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摘要

間充質(zhì)細胞治療藥物作為新興治療手段, 展現(xiàn)出廣闊應(yīng)用前景。本文聚焦其質(zhì)量研究進展, 從間充質(zhì)細胞特性、質(zhì)量控制要點及面臨挑戰(zhàn)等方面進行闡述, 旨在為該類藥物的研發(fā)、生產(chǎn)及質(zhì)量監(jiān)管提供參考, 推動其安全、有效地應(yīng)用于臨床。

關(guān)鍵詞

間充質(zhì)細胞; 治療藥物; 質(zhì)量控制; 藥學審評

間充質(zhì)細胞(mesenchymal cell, MSC)來源于中胚層, 屬多潛能細胞, 主要存在于人體結(jié)締組織與部分器官間質(zhì)中, 在骨髓、脂肪、臍帶、胎盤等多種組織中廣泛分布。近年來, 基于MSC的治療藥物在移植物抗宿主病(graft versus host disease, CVHD)、骨關(guān)節(jié)炎、急性缺血性腦卒中等多種疾病治療中展現(xiàn)出良好前景[2-3]。

2025年初, 國際期刊Heliyon發(fā)表的研究在全球首次明確揭示了MSC與干細胞在分子層面的根本區(qū)別, 通過單細胞RNA測序和擬時序軌跡分析, 提供了區(qū)分二者身份的生物標志物, 為MSC標準更新奠定基礎(chǔ)。同年5月, 國際細胞治療學會(International Society for Cell & Gene Therapy, ISCT)正式發(fā)布間充質(zhì)基質(zhì)細胞鑒定標準, 新標準明確界定為“間充質(zhì)基質(zhì)細胞”, 如果先進治療藥品以“間充質(zhì)干細胞”進行申報, 需要提供自我更新、多向分化等研究證明其“干性”; 排除體外三向分化檢測與標準貼壁生長要求、細化細胞標志物、設(shè)定流式檢測閾值與百分比、強調(diào)注明組織來源、加強效力等關(guān)鍵質(zhì)量屬性評估, 終結(jié)了30余年細胞身份爭議。

2025年1月, 我國國家藥品監(jiān)督管理局批準艾米邁托賽上市, 用于治療類固醇難治性急性移植物抗宿主病。這是我國首個該適應(yīng)證的MSC治療藥物, 標志我國該領(lǐng)域質(zhì)控體系獲突破性進展。截至2025年5月, 我國已獲批160余項MSC臨床試驗。MSC因來源廣、取材易、免疫排斥低等優(yōu)勢成為行業(yè)焦點, 申報數(shù)量在各類干細胞療法中居于首位。國際上雖有12種MSC產(chǎn)品獲批商業(yè)化, 但研發(fā)挑戰(zhàn)重重: 不同組織來源細胞生物學特性差異大、生產(chǎn)工藝復(fù)雜導(dǎo)致批間一致性難控、質(zhì)量表征手段有限、成藥性轉(zhuǎn)化難度極高。因此, 確保質(zhì)量的可控性、穩(wěn)定性和安全性是研發(fā)與審評的核心, 相關(guān)質(zhì)量控制及審評問題分析可為研發(fā)申報提供參考。

1MSC的特性與功能

1.1 細胞特性

MSC具有獨特生物學特性: 形態(tài)上多呈成纖維細胞樣, 貼壁生長; 表面表達CD73, CD90, CD105等特征性標志物, 不表達造血干細胞標志物CD34, CD45等。其低免疫原性使異體移植中不易引發(fā)強烈免疫排斥, 為臨床應(yīng)用奠定優(yōu)勢。

誘導(dǎo)性間充質(zhì)干細胞(induced mesenchymal stem cell, iMSC)兼具部分上述特性, 且有自身特點: 可通過重編程技術(shù)由體細胞誘導(dǎo)生成, 來源更廣且避開倫理爭議; 增殖與分化潛能更易調(diào)控, 同質(zhì)性高, 標準化分化流程能減少批間差異, 但存在重編程引入基因變異的風險。

