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摘要

目的：系統(tǒng)總結(jié)當(dāng)前納米藥物粒徑測(cè)定的主要方法，分析其技術(shù)原理、適用范圍及局限性，為納米藥物的研發(fā)、生產(chǎn)與質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。

方法：通過(guò)調(diào)研近年來(lái)國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)中采用的納米藥物粒徑測(cè)定方法，綜述并對(duì)比了多種納米藥物粒徑測(cè)定技術(shù)，包括圖像法（例如電子顯微鏡、熒光顯微鏡）、激光散射法（例如動(dòng)態(tài)光散射、納米顆粒跟蹤分析）、沉降法（例如差示離心沉降）、電阻脈沖法（例如可調(diào)電阻脈沖傳感技術(shù)），以及其他新興技術(shù)（例如納米流式細(xì)胞術(shù)、原子力顯微鏡、場(chǎng)流分離等）。根據(jù)分析模式的不同，進(jìn)一步將這些方法歸納為集成式（群體平均）分析方法和單顆粒水平分析方法，并對(duì)比分析了二者的技術(shù)特點(diǎn)、適用范圍和局限性。

結(jié)果：集成式粒徑測(cè)定方法具有操作簡(jiǎn)便、適于高通量初篩的優(yōu)勢(shì)，但通常僅提供平均粒徑信息，可能掩蓋多分散體系的復(fù)雜性；而單顆粒水平分析技術(shù)能夠提供高精度的個(gè)體顆粒信息與詳細(xì)的粒徑分布，但普遍存在通量低、樣品制備復(fù)雜等問(wèn)題。不同方法在數(shù)據(jù)代表性與應(yīng)用場(chǎng)景上具有顯著差異，且存在明顯的互補(bǔ)性。

結(jié)論：在實(shí)際研究中，單一粒徑測(cè)定方法往往難以全面反映納米藥物的粒徑特征，推薦采用多技術(shù)聯(lián)用的策略，結(jié)合集成式與單顆粒分析方法，實(shí)現(xiàn)對(duì)納米藥物粒徑的精確、全面表征。此外，未來(lái)應(yīng)進(jìn)一步推動(dòng)粒徑測(cè)定技術(shù)的標(biāo)準(zhǔn)化流程建設(shè)、多技術(shù)數(shù)據(jù)融合與人工智能輔助分析，以提升納米藥物質(zhì)量控制的科學(xué)性與可靠性，加速其臨床轉(zhuǎn)化與應(yīng)用。

關(guān)鍵詞

納米藥物；表征；尺寸效應(yīng)；粒徑測(cè)定；單顆粒表征

納米藥物泛指具有納米尺度的藥物制劑。因具有增溶、減毒、促滲及延長(zhǎng)循環(huán)時(shí)間等特性，在過(guò)去的幾十年里，納米藥物在疾病診斷和治療中引起了廣泛關(guān)注。盡管納米藥物的出現(xiàn)和發(fā)展在體外和動(dòng)物水平的研究中取得了重大進(jìn)步，但在臨床轉(zhuǎn)化階段仍面臨著重大挑戰(zhàn)。這是因?yàn)檠芯空邆兾茨艹浞掷斫饧{米藥物與生物系統(tǒng)之間的相互作用。

納米藥物與生物系統(tǒng)之間的相互作用取決于納米顆粒的物理化學(xué)性質(zhì)，例如形態(tài)、粒徑、粒徑分布等表面性質(zhì)。國(guó)家藥品監(jiān)督管理局藥品審評(píng)中心和美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局的指南都要求對(duì)納米藥物進(jìn)行全面表征，以確保其藥效可控。然而如何對(duì)納米級(jí)別的顆粒進(jìn)行精確且全面的粒徑表征仍然是一項(xiàng)巨大的挑戰(zhàn)。因此，本文聚焦于納米藥物的粒徑（包括與粒徑有關(guān)的形狀及粒徑分布），概述現(xiàn)有檢測(cè)方法，并通過(guò)對(duì)各方法分類進(jìn)行比較，以期為納米藥物精確且全面的表面性質(zhì)表征提供指導(dǎo)。

