剛剛，國(guó)家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評(píng)中心發(fā)布《人類白細(xì)胞抗原（HLA）基因分型檢測(cè)試劑注冊(cè)審查指導(dǎo)原則》，全文如下：
《人類白細(xì)胞抗原（HLA）基因分型檢測(cè)試劑注冊(cè)審查指導(dǎo)原則》
本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊(cè)申請(qǐng)人（以下簡(jiǎn)稱“申請(qǐng)人”）對(duì)人類白細(xì)胞抗原（human leukocyte antigen, HLA）基因分型檢測(cè)試劑注冊(cè)申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫(xiě)，同時(shí)也為技術(shù)審評(píng)部門提供參考。
本指導(dǎo)原則是對(duì)HLA 基因分型檢測(cè)試劑的一般要求，申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用。若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。同時(shí)本指導(dǎo)原則僅針對(duì)HLA基因分型產(chǎn)品注冊(cè)申報(bào)資料中的個(gè)性化要求進(jìn)行撰寫(xiě)，其他通用要求和未盡事宜應(yīng)當(dāng)符合相關(guān)法規(guī)和指導(dǎo)原則要求。
本指導(dǎo)原則為注冊(cè)申請(qǐng)人和技術(shù)審評(píng)人員使用的指導(dǎo)性文件，但不包括審評(píng)審批所涉及的行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。
本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。
一、適用范圍
本指導(dǎo)原則適用于基于核酸檢測(cè)技術(shù)定性檢測(cè)人靜脈全血樣本中HLA基因以進(jìn)行HLA基因分型的試劑，用于造血干細(xì)胞移植或?qū)嶓w器官移植的配型檢測(cè)。
本指導(dǎo)原則適用的核酸檢測(cè)技術(shù)包括聚合酶鏈反應(yīng)-序列特異性寡核苷酸雜交（polymerase chain reaction-sequence specific oligonucleotide，PCR-SSO）方法、熒光熔解曲線法、熒光PCR法和高通量測(cè)序法等。其臨床預(yù)期用途如下：
1.用于低/中分辨率分型，為肝/腎等實(shí)體器官移植供受者的選擇提供參考。
2.用于高分辨率分型，為造血干細(xì)胞移植配型或肝/腎等實(shí)體器官移植供受者的選擇提供參考。
此處的低/中分辨率與《人類白細(xì)胞抗原基因分型方法分辨水平的專家共識(shí)》中的低分辨率和中分辨率定義一致，高分辨率包括共識(shí)中的高分辨率和部分超高分辨率（可完全確定第二個(gè)域數(shù)字），不包括可檢測(cè)到第三個(gè)域的超高分辨率和第四個(gè)域的等位基因分辨率。
對(duì)于采用其他樣本類型和其他方法學(xué)如直接測(cè)序法（sequence-based typing, SBT）、聚合酶鏈反應(yīng)-序列特異性引物（polymerase chain reaction-sequence specific primer，PCR-SSP）方法的試劑，可能部分要求不完全適用或本文所述內(nèi)容不夠全面；申請(qǐng)人可參考本指導(dǎo)原則，同時(shí)依據(jù)產(chǎn)品特性對(duì)適用部分進(jìn)行評(píng)價(jià)，對(duì)不適用部分闡述不適用的理由，并驗(yàn)證替代方法的科學(xué)合理性。需要時(shí)補(bǔ)充其他必要的評(píng)價(jià)內(nèi)容。
二、注冊(cè)審查要點(diǎn)
（一）綜述資料
綜述資料主要包括產(chǎn)品概述、產(chǎn)品綜述、預(yù)期用途、申報(bào)產(chǎn)品上市歷史及其他需說(shuō)明的內(nèi)容，具體可參考《體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料要求及說(shuō)明》（國(guó)家藥品監(jiān)督管理局公告2021年第122號(hào)）。
技術(shù)原理以圖示結(jié)合文字的形式描述申報(bào)產(chǎn)品的目標(biāo)靶區(qū)域、檢驗(yàn)方法、結(jié)果判讀和生信分析過(guò)程。此處的檢驗(yàn)方法包括產(chǎn)品設(shè)計(jì)、檢測(cè)孔位布局、所用方法學(xué)如高通量測(cè)序法的具體檢測(cè)原理，包括擴(kuò)增方式（橋式PCR/DNB滾環(huán)擴(kuò)增/等溫?cái)U(kuò)增等）、測(cè)序化學(xué)（包括熒光標(biāo)記的位置、信號(hào)延伸的方式、雙端測(cè)序的過(guò)程等）、檢測(cè)方式（單色熒光/雙色熒光/四色熒光/半導(dǎo)體/電信號(hào)）等。
另外，建議明確申報(bào)產(chǎn)品檢測(cè)單個(gè)樣本所需時(shí)間，每個(gè)檢測(cè)周期最多可檢測(cè)樣本數(shù)量及檢測(cè)所需時(shí)間（從全血樣本處理開(kāi)始至結(jié)果分析結(jié)束）。
產(chǎn)品包裝描述部分，為便于理解申報(bào)產(chǎn)品設(shè)計(jì)、技術(shù)原理和結(jié)果判讀方法，充分評(píng)估申報(bào)產(chǎn)品的使用風(fēng)險(xiǎn)，建議在產(chǎn)品描述部分提交申報(bào)產(chǎn)品外包裝及試劑盒中各組分的實(shí)物圖片。
與同類和/或前代產(chǎn)品的比較著重從預(yù)期用途、技術(shù)原理、檢測(cè)基因座、檢測(cè)分辨率（低分辨率/中分辨率/高分辨率）、主要組成成分、性能指標(biāo)、檢測(cè)所需時(shí)間、臨床應(yīng)用情況等方面詳細(xì)說(shuō)明申報(bào)產(chǎn)品與已獲批準(zhǔn)的同類/前代產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。
預(yù)期用途應(yīng)明確申報(bào)產(chǎn)品所能檢測(cè)的HLA基因座及分辨率，具體的臨床用途如造血干細(xì)胞移植、具體的組織器官移植。因?yàn)椴煌慕M織器官移植考慮的基因分型不同，申報(bào)產(chǎn)品應(yīng)當(dāng)明確具體用于何種器官的移植，同時(shí)詳細(xì)闡述申報(bào)產(chǎn)品所測(cè)基因座和具體等位基因可支持預(yù)期用途聲稱的理論依據(jù)（包括診療指南、專家共識(shí)等），提供文獻(xiàn)綜述及各文獻(xiàn)全文。
