液，根據(jù)3種成分的保留時(shí)間定性，以標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量。

2 結(jié)果與討論

2.1 目標(biāo)成分選擇

《中國(guó)藥典》2020年版一部收載的蒼術(shù)標(biāo)準(zhǔn)中，將蒼術(shù)素含量作為評(píng)價(jià)蒼術(shù)質(zhì)量的核心指標(biāo)，然而，相關(guān)文獻(xiàn)研究表明，這一標(biāo)準(zhǔn)在實(shí)際應(yīng)用中存在一定局限性，在茅蒼術(shù)、北蒼術(shù)以及偽品關(guān)蒼術(shù)中， β-桉葉醇、蒼術(shù)素和蒼術(shù)酮3種揮發(fā)性成分的含量有較大差異。為了更加科學(xué)、全面地評(píng)價(jià)蒼術(shù)的質(zhì)量，選擇β-桉葉醇、蒼術(shù)素和蒼術(shù)酮3種成分作為測(cè)定指標(biāo)，與原標(biāo)準(zhǔn)相比增加了蒼術(shù)酮、 β-桉葉醇兩種成分，能夠更加全面地反映蒼術(shù)的質(zhì)量。

2.2 提取方法選擇

參考《中國(guó)藥典》2020年版一部收載的蒼術(shù)標(biāo)準(zhǔn)，采用超聲處理提取方式，分別考察了甲醇、70%(體積分?jǐn)?shù))甲醇溶液和乙醇3種溶劑的提取效果，結(jié)果見(jiàn)表3。由表3可知，以甲醇為溶劑時(shí)提取效果最好，且β-桉葉醇、蒼術(shù)素、蒼術(shù)酮極性較小，更易溶于甲醇中，因此選擇甲醇為溶劑。

表3   不同提取溶劑時(shí)的測(cè)定結(jié)果

Tab. 3   Determination results of different extraction solvents

2.3 流動(dòng)相選擇

《中國(guó)藥典》2020年版一部收載的蒼術(shù)標(biāo)準(zhǔn)中以甲醇-水為流動(dòng)相，且甲醇與水的比例固定。考慮到甲醇具有較強(qiáng)的末端吸收，當(dāng)使用紫外檢測(cè)器時(shí)甲醇的截止使用波長(zhǎng)為205 nm，因此選擇乙腈-水為流動(dòng)相。以乙腈-水流動(dòng)相體系時(shí)， β-桉葉醇與雜質(zhì)峰未完全分離，為改善樣品分離效果，增加了梯度洗脫程序，并對(duì)流動(dòng)相組成進(jìn)行優(yōu)化，逐步調(diào)整流動(dòng)相比例，以提高3種成分與雜質(zhì)的分離效果，優(yōu)化后的梯度洗脫程序見(jiàn)表1。

2.4 檢測(cè)波長(zhǎng)選擇

按1.2色譜條件對(duì)β-桉葉醇、蒼術(shù)素、蒼術(shù)酮混合對(duì)照品溶液進(jìn)行分析，在3種成分對(duì)應(yīng)保留時(shí)間處，分別采用二極管陣列檢測(cè)器，在190?400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，結(jié)果如圖1所示。由圖1可以看出， β-桉葉醇在波長(zhǎng)為215 nm后基本無(wú)紫外吸收，蒼術(shù)素分別在212 nm和338 nm波長(zhǎng)處有紫外最大吸收，蒼術(shù)酮在225 nm波長(zhǎng)處有最大吸收。綜合考慮，選擇檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm。

圖1   β-桉葉醇、蒼術(shù)素、蒼術(shù)酮混合對(duì)照品溶液光譜圖

Fig. 1   Spectral diagram of mixed reference solution of β-eudesmol，atractylodin and atractylone

2.5 專屬性試驗(yàn)

分別精密吸取混合對(duì)照品溶液、樣品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，按1.2色譜條件進(jìn)行測(cè)定，色譜圖如圖2所示。由圖2可以看出，β-桉葉醇、蒼術(shù)素、蒼術(shù)酮均能與雜質(zhì)峰很好地分離，分離度均大于1.5，且樣品溶液基質(zhì)無(wú)干擾，表明該方法專屬性符合要求。