1、納米藥物

近幾十年中，納米藥物發(fā)展迅速。相比于微米級(jí)顆粒，納米級(jí)顆粒具有更小的粒徑、更精微的形狀以及更大的比表面積，材料多樣可調(diào)，與生物系統(tǒng)之間的相互作用也大不相同。據(jù)國(guó)家藥品監(jiān)督管理局藥品審評(píng)中心發(fā)布的相關(guān)指導(dǎo)原則所述，納米藥物的最終產(chǎn)品或載體材料的外部尺寸、內(nèi)部結(jié)構(gòu)或表面結(jié)構(gòu)具有納米尺度（100nm及以下），或最終產(chǎn)品或載體材料的粒徑通常在1000nm以下，且具有明顯的尺度效應(yīng)。除了粒徑以外，形狀、電位、親/疏水性以及結(jié)構(gòu)等物理化學(xué)性質(zhì)都會(huì)影響納米藥物和生物系統(tǒng)間的相互作用，進(jìn)而調(diào)控其藥效的發(fā)揮（圖1）。

自1964年納米粒分類中脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)的概念被首次提出，到80年代末粒徑與納米藥物的高滲透長(zhǎng)滯留效應(yīng)的關(guān)系被報(bào)道，再到表面進(jìn)行聚乙二醇（Polyethylene Glycol，PEG）修飾的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體Doxil的問(wèn)世，關(guān)于納米藥物粒徑及表面性質(zhì)的探索從未停止。2020年mRNA疫苗的出現(xiàn)更是讓脂質(zhì)納米粒吸引了世界的目光，使人們對(duì)納米藥物與生物系統(tǒng)之間的相互作用產(chǎn)生極大興趣。然而，對(duì)納米粒進(jìn)行精確且全面的表征和調(diào)控仍然是一項(xiàng)巨大的挑戰(zhàn)，使納米藥物的臨床轉(zhuǎn)化具有一定困難。而這些問(wèn)題的突破取決于表征方法的選擇和更加先進(jìn)的檢測(cè)方法的開(kāi)發(fā)。

2、粒徑

2.1 形狀、粒徑與粒徑分布

納米藥物的形狀和尺寸在體外水平上會(huì)影響納米粒與活細(xì)胞之間的相互作用，體內(nèi)水平上會(huì)影響其分布與排泄過(guò)程（圖2）。Karagoz等比較MCF-7人乳腺癌細(xì)胞對(duì)不同形狀納米粒的攝取行為，發(fā)現(xiàn)桿狀和蠕蟲(chóng)狀納米顆粒的細(xì)胞攝取率顯著高于球形納米顆粒（圖2A）。Fang等則構(gòu)建直徑在30~280nm的一系列球形介孔二氧化硅納米粒，發(fā)現(xiàn)HeLa細(xì)胞對(duì)直徑為50nm的納米粒顯示出最高的細(xì)胞攝?。▓D2B）。通過(guò)調(diào)節(jié)納米藥物的尺寸，可以調(diào)控其肺沉積行為（圖2C）或延長(zhǎng)在血中的循環(huán)時(shí)間。納米藥物粒徑過(guò)大時(shí)會(huì)被單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)和網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)快速清除，過(guò)?。?lt;10nm）則會(huì)經(jīng)由腎臟迅速排出（圖2D）。

通常用粒徑作為表征納米粒尺寸的重要參數(shù)，而多分散指數(shù)（Polydispersity Index，PDI）則被用于描述顆粒粒徑分布的均勻程度。PDI是對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行雙參數(shù)擬合計(jì)算得到的無(wú)量綱數(shù)字，范圍在0~1，數(shù)值越小代表粒度越均勻、粒度分布越集中。一般認(rèn)為納米藥物的PDI小于0.2時(shí)，粒徑分布較為良好。

2.2 等效粒徑

在使用粒徑描述納米藥物的尺寸時(shí)，通常將其認(rèn)為是大小接近的球形，而粒徑則為該納米球體的直徑。這對(duì)于形狀原本就接近于正球形的納米粒來(lái)說(shuō)是容易接受的，但對(duì)于棒狀、蠕蟲(chóng)狀等非對(duì)稱形狀的納米粒，則需要先將其計(jì)算為等效的球體，進(jìn)而得到等效粒徑（Equivalent Particle Diameter，EPD）。

當(dāng)不對(duì)稱納米粒的某一物理特性與球形納米粒相同時(shí)，可認(rèn)為該球形納米粒與其等效，例如等效體積徑、等效沉速?gòu)揭约暗刃щ娮鑿降?。不同粒徑測(cè)定方法所得到的EPD存在差異。采用激光法、沉降法或電阻法測(cè)得的粒徑通常分別為等效體積徑、等效沉速?gòu)揭约暗刃щ娮鑿健Ｔ诓煌瑖?guó)家的監(jiān)管框架中，在納米藥物的表征階段需要選擇基于不同原理的多種測(cè)定方法，才能較為精確、全面地確定粒徑及粒徑分布情況。