其他需說(shuō)明的內(nèi)容部分，概括描述整個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)的組成，提供配套申報(bào)產(chǎn)品使用的儀器、試劑和軟件的注冊(cè)信息，提供核酸提取試劑、通用測(cè)序試劑及其他如需提供的說(shuō)明書(shū)。
（二）非臨床資料
1.產(chǎn)品技術(shù)要求及檢驗(yàn)報(bào)告
申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根據(jù)產(chǎn)品研制、前期評(píng)價(jià)等結(jié)果，依據(jù)相關(guān)文件資料，結(jié)合產(chǎn)品特性按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫(xiě)指導(dǎo)原則》和《體外診斷試劑主要原材料研究注冊(cè)審查指導(dǎo)原則》的要求編寫(xiě)。
性能指標(biāo)建議參考相關(guān)行標(biāo)如《人類白細(xì)胞抗原（HLA）基因分型檢測(cè)試劑盒》的要求，設(shè)置準(zhǔn)確度、重復(fù)性、有效檢測(cè)范圍，其中重復(fù)性檢驗(yàn)所用樣本濃度應(yīng)為上樣要求的最低DNA濃度。
該類產(chǎn)品作為第三類體外診斷試劑，應(yīng)當(dāng)以附錄形式明確主要原材料以及生產(chǎn)工藝要求。同時(shí)，建議在技術(shù)要求附錄中詳細(xì)描述企業(yè)參考品的設(shè)置和制備過(guò)程，明確各企業(yè)參考品的樣本類型、等位基因和DNA濃度。
提供三個(gè)不同生產(chǎn)批次產(chǎn)品的檢驗(yàn)報(bào)告。目前已有適用的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品發(fā)布，技術(shù)要求中應(yīng)當(dāng)體現(xiàn)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品的相關(guān)要求。
2.分析性能研究
申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)提交在符合質(zhì)量管理體系的環(huán)境下生產(chǎn)的試劑盒進(jìn)行的所有分析性能評(píng)估資料，包括具體試驗(yàn)方案、試驗(yàn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果及結(jié)論等詳細(xì)資料。申報(bào)資料中描述有關(guān)試驗(yàn)的背景信息，包括試驗(yàn)地點(diǎn)，采用的試劑名稱、規(guī)格和批號(hào)，儀器名稱和型號(hào)，軟件/數(shù)據(jù)庫(kù)的名稱和版本號(hào)，樣本的背景信息（來(lái)源、樣本編號(hào)、樣本類型、采集及處理方式、等位基因和濃度確認(rèn)方法及結(jié)果）等。分析性能評(píng)估用樣本首選真實(shí)樣本或其DNA提取液，其次為IHIW（International HLA and Immunogenetics Workshop ）參考盤和UCLA參考盤，如聲稱多個(gè)適用儀器，分別針對(duì)不同適用儀器進(jìn)行性能評(píng)估研究。
分析性能評(píng)估的試驗(yàn)方法可以參考國(guó)際或國(guó)內(nèi)有關(guān)體外診斷試劑性能評(píng)估的指導(dǎo)原則進(jìn)行，對(duì)于本類產(chǎn)品建議著重對(duì)以下分析性能進(jìn)行研究。
2.1適用的樣本類型
選擇不影響核酸分子檢測(cè)的抗凝劑，如EDTA和枸櫞酸鹽進(jìn)行人靜脈全血樣本采集。鑒于肝素影響核酸擴(kuò)增過(guò)程，不建議使用肝素抗凝。若適用多種抗凝劑，建議通過(guò)同源比對(duì)研究一定數(shù)量的臨床樣本驗(yàn)證各種抗凝劑的適用性。
2.2準(zhǔn)確度
目前該類產(chǎn)品檢驗(yàn)步驟復(fù)雜，結(jié)果判讀方式不僅依賴軟件算法如單倍體拼接構(gòu)建的算法，也部分依賴人工判讀，且判讀結(jié)果受人員影響。為盡可能減少人員的主觀性影響和驗(yàn)證軟件算法的準(zhǔn)確性，準(zhǔn)確度研究應(yīng)當(dāng)采用盲法進(jìn)行。描述盲法操作要求及盲態(tài)保持情況，并提供編盲表。
準(zhǔn)確度研究可選擇與同類已上市同等分辨率或更高分辨率產(chǎn)品進(jìn)行方法學(xué)比對(duì)，若無(wú)已上市同類產(chǎn)品，可選擇目前廣泛使用如中華骨髓庫(kù)合作實(shí)驗(yàn)室使用的高分辨率檢測(cè)方法/產(chǎn)品進(jìn)行方法學(xué)比對(duì)；也可選擇檢測(cè)參考盤如IHIW參考盤、UCLA參考盤等進(jìn)行一致性分析。研究所納入樣本包含檢測(cè)范圍內(nèi)所有的中國(guó)人群常見(jiàn)等位基因（Common alleles）（以下簡(jiǎn)稱為Common等位基因）和一部分的確認(rèn)等位基因（Well-documented alleles）（以下簡(jiǎn)稱為WD等位基因），具體等位基因參考現(xiàn)行版《中國(guó)常見(jiàn)及確認(rèn)的HLA 等位基因表(CWD)》，并建議納入罕見(jiàn)等位基因（Rare alleles)（以下簡(jiǎn)稱為Rare等位基因）。另外，考慮到雜合子樣本的檢出錯(cuò)誤率高于純合子，準(zhǔn)確度研究中應(yīng)當(dāng)納入部分雜合子樣本。同時(shí)準(zhǔn)確度研究應(yīng)當(dāng)模擬真實(shí)使用情況，每個(gè)樣本僅檢測(cè)一次，不可重復(fù)檢測(cè)。
一致性分析的接受標(biāo)準(zhǔn)為低分辨率產(chǎn)品的血清型（等位基因的第一個(gè)域）與對(duì)比方法結(jié)果一致；中分辨率產(chǎn)品的血清型（等位基因的第一個(gè)域）與對(duì)比方法結(jié)果一致，等位基因第二個(gè)域的檢測(cè)結(jié)果組合中包含對(duì)比高分辨率方法的檢測(cè)結(jié)果；高分辨率產(chǎn)品與對(duì)比高分辨率方法的等位基因相同。對(duì)于不一致及模棱兩可（多種可能判定）的結(jié)果，應(yīng)當(dāng)結(jié)合其他檢測(cè)方法的結(jié)果進(jìn)行分析。
需要注意的是，低/中分辨率產(chǎn)品的結(jié)果雖然只能確定等位基因的第一個(gè)域，但考慮到包容性，準(zhǔn)確度研究所用樣本也應(yīng)當(dāng)納入CWD表中所有的Common等位基因，如A3血清型對(duì)應(yīng)的HLA-A*03:01和HLA-A*03:02。