1.2 治療功能機制

MSC發(fā)揮治療作用主要通過以下3種作用機制。①免疫調(diào)節(jié)功能: 能夠調(diào)節(jié)機體免疫反應(yīng), 抑制T細胞、B細胞等免疫細胞的活化與增殖, 減輕炎癥反應(yīng)。例如: 在移植物抗宿主病治療中, MSC可通過分泌細胞因子如IL-10, TCF-β等調(diào)節(jié)免疫細胞的功能, 緩解免疫攻擊對宿主組織的損傷; ②旁分泌作用: MSC能分泌多種生物活性因子, 如血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor, VECF)、肝細胞生長因子(hepatocyte growth factor, HCF)等, 這些因子可以促進血管生成、細胞增殖與存活, 加速組織修復(fù)與再生; ③歸巢特性: MSC能夠感知體內(nèi)損傷信號, 定向遷移至受損組織部位, 發(fā)揮修復(fù)作用。

2、MSC治療藥物的質(zhì)量控制要點

2.1 原材料質(zhì)量控制

2.1.1 細胞來源

MSC的來源多樣, 不同來源的細胞在特性和功能上存在一定差異。骨髓來源的MSC分化潛能較高, 但采集有侵入性, 細胞數(shù)量和活性隨供體年齡增長而下降; 脂肪來源MSC獲取較易, 但分化能力弱, 且易受供體肥胖等代謝因素影響; 臍帶來源MSC因采集無創(chuàng)、增殖力強、免疫原性低, 成為臨床應(yīng)用理想選擇之一。

藥物研發(fā)中, 需要優(yōu)先選擇倫理風險低、來源可靠的起始原材料, 提供倫理審查合規(guī)文件與規(guī)范知情同意書。供體篩選需要明確性別、年齡、病史等, 病原體篩查覆蓋人類免疫缺陷病毒1/2型(human immunodeficiency virus type 1/2, HIV-1/2)、乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)、丙型肝炎病毒(hepatit is C virus, HCV)、梅毒螺旋體等, 富含白細胞的供體還需要檢測人類T淋巴細胞白血病病毒1/2型(human T-lymphotropic virus type1/2, HTLV-1/2)、巨細胞病毒(cytomegalovirus, CMV)等。應(yīng)結(jié)合病原體感染規(guī)律與檢測能力, 針對高風險病原體選擇高靈敏度方法, 設(shè)置“最短且可靠”窗口期, 推薦采用監(jiān)管機構(gòu)批準的試劑盒進行相關(guān)病原體檢測。

iMSC來源具有獨特優(yōu)勢, 可由體細胞經(jīng)重編程獲得, 突破來源限制, 理論上可無限供應(yīng); 源于同一種子細胞[誘導(dǎo)多能干細胞(induced pluripotent stem cell, iPSC)], 批次產(chǎn)量大、質(zhì)量穩(wěn)定, 避免供體差異[14-15]。但重編程可能引入基因變異風險, 需要使用安全、高效、可調(diào)控技術(shù)(如非病毒載體介導(dǎo)法), 起始體細胞應(yīng)無病原體污染、無遺傳缺陷且狀態(tài)良好, 以保障重編程效率與iMSC質(zhì)量。

審評中常見問題分析如下。①供體篩查不全面: 未覆蓋相關(guān)病毒或未設(shè)檢測窗口期, 難排除傳播風險; ②供者信息追溯缺失: 無完整健康檔案, 無法評估對細胞質(zhì)量影響; ③倫理審查不規(guī)范: 未明確采集倫理邊界, 不符合相關(guān)法規(guī)要求。

2.1.2 細胞庫建立

MSC庫構(gòu)建需要結(jié)合其多組織來源異質(zhì)性及低免疫原性特性, 遵循生物制品生產(chǎn)規(guī)范, 普遍采用主細胞庫(master cell bank, MCB)與工作細胞庫(working cell bank, WCB)的二級體系。主細胞庫由嚴格篩選的初始細胞(如骨髓、臍帶或脂肪來源原代MSC)擴增建立, 需要全面檢測細胞鑒別、活力、純度、微生物污染及遺傳穩(wěn)定性等指標。