3、粒徑的測(cè)定方法

粒徑和粒徑分布的結(jié)果決定了測(cè)試物是否為納米粒，所以它們是納米材料物理化學(xué)性質(zhì)表征的第一步。目前已有基于多種測(cè)定原理、運(yùn)用不同測(cè)量裝置的紛繁多樣的粒徑測(cè)定方法，本文對(duì)各種方法的檢測(cè)原理進(jìn)行簡(jiǎn)述，并對(duì)其進(jìn)行分類比較，幫助研究人員選擇并組合多種檢測(cè)手段，以達(dá)到精確、全面表征粒徑的目的。

3.1 按照測(cè)定原理分類

按照不同技術(shù)的測(cè)定原理分類，納米藥物粒徑測(cè)定方法可分為圖像法（顯微鏡法）、激光法（光散射法）、電阻法和基于不同分離技術(shù)的測(cè)定方法（包括沉降法、納米流式細(xì)胞技術(shù)、場(chǎng)流分離技術(shù)）等，本文對(duì)各種方法下可以獲得的納米顆粒表征信息和方法局限性進(jìn)行了總結(jié)（表1）。

3.1.1 圖像法

圖像法是指采用顯微鏡等裝置采集納米藥物的圖像信息，再通過(guò)計(jì)算機(jī)對(duì)圖像進(jìn)行處理分析，一般可用來(lái)表征納米藥物的形狀和粒徑（表1“圖像法”及圖3A）。但由于圖像采集區(qū)域中僅包含小部分納米粒，若要用于測(cè)定粒徑分布，需多次采集圖像獲得具有統(tǒng)計(jì)意義的數(shù)據(jù)量。

電子顯微鏡（Electron Microscope，EM）是利用電子束、電子透鏡代替光束、光學(xué)透鏡成像的顯微鏡，使分辨率顯著提高，包括投射電子顯微鏡（Transmission Electron Microscope，TEM）和掃描電子顯微鏡（Scanning Electron Microscope，SEM）等。EM適用于檢測(cè)固體樣品，可以提供樣品的二維投影信息，是表征納米藥物形狀及粒徑的良好工具。萬(wàn)方劼等采用磷鎢酸負(fù)染法對(duì)包載光敏劑的陽(yáng)離子脂質(zhì)體進(jìn)行染色，并通過(guò)TEM的方法證明該納米藥物的粒徑在50~100nm，分布較為均勻。Wei等則用SEM的方法對(duì)包載洛哌丁胺的脂質(zhì)納米粒進(jìn)行表征，證明該納米藥物的粒徑在200~300nm。但EM無(wú)法從三維水平全面表征立體的納米粒形狀，而且樣品需耐受電子束的能量。對(duì)于SEM法而言，制備樣品時(shí)還需噴濺一層導(dǎo)電涂層，這會(huì)影響粒徑測(cè)量的準(zhǔn)確性。

熒光顯微鏡（Fluorescence Microscope，F(xiàn)M）是基于熒光的激發(fā)、發(fā)射及采集的顯微鏡，包括共聚焦激光掃描顯微鏡（Confocal Laser Scanning Microscope，CLSM）、受激發(fā)射損耗（Stimulated Emission Depletion，STED）顯微鏡等。盡管熒光顯微鏡的分辨率通常低于TEM，但它卻可以實(shí)現(xiàn)多組分多色標(biāo)記，反饋另一層面上更為豐富的信息。Stamou等用AF655和AF488兩種熒光探針?lè)謩e標(biāo)記脂質(zhì)體的磷脂及PEG組分，并通過(guò)CLSM法表征其粒徑及表面PEG隨時(shí)間的脫落情況。由于脂質(zhì)體的熒光強(qiáng)度與表面積成正比，采用粒徑已知的標(biāo)準(zhǔn)納米珠進(jìn)行校準(zhǔn)后，即可計(jì)算得到脂質(zhì)體的粒徑結(jié)果。相比于CLSM，STED的分辨率和對(duì)比度更高。Stefan課題組對(duì)病毒顆粒（綠）以及其外殼上的包膜蛋白（紅）分別進(jìn)行熒光標(biāo)記，并比較了CLSM和STED的成像差異。結(jié)果顯示CLSM法僅能模糊顯示出病毒顆粒的大小在250~350nm，而STED法可以精確呈現(xiàn)出病毒顆粒成熟過(guò)程中包膜蛋白從分散到聚集的變化過(guò)程，提供了更為詳細(xì)的表面信息。