2.3精密度
精密度研究所用樣本包括CWD表中所有的Common等位基因，并包含一定數(shù)量的雜合子。濃度水平至少包括上樣要求的最低DNA濃度。當(dāng)有充足的樣本時(shí)，建議精密度研究所用樣本與準(zhǔn)確度研究所用樣本不同。同時(shí)，為驗(yàn)證配套判讀軟件的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性，盡可能減少人員操作和判讀的主觀性影響，精密度研究所用樣本應(yīng)當(dāng)編盲，即在原始編號(hào)的基礎(chǔ)上，對(duì)每次檢測(cè)所用樣本重新進(jìn)行編號(hào)。編盲人員不可以作為檢測(cè)人員，從而確保檢測(cè)人員在進(jìn)行每次精密度研究時(shí)，對(duì)樣本的結(jié)果保持未知狀態(tài)。描述盲法操作要求及盲態(tài)保持情況，并提供編盲表。
考慮到HLA 基因分型檢測(cè)試劑所用方法學(xué)如SSO、熔解曲線法和高通量測(cè)序法的操作步驟較多，結(jié)果判讀較為復(fù)雜，受人員操作熟練度和儀器的影響較大。因此，在精密度研究中，納入不同熟練程度的操作人員、不同實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)、不同實(shí)驗(yàn)儀器、不同試劑批次和檢測(cè)時(shí)間等影響因素。
精密度研究包括重復(fù)性、中間精密度和再現(xiàn)性?？紤]到申報(bào)產(chǎn)品的檢測(cè)用時(shí)較長(zhǎng)，檢測(cè)所需樣本較多，建議申請(qǐng)人在設(shè)計(jì)精密度研究方案時(shí)將重復(fù)性、中間精密度和再現(xiàn)性精密度研究進(jìn)行組合研究。組合研究的總體研究時(shí)長(zhǎng)不少于20天，至少在3個(gè)不同的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，每個(gè)實(shí)驗(yàn)室采用兩名操作人員，不同實(shí)驗(yàn)室的操作人員不同且熟練程度不同，不同實(shí)驗(yàn)室所用儀器可為同一型號(hào)不同序列號(hào)或不同型號(hào)；整個(gè)研究至少包含3個(gè)試劑批次，每個(gè)試劑批次和每種適用儀器至少在不連續(xù)的5天中使用。重復(fù)性精密度試驗(yàn)可固定在其中一個(gè)實(shí)驗(yàn)室，由同一操作人員使用同一批次試劑在同一天進(jìn)行。最終精密度研究中每個(gè)樣本至少有15+X次（3批試劑/個(gè)實(shí)驗(yàn)室*不連續(xù)的5天+X次重復(fù)）檢測(cè)結(jié)果。
研究結(jié)束后對(duì)每個(gè)樣本的重復(fù)性精密度、批間差、中間精密度和再現(xiàn)性精密度進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。每個(gè)樣本的每次檢測(cè)結(jié)果應(yīng)當(dāng)與目標(biāo)結(jié)果一致，當(dāng)產(chǎn)生不一致結(jié)果時(shí)，申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)查找不一致原因和影響因素，并提供解決方案。
對(duì)于低分辨率/中分辨率產(chǎn)品，若申報(bào)產(chǎn)品主要原材料研究資料部分顯示設(shè)計(jì)的探針/引物與同一血清型不同等位基因序列結(jié)合的區(qū)域不存在堿基差異，如探針/引物與HLA-A*03:01和HLA-A*03:02的擴(kuò)增靶區(qū)域結(jié)合時(shí)，結(jié)合序列無(wú)堿基差異，則表明探針/引物具有可覆蓋性。此時(shí)，精密度研究中可選擇兩個(gè)等位基因的一種進(jìn)行研究。若存在差異，則均納入進(jìn)行精密度研究。應(yīng)當(dāng)注意的是，此處的探針/引物，是最終參與結(jié)果判定擴(kuò)增片段的探針/引物，而非前期富集靶序列等初步擴(kuò)增用的探針/引物。
對(duì)于高分辨率的高通量測(cè)序法產(chǎn)品，建議在進(jìn)行精密度研究時(shí)測(cè)序過(guò)程采用最大樣本通量，評(píng)估最大樣本通量檢測(cè)和數(shù)據(jù)分析的穩(wěn)定性。
2.4分析特異性
2.4.1干擾試驗(yàn)
可通過(guò)在全血樣本中添加干擾物質(zhì)的方式，評(píng)價(jià)添加前后干擾物質(zhì)對(duì)靶基因提取和檢測(cè)的影響。研究用樣本應(yīng)取每個(gè)基因座中具有代表性的等位基因，濃度水平包括上樣DNA濃度范圍下限。
針對(duì)可能的內(nèi)源干擾物和外源干擾物包括血紅蛋白、甘油三酯、膽紅素、白蛋白和常見(jiàn)治療用藥物等進(jìn)行干擾試驗(yàn)研究。建議申請(qǐng)人在每種干擾物質(zhì)的潛在最大濃度（“最差條件”）條件下進(jìn)行評(píng)價(jià)，如有干擾，應(yīng)當(dāng)確定不產(chǎn)生干擾的最高濃度。
2.4.2交叉反應(yīng)
對(duì)與靶基因序列相近或具有同源性、易引起交叉反應(yīng)的其他HLA基因座的基因序列進(jìn)行交叉反應(yīng)研究。
2.5核酸提取/純化性能
考慮到分析性能研究時(shí)所使用的DNA提取液可能并非來(lái)自于說(shuō)明書(shū)中配套使用的核酸提取/純化試劑，因此，核酸提取/純化性能研究不僅包括對(duì)核酸提取試劑本身性能的研究，還包括其與檢測(cè)試劑配套使用時(shí)的功能性驗(yàn)證。若申報(bào)產(chǎn)品適配多個(gè)核酸提取試劑，應(yīng)當(dāng)分別進(jìn)行驗(yàn)證。
采用全血真實(shí)樣本進(jìn)行提取核酸純度、濃度、完整度、提取效率的研究。
核酸提取試劑配合檢測(cè)試劑的準(zhǔn)確度、精密度和抗干擾研究。每個(gè)基因座中選取有代表性的等位基因進(jìn)行準(zhǔn)確度驗(yàn)證、再現(xiàn)性精密度和抗干擾研究。再現(xiàn)性精密度研究包括不同批次的核酸提取試劑、不同操作人員和不同適用儀器和不同時(shí)間等影響因素。此部分功能性驗(yàn)證可單獨(dú)進(jìn)行，也可納入各項(xiàng)性能研究中組合進(jìn)行。
2.6參與國(guó)內(nèi)外室間質(zhì)評(píng)的情況
