2025年版《中國藥典》于2025年10月1日起正式實施，其中四部新增通則1109洋蔥伯克霍爾德菌群檢查法，這一變革在我國藥品微生物質(zhì)量控制領(lǐng)域具有重大意義。具體內(nèi)容如下：
潛在危害的微生物
在四部通則1107非無菌藥品微生物限度標準中表明，本限度標準所列的控制菌對于控制某些藥品的微生物質(zhì)量可能并不全面，因此，對于原料、輔料及某些特定的制劑，根據(jù)原輔料及其制劑的特性和用途、制劑的生產(chǎn)工藝等因素，可能還需檢查其他具有潛在危害的微生物。
洋蔥伯克霍爾德菌群
洋蔥伯克霍爾德菌群（Burkholderia cepacia complex，Bcc）作為一種典型的不可接受微生物，多年來一直被FDA和制藥行業(yè)所關(guān)注和研究，因Bcc污染而導致的非無菌產(chǎn)品召回事件層出不窮。此前各國藥典中僅美國藥典收載了Bcc檢查法章節(jié)，即USP <60> Microbiological Examination of Nonsterile Products—Tests for Burkholderia CepaciaComplex.
《中國藥典》2025年版四部通則1109
洋蔥伯克霍爾德菌群檢查法
方法介紹
洋蔥伯克霍爾德菌群
洋蔥伯克霍爾德菌群（Burkholderia cepacia complex，Bcc）由二十多種表型近似、基因型存在差異的菌種組成。本方法中選擇以下具有代表性的3株Bcc菌株作為培養(yǎng)基適用性試驗和檢查方法適用性試驗的試驗菌株。
洋蔥伯克霍爾德菌（Burkholderia cepacia）
〔CMCC（B）23005〕
新洋蔥伯克霍爾德菌（Burkholderiacenocepacia）
〔CMCC（B）23006〕
神秘伯克霍爾德菌（Burkholderia aenigmatica）
〔CMCC（B）23010〕
培養(yǎng)基及培養(yǎng)基適用性檢查
檢查方法適用性試驗
供試液制備：取供試品，照非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計數(shù)法（通則1105）制成1∶10供試液。取相當于1g、1ml、1貼或10cm2供試品的供試液，和不大于100cfu的試驗菌（洋蔥伯克霍爾德菌、新洋蔥伯克霍爾德菌和神秘伯克霍爾德菌）接種至適宜體積的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基或適當稀釋的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中（如對制藥用水進行檢驗時，可考慮用稀釋10倍的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基），混勻，按照檢查方法，在規(guī)定的溫度和最短時間下培養(yǎng)，應能檢出所加試驗菌相應的反應特征。
結(jié)果判斷：各試驗菌若在上述試驗中均被檢出，按此供試液制備方法和檢查方法進行供試品檢查。
供試品檢查
供試品的檢查應按經(jīng)方法適用性試驗確認的方法進行。
陽性對照試驗：實驗室綜合評估確定日常檢驗過程中陽性對照試驗的必要性、頻次及其他要求。根據(jù)方法適用性試驗結(jié)果，選擇1株試驗菌作為陽性對照菌株，陽性對照試驗應檢出相應的試驗菌。
陰性對照試驗：以稀釋劑代替供試液照相應檢查法檢查，陰性對照試驗應無菌生長。如果陰性對照有菌生長，應進行調(diào)查。
供試液制備和增菌培養(yǎng)：取供試品，照非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計數(shù)法（通則1105）制成1∶10供試液。取相當于1g、1ml、1貼或10cm2供試品的供試液，接種至適宜體積（經(jīng)方法適用性試驗確定）的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基或適當稀釋（經(jīng)方法適用性試驗確定）的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中（如對制藥用水進行檢驗時，可考慮用稀釋10倍的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基進行增菌培養(yǎng)），混勻，30～35℃培養(yǎng)48～72小時。
選擇和分離培養(yǎng)：取上述培養(yǎng)物劃線接種至洋蔥伯克霍爾德菌群選擇性瓊脂培養(yǎng)基平板上，30～35℃培養(yǎng)48～72小時。
結(jié)果判斷：若洋蔥伯克霍爾德菌群選擇性瓊脂培養(yǎng)基上有菌落生長，如表現(xiàn)為下表中的生長特征等，應進行分離、純化，并采用適宜的鑒定試驗，確證是否為洋蔥伯克霍爾德菌群；若洋蔥伯克霍爾德菌群選擇性瓊脂培養(yǎng)基上沒有菌落生長，或有菌落生長但鑒定結(jié)果為陰性，判供試品未檢出洋蔥伯克霍爾德菌群。
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