傳代穩(wěn)定性研究需要關(guān)注遺傳穩(wěn)定性、成瘤/致瘤性、細胞干性等指標, 明確限傳代次。因MSC長期傳代易功能衰減, 主細胞庫傳代通常不超過3~5代(P3~P5), 工作細胞庫由其傳代不超過5代。研究顯示, 早期代次(P3~P5)細胞染色體穩(wěn)定, 增殖分化、免疫調(diào)節(jié)功能最優(yōu), 分泌活性顯著優(yōu)于高代次細胞, 致瘤風險極低。

根據(jù)組織來源和臨床需求, 代次適用范圍有差異: 臍帶或胎盤來源MSC在P5代內(nèi)可維持高效治療活性, 適用于靜脈回輸?shù)葘毎盍σ髧栏竦膱鼍? 脂肪來源MSC至P8代后衰老加速(增殖下降、β-半乳糖苷酶陽性細胞增多等), 多向分化及旁分泌功能衰減, 建議僅用于局部修復(fù), 不適用于系統(tǒng)性治療、器官再生等對功能要求高的場景。

建立iMSC細胞庫, 除遵循MSC一般原則外, 還需要加設(shè)特性檢測。iPSC重編程為iMSC須每步嚴控: iPSC需要全面檢測多能性, Oct4等標志物陽性率≥95%, 且經(jīng)免疫缺陷小鼠畸胎瘤實驗驗證。iPSC向iMSC誘導(dǎo)時, 監(jiān)測分化效率, 借助單細胞轉(zhuǎn)錄組測序、流式細胞術(shù)分析均一性與純度, 確保iMSC純度≥95%, CD73和CD90等符合MSC標準。因iMSC體外培養(yǎng)久, 遺傳穩(wěn)定性監(jiān)測更為關(guān)鍵: 除常規(guī)染色體核型分析之外, 還需要全基因組、全外顯子測序, 要求變異頻率低于閾值。此外, 針對成瘤風險, 應(yīng)分化中監(jiān)測遺傳穩(wěn)定性, 驗證未分化iPSC及異常細胞殘留量, 降低風險[19-20]。

審評中常見問題分析如下。①細胞庫質(zhì)控缺陷: 純度缺乏流式驗證、工作細胞庫與主細胞庫質(zhì)量差異大時未分析操作偏差; ②限傳代次依據(jù)不足: 未結(jié)合iMSC特性與工藝, 缺乏該細胞系傳代穩(wěn)定性、功能保留性驗證數(shù)據(jù); ③遺傳穩(wěn)定性檢測不全: 僅做染色體核型分析, iMSC未測序, 難排除致瘤風險; ④iPSC多能性驗證不足: 僅靠標志物表達, 未做畸胎瘤實驗或無三胚層結(jié)構(gòu); ⑤殘留檢測靈敏度不夠: iPSC殘留PCR未驗證最低檢測限, 非預(yù)期細胞無特異性檢測法; ⑥分化均一性數(shù)據(jù)支撐弱: 缺乏聚類圖譜等, 無法驗證純度≥95%及表型。

2.2 生產(chǎn)過程質(zhì)量控制

2.2.1 細胞培養(yǎng)工藝

MSC培養(yǎng)工藝直接影響細胞質(zhì)量和產(chǎn)量。傳統(tǒng)二維平面培養(yǎng)受限于培養(yǎng)面積與生長環(huán)境, 難以規(guī)模化生產(chǎn)且細胞均一性差; 三維培養(yǎng)借助微載體、生物反應(yīng)器等模擬體內(nèi)立體微環(huán)境, 可提高細胞密度和擴增效率, 更好維持細胞生物學特性, 逐步替換傳統(tǒng)培養(yǎng)方式, 成為研究新的選擇[21-22]。