3.1.2 激光法

激光法是指當(dāng)激光照射到納米粒后，通過(guò)計(jì)算其經(jīng)散射或衍射所產(chǎn)生的變化來(lái)計(jì)算粒徑的方法。該方法通?？捎脕?lái)表征納米藥物的粒徑和粒徑分布（表1“激光法”及圖3B）。

動(dòng)態(tài)光散射（Dynamic Light Scattering，DLS）是納米藥物粒徑檢測(cè)中使用最廣泛的方法，檢測(cè)的是流體動(dòng)力學(xué)粒徑，并且可以快速測(cè)得粒度分布的結(jié)果。但它僅適用于檢測(cè)粒徑呈單峰或較為分散分布的樣品，易忽視體系中粒徑較小的顆粒。萬(wàn)方劼等采用DLS法證明包載光敏劑的陽(yáng)離子脂質(zhì)體粒徑約為100nm，PDI小于0.2，粒徑分布良好。同時(shí)也可以發(fā)現(xiàn)對(duì)于相同納米藥物，采用DLS測(cè)得的粒徑略大于TEM法所得結(jié)果，這是因?yàn)門EM法檢測(cè)的是實(shí)際粒徑（直接投影），而DLS法檢測(cè)的是流體動(dòng)力學(xué)粒徑。

小角X射線散射（Small Angle X-ray Scattering，SAXS）是指當(dāng)X射線經(jīng)過(guò)納米藥物時(shí)，會(huì)在入射線旁小角度內(nèi)發(fā)生散射，散射角大小與粒徑正相關(guān)。相比于TEM法，SAXS的粒徑檢測(cè)結(jié)果更具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但其分辨率低于TEM，通常需要連用其他表征技術(shù)以確保結(jié)果的真實(shí)性。Oliver等集中闡述了SAXS在核酸納米粒的粒徑檢測(cè)中的應(yīng)用，并對(duì)SAXS可聯(lián)用的TEM、小角中子散射等方法進(jìn)行概述。

納米顆粒跟蹤分析（Nanoparticle Tracking Analysis，NTA）是基于光散射和布朗運(yùn)動(dòng)的納米藥物表征技術(shù)，可以在單顆粒水平上檢測(cè)粒徑并統(tǒng)計(jì)粒徑分布。相比于DLS法，NTA在檢測(cè)多峰分布樣品時(shí)分離度更高，結(jié)果更接近真實(shí)。Fan等使用DLS及NTA法對(duì)表面修飾有透明質(zhì)酸的陽(yáng)離子脂質(zhì)體的粒徑進(jìn)行全面測(cè)定，并展示了NTA的關(guān)鍵幀圖片、粒徑分布情況以及3D結(jié)果圖，證明該脂質(zhì)體粒徑在210nm左右。

3.1.3 沉降法

在相同介質(zhì)中，粒徑不同的納米粒沉降速度會(huì)有差異。一般而言，粒徑越大的納米粒沉降速度越快。沉降法便是通過(guò)檢測(cè)納米藥物在一定介質(zhì)中的沉降速度來(lái)計(jì)算其粒徑大?。ū?“沉降法”及圖3C）。

離心液體沉降（Centrifugal Liquid Sedimentation，CLS）表征的是納米藥物的流體動(dòng)力學(xué)粒徑，其結(jié)果取決于樣品的分散性，是分離度較低的測(cè)定方法。此外，CLS呈現(xiàn)的是集成平均的結(jié)果，無(wú)法區(qū)分單顆粒和團(tuán)聚體。CLS包括密度梯度離心（Density Gradient Centrifugation，DGC）和差示離心沉降（Differential Centrifugal Sedimentation，DCS）法等。DGC多用于納米粒的分離和純化，DCS可通過(guò)測(cè)定納米粒的沉降系數(shù)進(jìn)而計(jì)算得到粒徑及粒徑分布信息。Plüisch等對(duì)DCS法在多峰納米粒混合物粒徑及粒徑分布中的測(cè)定進(jìn)行了探究。首先制備了粒徑分布集中的聚苯乙烯乳膠顆粒，并通過(guò)TEM、DLS以及DCS的方法全面表征，得到其粒徑在142~145nm；之后基于該粒徑已知的納米粒構(gòu)建了一系列粒子簇混合物，并證明DCS法可以精確高效地測(cè)得不同組分的沉降系數(shù)分布。