目前國(guó)內(nèi)外有多個(gè)室間質(zhì)評(píng)項(xiàng)目，如我國(guó)衛(wèi)生健康委臨床檢驗(yàn)中心的室間質(zhì)評(píng)、中華骨髓庫(kù)實(shí)驗(yàn)室室間質(zhì)評(píng)、美國(guó)的UCLA室間質(zhì)評(píng)等。建議申報(bào)產(chǎn)品參與室間質(zhì)評(píng)項(xiàng)目，提交室間質(zhì)評(píng)的結(jié)果。
3.反應(yīng)體系研究
3.1樣本要求
請(qǐng)?jiān)斒鋈獦颖镜牟杉蠹疤幚矸绞?，明確適用的抗凝劑。
核酸提取過(guò)程的反應(yīng)條件和反應(yīng)體系研究，包括全血樣本的用量、核酸提取方式、洗脫方式和洗脫體積等。依據(jù)研究結(jié)果明確核酸樣本的質(zhì)量接受標(biāo)準(zhǔn)，包括但不限于核酸濃度范圍、純度及完整性等。同時(shí)，當(dāng)對(duì)樣本質(zhì)量不滿足接受標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，提出處理方案如重新取樣或擴(kuò)大樣本量再進(jìn)行核酸提取/純化。
3.2檢測(cè)流程、反應(yīng)體系研究和數(shù)據(jù)分析
詳細(xì)描述檢驗(yàn)方法的設(shè)定和優(yōu)化過(guò)程，包括各步驟中反應(yīng)程序和反應(yīng)體系的設(shè)置和優(yōu)化、數(shù)據(jù)分析的方法和各環(huán)節(jié)的質(zhì)量控制指標(biāo)和可接受標(biāo)準(zhǔn)。明確各步驟和分析過(guò)程所用試劑、儀器、軟件和數(shù)據(jù)庫(kù)的名稱及版本號(hào)。
DNA濃度要求。在保證檢測(cè)靈敏度和準(zhǔn)確度的前提下，考慮到靶標(biāo)的特性和方法學(xué)的特點(diǎn)，此類產(chǎn)品大多要求DNA濃度在一定范圍內(nèi)。申請(qǐng)人在對(duì)產(chǎn)品研發(fā)設(shè)計(jì)時(shí)，需考慮申報(bào)產(chǎn)品檢測(cè)所需的DNA濃度范圍。同時(shí)考慮到HLA基因的高度多態(tài)性和引物探針的多樣性，建議選擇具有代表性的等位基因進(jìn)行研究。
3.2.1對(duì)于采用熒光PCR法和熔解曲線法的低/中分辨率產(chǎn)品，詳細(xì)描述各反應(yīng)步驟中樣本和試劑的加樣體積、酶濃度、引物/探針濃度、dNTP濃度、陽(yáng)離子濃度、PCR擴(kuò)增程序和熔解曲線分析程序等反應(yīng)條件和質(zhì)控體系設(shè)置等。
不同適用儀器的反應(yīng)條件如果有差異應(yīng)當(dāng)分別詳述，并提交驗(yàn)證資料。
此類方法通過(guò)多條特異性短序列組合表達(dá)的方式，定性判讀基因型結(jié)果，大多需配合特定軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析和結(jié)果判讀。因此，此處應(yīng)當(dāng)詳細(xì)描述配套使用數(shù)據(jù)分析和判讀軟件的名稱、版本號(hào)、算法的建立和優(yōu)化過(guò)程。
3.2.2對(duì)于SSO方法，以圖示結(jié)合文字的方式描述檢測(cè)流程。提交擴(kuò)增、雜交、熒光素（SA-PE）標(biāo)記、上機(jī)檢測(cè)各個(gè)步驟中反應(yīng)體系和反應(yīng)程序的研究資料。SSO方法依靠懸浮液相芯片系統(tǒng)，詳細(xì)描述未包含在試劑盒組分中但需配套使用試劑和儀器，描述各試劑的組分和作用，提交儀器的質(zhì)控、校準(zhǔn)和調(diào)試過(guò)程的研究資料。明確質(zhì)量控制參數(shù)，包括微珠最低讀數(shù)、陰性質(zhì)控微珠最高值、探針陰/陽(yáng)性反應(yīng)判斷正確性等的接受標(biāo)準(zhǔn)。
SSO與熒光PCR方法或熔解曲線法類似，因此應(yīng)當(dāng)詳細(xì)描述配套使用數(shù)據(jù)分析和判讀軟件的名稱、版本號(hào)、算法的建立和優(yōu)化過(guò)程。
3.2.3高通量測(cè)序方法
申請(qǐng)人提供整個(gè)檢測(cè)流程的標(biāo)準(zhǔn)操作程序文件（Standard Operating Procedure, SOP)，對(duì)檢測(cè)全過(guò)程包括樣本收集處理、文庫(kù)制備、測(cè)序、數(shù)據(jù)分析、結(jié)果報(bào)告等過(guò)程進(jìn)行描述。
文庫(kù)制備。以圖示結(jié)合文字的方式描述最終所得文庫(kù)DNA片段的結(jié)構(gòu)組成，至少包括與測(cè)序芯片結(jié)合的測(cè)序接頭，樣本標(biāo)簽序列，測(cè)序引物結(jié)合序列和DNA靶序列等。詳細(xì)描述文庫(kù)制備的步驟和各步驟中反應(yīng)體系和反應(yīng)程序的優(yōu)化選擇過(guò)程，如DNA片段化的方法和參數(shù)，優(yōu)化的指標(biāo)包括打斷后片段大小、片段分布是否集中，隨機(jī)性等；末端修復(fù)和接頭連接的過(guò)程；靶區(qū)域捕獲的方法和文庫(kù)擴(kuò)增等。描述文庫(kù)質(zhì)檢要求，包括文庫(kù)DNA片段大小、質(zhì)量濃度和摩爾濃度等。文庫(kù)濃度檢測(cè)方法包括但不限于熒光染料法；文庫(kù)片段大小檢測(cè)方法包括但不限于毛細(xì)管電泳法等。
對(duì)于聯(lián)合探針錨定聚合測(cè)序法，詳細(xì)描述單鏈環(huán)化和DNA納米球（DNB）的制備和優(yōu)化過(guò)程。
上機(jī)測(cè)序時(shí)文庫(kù)DNB濃度/DNA濃度/摩爾濃度要求。文庫(kù)定量后需調(diào)整DNA濃度/摩爾濃度，以提高測(cè)序質(zhì)量。申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)依據(jù)適用儀器的不同特性，對(duì)上機(jī)測(cè)序文庫(kù)DNA濃度/摩爾濃度進(jìn)行研究，并提交DNA濃度轉(zhuǎn)化為摩爾質(zhì)量的公式。
測(cè)序。文字結(jié)合圖示的方式詳細(xì)描述測(cè)序儀的參數(shù)設(shè)置包括讀長(zhǎng)、通量、測(cè)序模式、標(biāo)簽序列信息和測(cè)序時(shí)間等。提交測(cè)序通用試劑的說(shuō)明書(shū)和各組分真實(shí)圖片，詳細(xì)描述測(cè)序試劑的試劑組成和各組分的功能。若研發(fā)過(guò)程中對(duì)測(cè)序通用試劑進(jìn)行了個(gè)性化調(diào)整包括但不限于組分的微調(diào)，特異性成分的添加，緩沖液的改良等，應(yīng)當(dāng)詳細(xì)描述調(diào)整的內(nèi)容和原因。詳細(xì)描述下機(jī)原始數(shù)據(jù)的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，包括簇密度、簇通過(guò)率、DNB loading率、Q值、堿基質(zhì)量分布（每個(gè)位置上的堿基質(zhì)量分?jǐn)?shù)分布情況）、GC含量（DNA分子中G+C所占的比例）、測(cè)序reads中未確定堿基（N）的比例、接頭/引物比例、總數(shù)據(jù)量（reads/堿基數(shù)）、質(zhì)控處理后的有效堿基數(shù)或reads數(shù)、平均讀長(zhǎng)、序列復(fù)雜度（測(cè)序reads中獨(dú)特序列的比例）和標(biāo)簽拆分率（混合樣本測(cè)序中，能夠正確識(shí)別并分配給原始樣本的reads比例）等。