培養(yǎng)基成分對培養(yǎng)效果至關(guān)重要。含血清培養(yǎng)基能促進細胞生長, 但成分復(fù)雜、批次差異大, 可能引入病原體和異種蛋白, 增加安全風險。無血清培養(yǎng)基因成分明確可控, 減少批次差異與污染風險, 提升體系穩(wěn)定性和安全性, 成為當前趨勢。同時須嚴格控制培養(yǎng)溫度、pH值及溶氧等培養(yǎng)環(huán)境參數(shù), 以保障細胞適宜生長。

iMSC培養(yǎng)工藝因重編程和分化復(fù)雜, 對培養(yǎng)體系要求更嚴格。重編程階段須用成分精準調(diào)控的特定培養(yǎng)基, 促體細胞向iPSC高效轉(zhuǎn)變, 避免增殖或分化異常, 如添加丙戊酸等小分子須嚴控濃度和時間。iPSC向iMSC分化階段, 須按分化路徑優(yōu)化培養(yǎng)基。激活WNT通路誘導(dǎo)分化時, 需要加合適濃度激動劑, 調(diào)整細胞因子和營養(yǎng)比例, 保障效率與質(zhì)量。全程可在合理節(jié)點監(jiān)測細胞群組成、純度、標志物表達等關(guān)鍵指標[24-25]。

審評中常見問題分析如下。①血清培養(yǎng)基風險高: 未明確內(nèi)毒素等篩選指標及批次影響, 缺乏倫理說明, 增加了病原體風險; ②無血清培養(yǎng)基開發(fā)弱: 重組因子來源及純度無標準、未驗證多代傳代細胞特性和難支撐穩(wěn)定性; ③關(guān)鍵參數(shù)記錄差: 溫度、pH、溶氧無動態(tài)記錄及預(yù)案, 未按密度調(diào)整溶氧, 影響活力; ④參數(shù)驗證缺重復(fù): 僅單次確認工藝參數(shù)合理性, 未檢測3批驗證重復(fù)性, 未分析參數(shù)異常影響; ⑤重編程不規(guī)范: 表觀遺傳調(diào)控試劑(如丙戊酸)濃度數(shù)據(jù)不足、未明確時序與效率、未去除異常細胞, 增加了遺傳風險; ⑥分化調(diào)控依據(jù)不足: WNT通路無濃度配比, 節(jié)點無界定、缺指標, 難量化效率; ⑦監(jiān)測體系不完善: 無分階段監(jiān)控, 中期未檢測部分重編程細胞, 后期未驗證免疫功能。

2.2.2 細胞收獲、凍存及制劑制備

細胞收獲須按培養(yǎng)方式選擇方法: 貼壁細胞常用胰酶消化法, 懸浮細胞可用離心法。操作中需要通過優(yōu)化離心轉(zhuǎn)速與時間保障細胞活性與完整性, 并經(jīng)離心洗滌去除培養(yǎng)基、細胞碎片等雜質(zhì)。

制劑凍存時, 須開展凍存及復(fù)蘇工藝驗證。凍存常用程序降溫法, 可避免快速降溫形成冰晶損傷細胞, 通過逐步脫水保護細胞; 凍存保護劑宜選用含二甲基亞砜或成分明確的商用試劑, 應(yīng)驗證濃度合理性。制劑應(yīng)結(jié)合劑型(如注射液、凍干粉)和給藥途徑(如靜脈、局部注射)優(yōu)化配方與工藝, 確保匹配臨床需求。

iMSC在收獲、凍存及制劑環(huán)節(jié)有特殊考量。收獲時因其對機械力和酶解敏感, 須優(yōu)化條件(如溫和酶消化、機械分離)并加保護劑, 確保細胞活力≥95%。凍存過程除遵循常規(guī)MSC要求外, 還須評估對遺傳穩(wěn)定性和分化潛能的影響, 檢測凍存前后關(guān)鍵基因表達, 確保變化可控。制劑須按其特性調(diào)整配方, 如針對免疫調(diào)節(jié)活性優(yōu)化緩沖液和保護劑; 穩(wěn)定性研究須額外探索不同保存時間下功能變化, 為有效期和儲存條件提供依據(jù)。

審評中常見問題分析如下。①細胞收獲: 替代方法缺乏依據(jù), 離心參數(shù)未通過多批驗證, 洗滌后存在培養(yǎng)基成分殘留; ②凍存復(fù)蘇: 程序降溫參數(shù)不明, 未對比降溫方式影響, 復(fù)蘇后僅檢測活力, 未驗證功能性指標; ③制劑制備: 未按劑型、給藥途徑優(yōu)化配方, 緩沖液參數(shù)無數(shù)據(jù), 內(nèi)包材相容性研究缺失; ④iMSC專屬: 收獲未檢測誘導(dǎo)殘留細胞, 適配的消化酶組合及解離參數(shù)未驗證; 凍存后未檢測特有干性標志物及誘導(dǎo)相關(guān)基因穩(wěn)定性。