3.1.4 電阻法

電阻法是指借助于檢測(cè)納米粒通過(guò)檢測(cè)孔時(shí)的電阻變化來(lái)計(jì)算其粒徑的方法。該系統(tǒng)一般包括電極、電解液以及檢測(cè)孔，當(dāng)納米粒通過(guò)檢測(cè)孔時(shí)會(huì)擠占一定體積的電解液進(jìn)而導(dǎo)致電阻變化，而變化的幅度與納米粒的粒徑成正比。該方法可用來(lái)表征每一顆納米藥物的粒徑，在統(tǒng)計(jì)量足夠時(shí)也可以得到粒徑分布的結(jié)果（表1“電阻法”及圖3D）。

可調(diào)諧電阻脈沖傳感（Tunable Resistive Pulse Sensing，TRPS）是一種逐粒子測(cè)量技術(shù)，而不是和DLS一樣的集成平均結(jié)果。Marques等比較了TRPS和NTA法在檢測(cè)超順磁性氧化鐵納米粒（SPIONs）粒徑及粒徑分布上的差異，發(fā)現(xiàn)在4種SPIONs的測(cè)定中，TRPS法測(cè)得的平均粒徑均小于NTA法，粒徑分布也更窄。

3.1.5 其他

除上述方法外，還有一些基于其他原理的粒徑檢測(cè)方法。

納米流式細(xì)胞術(shù)（Nano-Flow Cytometry，Nano-FCM）是基于傳統(tǒng)流式細(xì)胞術(shù)開(kāi)發(fā)的適合于納米藥物檢測(cè)的高檢測(cè)限、高信噪比的測(cè)定方法，可檢測(cè)到粒徑低至50nm的納米粒，是一種新興的單顆粒水平表征技術(shù)。Yan課題組采用Nano-FCM技術(shù)成功地對(duì)粒徑在50~60nm的空載或包載siRNA的脂質(zhì)納米粒進(jìn)行檢測(cè)，并分別得到了相應(yīng)的粒徑及粒徑分布結(jié)果。

原子力顯微鏡（Atomic Force Microscope，AFM）是一種基于掃描探針的技術(shù)，可以提供納米粒的三維信息。當(dāng)掃描懸臂尖端越過(guò)顆粒表面，其垂直位移與納米顆粒表面和懸臂之間的相互作用力成正比，借此便可對(duì)納米藥物表面進(jìn)行成像。Anabousi等采用AFM技術(shù)對(duì)脂質(zhì)體表面進(jìn)行了成像。但該法的局限性在于樣品需耐受懸臂尖端施加的壓力，否則會(huì)導(dǎo)致納米粒破裂。

共振質(zhì)量測(cè)試-微機(jī)電系統(tǒng)（Resonant Mass Measurement Microelectro-Mechanical System，RMM-MEMS）是通過(guò)構(gòu)建微流體流動(dòng)回路，并在回路中設(shè)置機(jī)械懸臂狀諧振器及檢測(cè)器，當(dāng)納米粒經(jīng)由回路流至懸臂尖端時(shí)，諧振器的共振頻率會(huì)隨著納米粒質(zhì)量的增加而降低。Burg等驗(yàn)證了RMM MEMS在測(cè)定單個(gè)納米粒、單個(gè)細(xì)菌細(xì)胞和納米粒表面蛋白冠上具有極高的分辨率。