生信分析。以流程圖的方式展示生信分析的過(guò)程。詳細(xì)描述對(duì)原始數(shù)據(jù)進(jìn)行數(shù)據(jù)過(guò)濾的過(guò)程，包括所用軟件名稱和版本號(hào)，過(guò)濾方法和參數(shù)如去除質(zhì)量低于Q30的堿基、引物二聚體序列、重復(fù)序列、去除接頭序列（標(biāo)簽序列、引物序列、測(cè)序引物結(jié)合序列），明確有效數(shù)據(jù)的質(zhì)量可接受標(biāo)準(zhǔn)，注明有效數(shù)據(jù)比例和有效reads數(shù)。與現(xiàn)用版本IPD-IMGT/HLA數(shù)據(jù)庫(kù)的參考序列（reference alleles，如HLA-A*01:01:01:01為HLA-A基因座的參考序列）進(jìn)行序列比對(duì)。以圖文結(jié)合的形式詳細(xì)描述序列比對(duì)的過(guò)程，包括所用數(shù)據(jù)庫(kù)版本號(hào)、軟件名稱、參考序列、比對(duì)策略、比對(duì)后數(shù)據(jù)的可接受標(biāo)準(zhǔn)如比對(duì)率、與參考序列相比的覆蓋率和覆蓋均一性、有效測(cè)序深度 (平均深度和最小深度)、重復(fù)率、DNA片段長(zhǎng)度的分布情況、堿基錯(cuò)配比率、GC偏倚等。因?yàn)榇蠖鄶?shù)人的HLA基因型為雜合型，即兩條染色體上的等位基因不相同，HLA基因分型檢測(cè)試劑需構(gòu)建單倍體，以確認(rèn)樣本的具體型別。此處所指的單倍體構(gòu)建指的是針對(duì)單一基因座進(jìn)行的等位基因序列拼接。申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)詳細(xì)描述單倍體拼接/構(gòu)建的策略、具體方法、所用數(shù)據(jù)庫(kù)的構(gòu)建方法和最終的質(zhì)量控制。詳細(xì)描述單倍體構(gòu)建后HLA基因型的推斷過(guò)程和質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。提交單倍體拼接和HLA基因型推斷過(guò)程中所用算法的信息，闡述算法的建立和優(yōu)化過(guò)程。
HLA分型數(shù)據(jù)的要求。包括Q30＞80%、測(cè)序深度要求（最低測(cè)序深度、平均測(cè)序深度）、測(cè)序均一性、靶區(qū)域測(cè)序覆蓋率、序列拼接長(zhǎng)度或平均reads長(zhǎng)度、高背景堿基的識(shí)別和判斷、單倍體/等位基因序列拼接、等位基因平衡等。其中測(cè)序均一性要求reads片段在檢測(cè)區(qū)域均勻分布；測(cè)序覆蓋度要求各基因位點(diǎn)測(cè)序序列100%覆蓋目標(biāo)區(qū)域，尤其是關(guān)鍵外顯子區(qū)域必須完全覆蓋并達(dá)到所要求的測(cè)序深度。對(duì)于高背景堿基的識(shí)別和判斷，其出現(xiàn)的位置和堿基類型固定，常與等位基因有關(guān)，造成結(jié)果分析錯(cuò)誤；申請(qǐng)人需提交影響結(jié)果分析的高背景堿基位置、類型及比例，建立堿基有效識(shí)別及無(wú)效識(shí)別的判斷標(biāo)準(zhǔn)，在后續(xù)結(jié)果分析中加以分析。高背景堿基應(yīng)當(dāng)排除移植后送檢樣本因錯(cuò)配移植產(chǎn)生的等位基因嵌合。申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)闡述單倍體/等位基因序列拼接過(guò)程中無(wú)法完全拼接的原因及其影響。等位基因平衡指的是等位基因多態(tài)性位置兩個(gè)堿基的比例，區(qū)分純合位點(diǎn)或雜合位點(diǎn)；當(dāng)兩個(gè)堿基比例相近時(shí)判為等位基因平衡，當(dāng)?shù)陀诳山邮艿拈撝禃r(shí)判為等位基因不平衡。申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)提供等位基因不平衡的判斷標(biāo)準(zhǔn)，并在說(shuō)明書(shū)中進(jìn)行提示。
3.3檢測(cè)結(jié)果的報(bào)告形式和注釋
依據(jù)產(chǎn)品設(shè)計(jì)和性能，參考《人類白細(xì)胞抗原基因分型方法分辨水平的專家共識(shí)》中HLA基因分型結(jié)果的描述方式，描述檢測(cè)結(jié)果的報(bào)告形式及其所代表含義。
4.陽(yáng)性判斷值研究
對(duì)于低/中分辨率產(chǎn)品，陽(yáng)性判斷值包括檢測(cè)信號(hào)的陰陽(yáng)性判斷和等位基因確認(rèn)兩部分。對(duì)于高分辨率產(chǎn)品，陽(yáng)性判斷值研究包括測(cè)序質(zhì)量符合要求的情況下，等位基因確認(rèn)的過(guò)程，此部分研究資料可在反應(yīng)體系研究3.2中提交，也可在陽(yáng)性判斷值項(xiàng)下提交。
研究樣本為預(yù)期使用人群的真實(shí)樣本，涵蓋中國(guó)人群所有Common等位基因。申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)詳述試驗(yàn)方案，列明所用試劑、儀器和軟件、對(duì)比方法、樣本量、樣本入組標(biāo)準(zhǔn)；提交陽(yáng)性判斷值研究所用樣本的背景信息列表，至少包括性別、年齡、來(lái)源、唯一可溯源編號(hào)、臨床診斷信息（對(duì)比方法的檢測(cè)結(jié)果）及申報(bào)產(chǎn)品的檢測(cè)結(jié)果等。
若申報(bào)產(chǎn)品同時(shí)采用人工判讀和軟件判讀兩種判讀模式，請(qǐng)?jiān)敿?xì)描述兩種方式的判讀規(guī)則及研究資料。考慮到產(chǎn)品特性，人工判讀較為復(fù)雜，請(qǐng)?zhí)峤蝗斯づ凶x準(zhǔn)確性的研究資料，以及人工判讀和軟件判讀的一致性研究資料。