2.2.3 工藝過程控制

間充質(zhì)干細胞作為活體細胞制劑, 質(zhì)量難經(jīng)終端檢測完全表征。須基于質(zhì)量源于設(shè)計(quality by design QbD)理念, 將質(zhì)量控制貫穿生產(chǎn)全流程, 借助完善的過程分析技術(shù)(process analytical technology, PAT)體系精準調(diào)控工藝, 確保批間一致性與產(chǎn)品穩(wěn)定性, 符合全過程質(zhì)量監(jiān)控要求。

依據(jù)風險評估設(shè)計過程中間控制點(in-process control, IPC)可及時發(fā)現(xiàn)異常: 細胞分離后檢測活率、純度及初始表型; 傳代監(jiān)測表面標志物與核型穩(wěn)定性; 收獲前驗證活力、無菌及功能活性, 不達標批次須干預(yù)。IPC結(jié)果超范圍應(yīng)立即停產(chǎn), 分析原因并評估后續(xù)影響[30-31]。

審評中常見問題分析如下。①PAT體系不系統(tǒng): 僅監(jiān)控溫度、pH等環(huán)境參數(shù), 缺少換液頻率、消化時長等工藝參數(shù)記錄, 質(zhì)量波動根源難追溯; ②在線監(jiān)測不足: 依賴人工計數(shù)、離線測pH, 數(shù)據(jù)滯后致工藝難實時調(diào)整, 溶氧異常易引發(fā)細胞紊亂、凋亡; ③工藝質(zhì)量關(guān)聯(lián)未量化: 未用多批次數(shù)據(jù)建立關(guān)系, 糾偏閾值難制定, 影響工藝穩(wěn)定性; ④生產(chǎn)合規(guī)性欠缺: IPC設(shè)置不合理, 結(jié)果超限或無實操流程, 過程風險難以管控; ⑤安全性評估不充分: 遺傳穩(wěn)定性、致瘤性評估不完善, 免疫原性指標未行常規(guī)檢測, 安全有缺口。

3、質(zhì)量研究與質(zhì)量標準

質(zhì)量研究是制定質(zhì)量標準的基礎(chǔ), 須結(jié)合細胞治療產(chǎn)品生物活性動態(tài)、來源復(fù)雜等特性與臨床需求開展。方法開發(fā)與驗證方面, 須針對細胞鑒別、活力等關(guān)鍵項目, 開發(fā)特異性強、靈敏度高的方法, 并通過準確性、精密度等參數(shù)確認可靠性; 關(guān)鍵質(zhì)量屬性分析須經(jīng)風險評估識別影響安全有效性的核心指標, 建立其與生產(chǎn)工藝參數(shù)的關(guān)聯(lián)性, 明確工藝對質(zhì)量的影響閾值; 穩(wěn)定性研究須覆蓋儲存、運輸及臨床前處理全鏈條, 考察細胞活力、功能完整性等變化，確定有效期與操作規(guī)范。

質(zhì)量標準須基于充分質(zhì)量研究, 結(jié)合《中華人民共和國藥典》要求、產(chǎn)品特點、質(zhì)量屬性風險評估及工藝控制能力制定, 明確原液與制劑放行要求, 確保全程質(zhì)量可控。原液須檢測細胞鑒別(STR分型、核型分析等)、活率、數(shù)量、細胞周期、群體倍增時間、純度、微生物污染(細菌、真菌、支原體)、內(nèi)毒素、致瘤性、生物學效力、外源因子、工藝及產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)等全項目; 制劑須檢測細胞鑒別、活率、數(shù)量、無菌、內(nèi)毒素、支原體、滲透壓、pH值、生物學效力、輔料殘留等項目。