場(chǎng)流分離（Field-Flow Fractionation，F(xiàn)FF）是一種基于流體動(dòng)力學(xué)和物質(zhì)在流動(dòng)場(chǎng)中分布差異的分離技術(shù)，近年來(lái)被廣泛應(yīng)用于納米藥物粒徑檢測(cè)領(lǐng)域。其核心優(yōu)勢(shì)在于能夠?qū)?fù)雜體系中的納米顆粒（例如納米脂質(zhì)體、聚合物納米粒、膠束等）進(jìn)行高分辨率分離，并結(jié)合檢測(cè)器（例如多角度光散射檢測(cè)器、紫外檢測(cè)器、示差檢測(cè)器等）實(shí)現(xiàn)對(duì)粒徑分布的精確表征。較常用于分析納米顆粒粒徑分布的技術(shù)是非對(duì)稱場(chǎng)流分離（Asymmetrical Flow Field-Flow Fractionation，AF4）和離心場(chǎng)流分離技術(shù)（Centrifugal Field-Flow Fractionation，CF3）。Parot等采用多檢測(cè)器非對(duì)稱流場(chǎng)流分離技術(shù)（MD-AF4），開(kāi)發(fā)并優(yōu)化了一種能夠準(zhǔn)確、可重復(fù)分離脂質(zhì)體藥物用于表征其粒徑及粒徑分布的方法，并且經(jīng)過(guò)方法驗(yàn)證建立了相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)。該方法已實(shí)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)化，可用于脂質(zhì)體產(chǎn)品的質(zhì)量控制，以滿足監(jiān)管部門的要求。

此外，還有諸如激光衍射、廣角X射線散射以及電感耦合等離子體-質(zhì)譜法等粒徑測(cè)定方法，在此不逐一論述。

3.2 按照集成或單顆粒水平分析分類

以DLS為代表的一類表征手段快速便捷，被廣泛應(yīng)用于納米藥物的粒徑測(cè)定。但只能反映納米藥物的整體平均性質(zhì)，使得其在檢測(cè)多分散樣品時(shí)忽略、掩蓋了部分分群的顆粒信息，導(dǎo)致結(jié)果準(zhǔn)確性欠佳。這一類表征手段可被歸類于集成平均式的檢測(cè)模式（表2“集成”）。

為了克服集成式表征手段的劣勢(shì)，聚焦于單顆粒水平的表征手段應(yīng)運(yùn)而生。NTA的檢測(cè)原理與DLS相近，但可以對(duì)單一顆粒進(jìn)行示蹤分析，在多分散樣品的檢測(cè)中優(yōu)勢(shì)顯著。更進(jìn)一步地，例如TEM等顯微成像技術(shù)，可以在保證高分辨率的前提下對(duì)單顆粒的表面性質(zhì)進(jìn)行表征，對(duì)DLS的檢測(cè)結(jié)果形成了良好補(bǔ)充。這一類表征手段可被歸類于單顆粒水平的檢測(cè)模式（表2“單顆粒”）。

但單顆粒表征手段同樣存在一些共性難題，它們通常需要較長(zhǎng)的檢測(cè)時(shí)間、較多的樣品上樣量以及更為苛刻的樣品制備條件（例如狹窄的樣品濃度范圍）。所以在實(shí)際研究中，通常以集成式方法初篩，單顆粒水平分析技術(shù)深入探索，讓兩種表征手段優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)、有機(jī)結(jié)合。

4、總結(jié)與展望

對(duì)納米藥物的粒徑進(jìn)行全面而精準(zhǔn)的測(cè)定是其研發(fā)與質(zhì)量控制的核心挑戰(zhàn)之一。當(dāng)前，多種表征技術(shù)（例如DLS、TEM、NTA）已廣泛應(yīng)用于納米藥物的粒徑分析，但單一方法往往難以全面反映其復(fù)雜的理化特性。集成式技術(shù)（例如DLS）操作快速簡(jiǎn)便，但易受多分散、異質(zhì)性干擾；單顆粒技術(shù)（例如AFM、TRPS）可對(duì)單個(gè)納米粒進(jìn)行示蹤，卻面臨通量低、樣品制備復(fù)雜等問(wèn)題。此外，不同粒徑表征技術(shù)的測(cè)定原理及適用范圍不同，對(duì)同一樣品的測(cè)定結(jié)果常常存在差異。所以在未來(lái)研究中需重點(diǎn)關(guān)注：一是各粒徑測(cè)定技術(shù)聯(lián)用與標(biāo)準(zhǔn)化。結(jié)合不同原理的方法以彌補(bǔ)單一技術(shù)的局限性，并推動(dòng)國(guó)際統(tǒng)一的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)建立；二是智能化與高通量。利用機(jī)器學(xué)習(xí)優(yōu)化數(shù)據(jù)解析，提升單顆粒技術(shù)的檢測(cè)效率。相信通過(guò)多學(xué)科交叉創(chuàng)新，未來(lái)有望實(shí)現(xiàn)納米藥物粒徑測(cè)定的精準(zhǔn)化與標(biāo)準(zhǔn)化，加速其臨床轉(zhuǎn)化與應(yīng)用。