若結(jié)果出現(xiàn)模糊判讀情況，應(yīng)當(dāng)給出解決方案。
5.主要原材料研究
該類產(chǎn)品的主要原材料包括引物、探針、酶（連接酶、聚合酶、限制性內(nèi)切酶、DNA聚合酶等）、dNTP、接頭、標(biāo)簽、核酸分離/純化組分、質(zhì)控品、參考品等。申請(qǐng)人可參考《體外診斷試劑主要原材料研究注冊(cè)審查指導(dǎo)原則》進(jìn)行主要原材料研究和注冊(cè)申報(bào)資料的準(zhǔn)備。除前述指南的通用要求外，建議申請(qǐng)人額外注意以下內(nèi)容：
5.1引物和探針
低分辨率/中分辨率產(chǎn)品的檢測(cè)靶區(qū)域多局限在HLA-I類基因的2和3號(hào)外顯子，HLA-II類基因的2號(hào)外顯子，部分基因座會(huì)涉及3號(hào)外顯子。采用高通量測(cè)序方法的高分辨率產(chǎn)品，檢測(cè)靶區(qū)域多為各基因座的全長(zhǎng)、全外顯子或關(guān)鍵外顯子區(qū)域。
詳述引物和探針的設(shè)計(jì)原則，提供引物和探針序列、靶基因序列及兩者的對(duì)應(yīng)情況。建議在各基因座序列比對(duì)的基礎(chǔ)上標(biāo)明每個(gè)引物/探針的位置和核苷酸序列，從而清晰展示引物/探針設(shè)計(jì)的包容性和特異性。
對(duì)于低/中分辨率產(chǎn)品，引物/探針的設(shè)計(jì)既要包含同一血清型下所有的等位基因，又要與其他血清型進(jìn)行區(qū)分。對(duì)于高分辨率產(chǎn)品，建庫(kù)原理不同（如擴(kuò)增子法和雜交捕獲法），所需的引物/探針設(shè)計(jì)不同，但均在數(shù)據(jù)庫(kù)全等位基因序列多重比對(duì)的基礎(chǔ)上考慮包容性和特異性進(jìn)行。
因此在完成引物和探針設(shè)計(jì)后應(yīng)當(dāng)與HLA等位基因序列數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行序列比對(duì)，與人類基因非目標(biāo)區(qū)域和常見(jiàn)入血的病原體基因進(jìn)行同源比對(duì)，分析所設(shè)計(jì)引物/探針的包容性和特異性。
5.2接頭和標(biāo)簽
申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)明確接頭序列和標(biāo)簽序列，提供接頭和標(biāo)簽的設(shè)計(jì)依據(jù)及研究資料。
5.3質(zhì)控品
陽(yáng)性質(zhì)控品包括代表性等位基因。同時(shí)設(shè)置不含待測(cè)靶序列的空白質(zhì)控品用于交叉污染的質(zhì)控。
質(zhì)控體系應(yīng)當(dāng)能夠?qū)z測(cè)全過(guò)程進(jìn)行有效的質(zhì)量控制，包括試劑及儀器性能、可能的擴(kuò)增反應(yīng)抑制物（管內(nèi)抑制）、交叉污染等因素造成的假陰性或假陽(yáng)性結(jié)果。質(zhì)控品可采用臨床樣本核酸提取液、國(guó)際公認(rèn)的參考盤或細(xì)胞系。質(zhì)控品應(yīng)當(dāng)參與樣本核酸的平行提取。申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)針對(duì)質(zhì)控品原料來(lái)源、選擇、制備、定值過(guò)程等提供詳細(xì)的研究資料，并對(duì)質(zhì)控品的檢測(cè)結(jié)果做出明確要求。
5.4內(nèi)標(biāo)
建議低/中分辨率產(chǎn)品設(shè)置內(nèi)標(biāo)，以質(zhì)控樣本質(zhì)量、擴(kuò)增過(guò)程和檢測(cè)過(guò)程。申請(qǐng)人需對(duì)內(nèi)標(biāo)的引物、探針設(shè)計(jì)和相關(guān)反應(yīng)體系的濃度進(jìn)行研究，同時(shí)明確內(nèi)標(biāo)檢測(cè)結(jié)果的可接受標(biāo)準(zhǔn)。
5.5企業(yè)參考品
建議申請(qǐng)人建設(shè)企業(yè)參考品庫(kù)，覆蓋所有的Common等位基因、部分WD等位基因和Rare等位基因。樣本來(lái)源首選真實(shí)樣本或其DNA提取液，次之為真實(shí)樣本與國(guó)內(nèi)外公認(rèn)參考盤的組合；對(duì)于WD等位基因和Rare等位基因可采用細(xì)胞系。
提交企業(yè)參考品庫(kù)的原料來(lái)源、選擇、制備、濃度及等位基因確認(rèn)方法（建議采用高分辨率或等位基因分辨率方法進(jìn)行確認(rèn)）或試劑等相關(guān)研究資料。
每批次產(chǎn)品出廠檢用企業(yè)參考品的設(shè)置至少包括準(zhǔn)確度參考品和精密度參考品。
準(zhǔn)確度參考品。對(duì)于低/中分辨率產(chǎn)品，準(zhǔn)確度參考品應(yīng)覆蓋Common等位基因和部分WD等位基因，濃度水平為上樣DNA濃度要求的下限。此處的Common等位基因覆蓋范圍與2.3精密度研究中的一致。對(duì)于高分辨率產(chǎn)品，準(zhǔn)確度驗(yàn)證所用樣本應(yīng)具有代表性的和挑戰(zhàn)性，覆蓋60%的Common等位基因和一部分的WD等位基因，濃度水平為上樣DNA濃度要求的下限。
精密度參考品。選取不同濃度水平包括上樣要求的最低DNA濃度和中陽(yáng)性樣本（正常白細(xì)胞濃度水平樣本）的至少5個(gè)樣本進(jìn)行制備。精密度參考品建議優(yōu)先選擇未納入準(zhǔn)確度參考品的Common等位基因和選擇具有挑戰(zhàn)性的等位基因，如低/中分辨率產(chǎn)品中需多個(gè)引物/探針擴(kuò)增才能確定的等位基因，高分辨率產(chǎn)品中單倍體型拼接和型別確認(rèn)困難或易出現(xiàn)等位基因不平衡的樣本。
（三）臨床評(píng)價(jià)資料
臨床試驗(yàn)的開(kāi)展、方案的制定以及報(bào)告的撰寫(xiě)等均應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊(cè)與備案管理辦法》《醫(yī)療器械臨床試驗(yàn)質(zhì)量管理規(guī)范》《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》及《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求，如相關(guān)法規(guī)、文件有更新，臨床試驗(yàn)應(yīng)符合更新后的要求。
1.臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)