具體而言, 細胞鑒別須多維度驗證身份一致性。①細胞形態(tài)經(jīng)倒置顯微鏡觀察, 呈成纖維細胞樣梭形, 嚴控形態(tài)異常比例; ②表面標志物用流式細胞術(shù)檢測, 須符合ISCT標準, CD73, CD90, CD105陽性率≥95%, CD14和CD19等造血/免疫標志物陽性率≤2%。分化潛能通過成脂(油紅O染色)、成骨(茜素紅染色)、成軟骨(阿爾新藍染色)實驗驗證多向分化能力; ③染色體核型分析檢測至少20個分裂相, 嚴控異常率, 傳代多的細胞加做熒光原位雜交技術(shù)(fluorescence in situ hybridization, FISH)檢測, 關(guān)注高頻變異區(qū)域; ④DNA指紋圖譜經(jīng)STR分析, 確保生產(chǎn)用細胞與原始細胞庫遺傳一致, 排除交叉污染。

活細胞數(shù)及細胞活率與增殖能力檢測反映細胞功能狀態(tài)。①活細胞數(shù)及活率可用臺盼藍拒染法、CCK-8法等, 須驗證方法相關(guān)性; ②細胞周期經(jīng)流式分析C0/C1期、S期比例, 反映增殖穩(wěn)定性; ③群體倍增時間(population doubling time, PDT)通過生長曲線監(jiān)測, 須批間一致, PDT顯著延長時結(jié)合β-半乳糖苷酶染色評估衰老; ④端粒酶活性檢測方法多樣, 常規(guī)定量優(yōu)選高靈敏度的q-PCR-TRAP法。

微生物與安全性控制是質(zhì)量標準核心: 除細菌、真菌、支原體外, 外源病毒檢測須覆蓋HTLV-1/2, HIV等致病菌, 結(jié)合供體特性檢測(如胎盤來源檢查人細小病毒B19)。檢測采用“傳統(tǒng)法+先進技術(shù)”: 細胞培養(yǎng)法檢查感染性病毒, PCR快速定性/定量已知病毒, 新一代高通量測序技術(shù)(next-generation sequencing, NCS)篩查未知病毒(須驗證低豐度檢出能力)。致瘤性評估通過體外軟瓊脂實驗和體內(nèi)小鼠接種實驗, iMSC需要延長觀察周期。用動物源原材料還須檢測異種病毒, 降低跨物種風險。

生物學效力檢測須緊密關(guān)聯(lián)臨床作用機制, 形成多層次評估體系。免疫調(diào)節(jié)類產(chǎn)品采用“漏斗式+階梯式”評估: 先檢測上清中IL-10, TCF-β等抑制因子分泌量, 再經(jīng)體外共培養(yǎng)檢測對CD4+T細胞增殖的抑制率, 最后在類器官或動物模型中驗證炎癥緩解效果(如腸道黏膜修復(fù)、皮膚移植物抗宿主病愈合), 確保體外效力與體內(nèi)療效關(guān)聯(lián)。組織修復(fù)類須結(jié)合疾病模型設(shè)計指標: 骨關(guān)節(jié)炎治療中監(jiān)測軟骨厚度、Ⅱ型膠原蛋白表達及VECF分泌; 歸巢能力通過Transwell實驗測基質(zhì)細胞衍生因子-1α(stromal cell-derived factor-1α, SDF-1α)趨化率或動物模型中熒光標記觀察24h內(nèi)靶器官遷移效率, 保障細胞定向到達損傷部位。

純度與雜質(zhì)控制須涵蓋細胞群體均一性及各類污染物。細胞純度上, 流式細胞術(shù)保證高比例MSC, 嚴控CD45+殘余血細胞與CD90+, CD105-成纖維細胞污染, 借助單細胞測序分析功能亞群比例變異以保持均一性。工藝相關(guān)雜質(zhì)中, 重組胰酶、牛血清白蛋白等設(shè)定殘留限值, ≤10μm微載體碎片靠顯微計數(shù)管控; 產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)須控制死亡細胞比例、<5μm細胞碎片及宿主細胞DNA殘留, 規(guī)避炎癥與遺傳風險。含輔料制劑須驗證輔料殘留對細胞活性及臨床安全性的影響。以上控制須基于方法學驗證, 結(jié)合細胞特性與臨床需求, 參考活細胞制品指導(dǎo)原則, 平衡檢測時效性與結(jié)果可靠性。