圖2   混合對(duì)照品溶液、樣品溶液色譜圖

Fig. 2   Chromatograms of mixed reference solution and sample solution

1—β-桉葉醇； 2—蒼術(shù)素； 3—蒼術(shù)酮

2.6 線性方程與檢出限

精密量取系列混合對(duì)照品溶液10 μL，注入液相色譜儀，按1.2色譜條件進(jìn)行測(cè)定，以目標(biāo)物的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(x)，以對(duì)應(yīng)的色譜峰面積為縱坐標(biāo)(y)，繪制β-桉葉醇、蒼術(shù)素和蒼術(shù)酮3種成分的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，計(jì)算線性方程和相關(guān)系數(shù)。用甲醇逐級(jí)稀釋β-桉葉醇、蒼術(shù)素和蒼術(shù)酮混合對(duì)照品溶液，按1.2色譜條件進(jìn)行測(cè)定，分別以10倍信噪比和3倍信噪比對(duì)應(yīng)的質(zhì)量濃度作為儀器定量限和檢出限，根據(jù)樣品質(zhì)量和定容體積折算成方法定量限和檢出限，以質(zhì)量分?jǐn)?shù)(mg/g)表示。3種成分的線性范圍(質(zhì)量濃度)、線性方程、相關(guān)系數(shù)、定量限及檢出限見(jiàn)表4。由表4可知，3種成分的質(zhì)量濃度在各自范圍內(nèi)與色譜峰面積呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)均大于0.999。

表4   線性范圍(質(zhì)量濃度)、線性方程、相關(guān)系數(shù)、定量限及檢出限

Tab. 4   Linear ranges (mass concentration)，linear equations，correlation coefficients，detection limits，and quantification limits

2.7 精密度試驗(yàn)

精密稱取蒼術(shù)藥材粉末6份，每份0.2 g，按1.4樣品處理方法平行制備6份樣品溶液，按1.2色譜條件分別測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表5。由表5可知，β-桉葉醇、蒼術(shù)素、蒼術(shù)酮測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.5%、1.4%、1.4%，表明該方法精密度良好，能滿足檢測(cè)要求。

表5   精密度試驗(yàn)結(jié)果

Tab. 5   Results of precision test

2.8 樣品加標(biāo)回收試驗(yàn)

精密稱取蒼術(shù)藥材粉末6份，每份0.1 g，分別加入一定量的3種成分混合對(duì)照品溶液，按1.4樣品處理方法平行制備6份加標(biāo)樣品溶液，按1.2色譜條件分別進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表6。由表6可知，3種成分的加標(biāo)平均回收率為95.7%?101%，表明該方法準(zhǔn)確度滿足要求。

表6   樣品加標(biāo)回收試驗(yàn)結(jié)果

Tab. 6   Results of samples spiked recoveries test

2.9 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取蒼術(shù)粉末0.2 g，按1.4樣品處理方法制備樣品溶液，按1.2色譜條件，分別在第0、3、9、12、18、24 h進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表7。由表7可知，3種成分色譜峰面積測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.7%、1.2%、2.5%，表明樣品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

表7   穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

Tab. 7   Results of stbility test

3 結(jié)論

(1) 鑒于《中國(guó)藥典》2025年版以單一成分作為蒼術(shù)質(zhì)量評(píng)價(jià)的指標(biāo)，難以全面反映蒼術(shù)藥材的真實(shí)品質(zhì)特征，通過(guò)系統(tǒng)優(yōu)化色譜分離條件，成功實(shí)現(xiàn)了β-桉葉醇、蒼術(shù)素和蒼術(shù)酮3種主要揮發(fā)性成分的高效分離與定量檢測(cè)。(2) 該方法精密度好，專屬性強(qiáng)，色譜分離效果優(yōu)，且對(duì)儀器配置要求低，運(yùn)行成本經(jīng)濟(jì)，操作簡(jiǎn)便易行，適用于基層實(shí)驗(yàn)室及常規(guī)質(zhì)量檢測(cè)場(chǎng)景。該研究成果為全面評(píng)價(jià)蒼術(shù)藥材的質(zhì)量差異提供了科學(xué)依據(jù)，有助于構(gòu)建基于多成分協(xié)同控制的中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系，為中藥現(xiàn)代化質(zhì)量控制提供了創(chuàng)新技術(shù)路徑，對(duì)推動(dòng)中藥產(chǎn)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化發(fā)展具有重要意義。(3) 該方法不僅實(shí)現(xiàn)了β-桉葉醇、蒼術(shù)素和蒼術(shù)酮的有效分離，還額外檢測(cè)到多個(gè)未知成分的色譜峰，其化學(xué)結(jié)構(gòu)與生物活性有待后續(xù)研究進(jìn)一步解析與驗(yàn)證。進(jìn)一步分析表明，在優(yōu)化后的色譜條件下，總色譜峰數(shù)量顯著增加，各峰間分離度優(yōu)異，峰形對(duì)稱性良好，可為構(gòu)建蒼術(shù)藥材的HPLC指紋圖譜提供可靠的數(shù)據(jù)基礎(chǔ)與技術(shù)支撐，有助于進(jìn)一步研究其化學(xué)成分的復(fù)雜性與質(zhì)量一致性特征。