應(yīng)當(dāng)選擇至少3家（含3家）按要求備案的臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)，按照相關(guān)法規(guī)的要求開(kāi)展臨床試驗(yàn)。建議申請(qǐng)人根據(jù)產(chǎn)品特點(diǎn)及預(yù)期用途，綜合不同地區(qū)人種和流行病學(xué)背景等因素選擇臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)。
2.臨床試驗(yàn)方法
建議選擇境內(nèi)已批準(zhǔn)上市的高分辨試劑（如有）或?qū)嶒?yàn)室參考方法（如一代測(cè)序、二代測(cè)序及組特異性測(cè)序引物檢測(cè)）進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)研究。
如產(chǎn)品納入了新的等位基因位點(diǎn)，應(yīng)提交相應(yīng)基因位點(diǎn)臨床意義的證據(jù)。
如采用實(shí)驗(yàn)室參考方法，應(yīng)當(dāng)提供臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)確認(rèn)的參考方法的詳細(xì)資料，如：標(biāo)準(zhǔn)化SOP、方法原理、所需試劑及儀器、參考方法的性能驗(yàn)證、參考方法質(zhì)控、數(shù)據(jù)及典型的試驗(yàn)圖譜等。
對(duì)于不一致及模棱兩可（多種可能判定）的結(jié)果，應(yīng)當(dāng)結(jié)合其他檢測(cè)方法的結(jié)果及臨床確認(rèn)結(jié)果進(jìn)行分析。
3.受試者選擇和樣本類型
3.1受試者選擇
如預(yù)期用于實(shí)體器官移植，受試者應(yīng)當(dāng)為相應(yīng)器官移植的供受者及潛在供者。
如預(yù)期用于造血干細(xì)胞移植，受試者應(yīng)當(dāng)為造血干細(xì)胞移植的供受者及潛在供者。
供、受者均可入組，注意受者應(yīng)當(dāng)有一定例數(shù)。
3.2樣本類型
適用的樣本類型一般為靜脈全血。臨床試驗(yàn)應(yīng)當(dāng)納入臨床原始樣本，不應(yīng)直接采用提取的基因組DNA進(jìn)行試驗(yàn)。臨床樣本的采集、處理、保存和提取等應(yīng)當(dāng)同時(shí)滿足申報(bào)產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)以及對(duì)比試劑說(shuō)明書(shū)的相關(guān)要求。
4.臨床試驗(yàn)樣本量
樣本量應(yīng)當(dāng)滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)要求，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)估算，建議總樣本量不低于1500例。
人類HLA等位基因亞型按照出現(xiàn)頻率可分為常見(jiàn)型、確認(rèn)型和罕見(jiàn)型。臨床試驗(yàn)中應(yīng)當(dāng)對(duì)常見(jiàn)型進(jìn)行充分驗(yàn)證，每種常見(jiàn)型均應(yīng)當(dāng)具有一定的陽(yáng)性例數(shù)：頻率達(dá)到0.9%及以上的亞型，應(yīng)當(dāng)分別不少于15例；頻率低于0.9%的常見(jiàn)型，原則上應(yīng)當(dāng)均有納入。
此外應(yīng)當(dāng)入組部分確認(rèn)型別及罕見(jiàn)型別樣本。對(duì)于包括A、B、C、DRB1、DQB1基因的高分辨率的產(chǎn)品，建議確認(rèn)型別及罕見(jiàn)型別覆蓋不少于90種。
常見(jiàn)、確認(rèn)及罕見(jiàn)型等位基因的定義以最新的中國(guó)常見(jiàn)及確認(rèn)的HLA等位基因表（CWD）為準(zhǔn)。
5.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
應(yīng)當(dāng)對(duì)入組人群進(jìn)行人口學(xué)分析（年齡、性別、民族等）以及臨床診斷背景信息等。
應(yīng)當(dāng)統(tǒng)計(jì)臨床試驗(yàn)中各基因亞型納入情況，并參考CWD表對(duì)應(yīng)列出基因頻率。
基因型第一區(qū)域結(jié)果分析：
應(yīng)當(dāng)以N×N表分別總結(jié)兩種試劑的各基因座內(nèi)血清型的定性檢測(cè)結(jié)果，計(jì)算各型符合率和總符合率及95%置信區(qū)間。
高分辨產(chǎn)品的基因型第二區(qū)域結(jié)果分析：
應(yīng)當(dāng)以N×N表分別總結(jié)兩種試劑的各基因亞型的定性檢測(cè)結(jié)果，計(jì)算各亞型符合率和各基因座總符合率及95%置信區(qū)間。
對(duì)于高分辨率的產(chǎn)品，基因亞型結(jié)果總符合率95%置信區(qū)間下限應(yīng)當(dāng)不低于99.7%；對(duì)于低分辨率的產(chǎn)品，第一區(qū)域結(jié)果總符合率95%置信區(qū)間下限應(yīng)當(dāng)不低于99.7%。
對(duì)于高通量測(cè)序原理的試劑，應(yīng)當(dāng)對(duì)樣本質(zhì)量和數(shù)據(jù)質(zhì)量進(jìn)行總結(jié)分析，并分層統(tǒng)計(jì)相應(yīng)指標(biāo)在不同水平下的樣本分布。包括有效數(shù)據(jù)量（reads數(shù)）、Q30值、測(cè)序深度(平均深度及最低深度)、靶區(qū)域測(cè)序覆蓋率、均一度（測(cè)序深度達(dá)到20%平均深度的區(qū)域占覆蓋區(qū)域的比例）、序列拼接長(zhǎng)度或平均reads長(zhǎng)度、等位基因平衡比例。其中臨床試驗(yàn)中測(cè)序有效數(shù)據(jù)量應(yīng)當(dāng)滿足說(shuō)明書(shū)要求，且不應(yīng)當(dāng)過(guò)度冗余。
不一致的樣本應(yīng)當(dāng)明確其具體的基因型及相關(guān)引物/探針，并有合理的解釋。對(duì)于高通量測(cè)序原理的試劑檢測(cè)不一致的結(jié)果，應(yīng)當(dāng)結(jié)合數(shù)據(jù)質(zhì)量分析解釋。
如涉及軟件判讀，應(yīng)當(dāng)總結(jié)結(jié)果分型表判讀與軟件判讀結(jié)果，計(jì)算其符合率和總符合率及95%置信區(qū)間。
6.倫理學(xué)要求