iMSC因經(jīng)重編程而來, 質(zhì)控有更嚴格的額外要求[34-35]。①全程監(jiān)控重編程因子(Oct4, Sox2等)殘留, 以數(shù)字PCR等高靈敏度方法嚴控含量; ②強化遺傳穩(wěn)定性評估, 除染色體核型分析外, 加做全基因組測序與甲基化分析, 控制變異系數(shù); ③升級致瘤性評估, 體外增測細胞增殖潛能, 體內(nèi)延長免疫缺陷小鼠觀察時間; ④全面驗證功能等效性, 與天然間充質(zhì)干細胞頭對頭比較免疫調(diào)節(jié)、歸巢及分化能力; ⑤單獨驗證重編程方法安全性, 檢測病毒載體殘留與突變風險或非病毒方法的效率穩(wěn)定性及試劑殘留。

審評中常見問題分析如下。①檢出與重復(fù)性: 比對少、低豐度檢出弱、功能學重復(fù)性差、批間變異超標; ②細胞鑒別: 僅測表面標志物, 缺少STR分型防污染, 核型分析分裂象不足; ③微生物控制: 快速檢驗驗證僅1~2批, 未覆蓋多污染場景; 支原體PCR檢測, 缺少培養(yǎng)法復(fù)核; 原材料風險評估不足, 污染源頭管控薄弱; ④生物學效力: 體外指標與體內(nèi)療效無對應(yīng), 未覆蓋細胞比例活性差異, 未按適應(yīng)證優(yōu)化檢測(如骨修復(fù)缺少BMP2檢測); ⑤iMSC遺傳穩(wěn)定性: 重編程因子檢出靈敏度低, 未做全基因組測序與甲基化分析, 致瘤性觀察周期短; ⑥雜質(zhì)控制: 工藝雜質(zhì)限值無依據(jù), 宿主細胞DNA未控制片段長度, 未評估死細胞及碎片安全性; ⑦質(zhì)量標準: 鑒別標準單一、無動態(tài)閾值, 內(nèi)毒素限值未依規(guī)設(shè)定, 純度未考慮組織來源差異; ⑧iMSC特有風險: 未驗證與天然MSC功能一致性, 病毒載體殘留及整合風險未測, 規(guī)?；a(chǎn)一致性差, 分化標志物質(zhì)控體系缺失; ⑨放行檢測: 原液缺少PDT與細胞周期檢測, 制劑缺少滲透壓等指標, 未測重組胰酶、重編程載體碎片等雜質(zhì)。

4、質(zhì)量研究的挑戰(zhàn)與未來發(fā)展

MSC治療藥物質(zhì)量研究面臨多重挑戰(zhàn): 核心是細胞異質(zhì)性, 同來源批次細胞功能、表型有差異, 二維與三維培養(yǎng)微環(huán)境差異及營養(yǎng)、pH等參數(shù)波動會加劇異質(zhì)性, 且解析控制手段不完善。檢測技術(shù)上, 低豐度微生物污染和微小遺傳變異檢出靈敏度不足, 易遺漏風險, iMSC重編程引入的基因與表觀遺傳異常的長期安全性評估方法未成熟。體外活性測定與體內(nèi)療效相關(guān)性不足, 方法多樣導(dǎo)致數(shù)據(jù)難以橫向比較, 影響劑量確定與質(zhì)量控制。此外, 各國監(jiān)管與標準差異阻礙國際合作及跨境流通, 對于基因編輯等新型產(chǎn)品須完善質(zhì)量控制體系更新。

未來質(zhì)量研究將有如下發(fā)展方向: 在標準規(guī)范方面, 加強國際合作, 建立統(tǒng)一標準與監(jiān)管框架, 推動全球產(chǎn)品互認流通; 針對活性測定, 建立標準化流程與參考品體系, 提升數(shù)據(jù)可比性; 針對iMSC等新型產(chǎn)品, 研發(fā)更靈敏的遺傳穩(wěn)定性檢測方法與長期安全性評估模型, 保障臨床安全。隨著這些標準的完善, MSC治療藥物質(zhì)量將得到更有效控制, 為其臨床廣泛應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。