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    CUI Xinyan，SUI Guopeng. Establishment of fingerprint，cluster analysis and principal component analysis of Rhizoma Atractylodes from different origin［J］. China Journal of Pharmaceutical Economics，2024，19（11）： 102.

12 趙艷云，張建云，鄭開(kāi)顏，等.不同產(chǎn)地北蒼術(shù)化學(xué)模式識(shí)別及4種成分一測(cè)多評(píng)法的建立［J］.中國(guó)中藥雜志，2022，47（16）： 4 395.
    ZHAO Yanyun，ZHANG Jianyun，ZHENG Kaiyan，et al. Chemical pattern recognition of Atractylodes chinensis from different producing areas and establishment of quantitative analysis of multi-components by single marker （QAMS） method for four components［J］. China Journal of Chinese Materia Medica，2022，47（16）： 4 395.

13 朱思敏，崔波，歐陽(yáng)麗敏，等.一測(cè)多評(píng)法結(jié)合Q型聚類分析對(duì)蒼術(shù)中3個(gè)聚炔類成分的比較研究［J］.藥物分析雜志，2020，40（4）： 597.
    ZHU Simin，CUI Bo，OUYANG Limin，et al. Comparative study of three polyacetylenes in Atractylodis Rhizoma by QAMS combined with Q-type cluster analysis［J］. Chinese Journal of Pharmaceutical Analysis，2020，40（4）： 597.

14 張文文，吳琴燕，趙來(lái)成，等. UPLC-MS/MS測(cè)定茅蒼術(shù)中蒼術(shù)內(nèi)酯含量的研究［J］.浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2025，66（4）： 923.
    ZHANG Wenwen，WU Qinyan，ZHAO Laicheng，et al. Study of atractylolides determination in Atractylodes lancea（Thunb.）DC.by UPLC-MS/MS［J］. Journal of Zhejiang Agricultural Sciences，2025，66（4）： 923.

15 周潔，湯維維，陳君.基于UPLC-QTOF-MS/MS法的茅蒼術(shù)與北蒼術(shù)化學(xué)成分分析［J］.藥學(xué)與臨床研究，2020，28（5）： 321.
    ZHOU Jie，TANG Weiwei，CHEN Jun. A UPLC-QTOF-MS/MS method for the characterization of chemical constituents of Atractylodes lancea（Thunb.）DC.and Atractylodes chinensis（DC.）Koidz［J］. Pharmaceutical and Clinical Research，2020，28（5）： 321.

16 李定發(fā)，梁漸崧，潘英杰，等.北蒼術(shù)與關(guān)蒼術(shù)的高效薄層指紋圖譜比較研究［J］.中藥新藥與臨床藥理，2022，33（1）： 97.
    LI Dingfa，LIANG Jiansong，PAN Yingjie，et al. Comparative studies on high-performance thin-layer chromatographic fingerprints of Atractylodes chinensis and Atractylodes japonica［J］. Traditional Chinese Drug Research & Clinical Pharmacology，2022，33（1）： 97.

17 李超，黃顯章，張超云，等.不同產(chǎn)地蒼術(shù)紅外指紋圖譜研究［J］.中藥材，2019，42（1）： 51.
    LI Chao，HUANG Xianzhang，ZHANG Chaoyun，et al. Infrared fingerprint of Atractylodes lancea from different regions［J］. Journal of Chinese Medicinal Materials，2019，42（1）： 51.