臨床試驗(yàn)應(yīng)當(dāng)遵守《世界醫(yī)學(xué)大會(huì)赫爾辛基宣言》的倫理學(xué)準(zhǔn)則。研究者應(yīng)當(dāng)考慮臨床試驗(yàn)用樣本的獲得和試驗(yàn)結(jié)果對(duì)受試者的風(fēng)險(xiǎn)，提請(qǐng)倫理委員會(huì)審查，并獲得倫理委員會(huì)的同意。注冊(cè)申報(bào)時(shí)應(yīng)當(dāng)提交倫理委員會(huì)的審查意見(jiàn)。
7.臨床試驗(yàn)方案
各臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)應(yīng)當(dāng)執(zhí)行同一方案，且保證在整個(gè)臨床試驗(yàn)過(guò)程中遵循預(yù)定的方案，不可隨意改動(dòng)。試驗(yàn)方案應(yīng)當(dāng)確定嚴(yán)格的入選/排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已入選的樣本被排除出臨床試驗(yàn)都應(yīng)當(dāng)記錄在案并明確說(shuō)明原因。在試驗(yàn)操作過(guò)程和結(jié)果判定時(shí)應(yīng)當(dāng)采用盲法以保證試驗(yàn)結(jié)果的客觀性。各臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)選用的對(duì)比試劑/方法應(yīng)當(dāng)保持一致，以便進(jìn)行合理的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
8.臨床試驗(yàn)報(bào)告撰寫(xiě)
臨床試驗(yàn)報(bào)告應(yīng)當(dāng)對(duì)試驗(yàn)的整體設(shè)計(jì)及各個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對(duì)整個(gè)臨床試驗(yàn)實(shí)施過(guò)程、結(jié)果分析、結(jié)論等進(jìn)行條理分明的描述，并應(yīng)當(dāng)包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計(jì)分析方法，最后得出臨床試驗(yàn)結(jié)論。
對(duì)于基于高通量測(cè)序的試劑，報(bào)告中應(yīng)當(dāng)明確所配套使用的測(cè)序儀、測(cè)序模式、生物信息數(shù)據(jù)分析軟件及參數(shù)、測(cè)序試劑等具體信息。數(shù)據(jù)匯總表中應(yīng)當(dāng)包括初始樣本的核酸濃度、有效數(shù)據(jù)量（reads數(shù)）、Q30值、測(cè)序深度(平均深度及最低深度)、測(cè)序覆蓋率、均一度（測(cè)序深度達(dá)到20%平均深度的區(qū)域占覆蓋區(qū)域的比例）、序列拼接長(zhǎng)度或平均reads長(zhǎng)度、等位基因平衡比例。
（四）產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)
說(shuō)明書(shū)編寫(xiě)應(yīng)當(dāng)符合《體外診斷試劑說(shuō)明書(shū)編寫(xiě)指導(dǎo)原則（2023年修訂版）》的要求。申報(bào)產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)在符合前述指導(dǎo)原則的基礎(chǔ)上，應(yīng)當(dāng)注意：
1.【預(yù)期用途】應(yīng)當(dāng)至少包括以下幾部分內(nèi)容：
1.1本產(chǎn)品用于體外定性檢測(cè)人靜脈外周血樣本中基因組DNA的人類白細(xì)胞抗原Ⅰ類*基因，Ⅱ類*基因的等位基因。
具體的臨床用途為：
用于白細(xì)胞抗原低/中分辨率分型，為肝/腎等實(shí)體器官（明確具體器官）移植供受者的選擇提供參考。
用于白細(xì)胞抗原高分辨率分型，為造血干細(xì)胞移植供受者的選擇提供參考。亦可為肝/腎等實(shí)體器官（明確具體器官）移植供受者的選擇提供參考。
1.2潛在的供體/受體DNA分型并不是影響患者的臨床決定的唯一測(cè)試；在做出決定移植之前，需要進(jìn)行淋巴細(xì)胞毒性交叉匹配等實(shí)驗(yàn)。
1.3明確本產(chǎn)品檢測(cè)結(jié)果僅供臨床參考，臨床醫(yī)生應(yīng)當(dāng)結(jié)合患者病情、療效及其他實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)指標(biāo)等對(duì)本產(chǎn)品的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行綜合判斷。
2.【主要組成成分】
需要但未提供部分請(qǐng)明確配套使用分析軟件注冊(cè)證號(hào)及其發(fā)布版本號(hào)。
3.【檢驗(yàn)原理】
明確檢測(cè)靶基因的具體區(qū)域，如SSO方法中HLA-A等位基因的擴(kuò)增檢測(cè)區(qū)域?yàn)?號(hào)外顯子和3號(hào)外顯子，高通量測(cè)序方法的擴(kuò)增檢測(cè)區(qū)域?yàn)锳基因全部外顯子或者A基因全長(zhǎng)。
4.【檢驗(yàn)方法】
明確核酸提取過(guò)程中全血樣本用量。
詳細(xì)描述檢測(cè)過(guò)程和反應(yīng)步驟，明確各步驟的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。其中高通量測(cè)序方法應(yīng)明確下機(jī)原始數(shù)據(jù)的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)和生信分析后的可接受質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，如Q30＞80%、測(cè)序深度要求（最低測(cè)序深度、平均測(cè)序深度）、測(cè)序均一性、靶區(qū)域測(cè)序覆蓋率、序列拼接長(zhǎng)度或平均reads長(zhǎng)度、高背景堿基的識(shí)別和判斷、等位基因序列拼接、等位基因平衡等。
5.【檢驗(yàn)方法的局限性】
明確無(wú)法準(zhǔn)確分型的等位基因。
明確申報(bào)產(chǎn)品針對(duì)所有中國(guó)人群常見(jiàn)等位基因和一部分的WD等位基因進(jìn)行了驗(yàn)證，其他未驗(yàn)證的基因型別可能存在無(wú)法檢出或檢出錯(cuò)誤的情形。
6.針對(duì)低/中分辨率產(chǎn)品，說(shuō)明書(shū)增加附件，列表明確產(chǎn)品的孔位布局圖，各孔位的陽(yáng)性判斷值和依據(jù)各孔位陰陽(yáng)性確定等位基因的結(jié)果判讀表。
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