ECA發(fā)布了《歐洲藥典》系統(tǒng)適用性試驗(yàn)Q&A，我們整理了“系統(tǒng)適用性試驗(yàn)（SST）與高效液相色譜（HPLC）方法故障排除”培訓(xùn)中的問(wèn)答內(nèi)容，包括系統(tǒng)適用性可接受標(biāo)準(zhǔn)、系統(tǒng)重復(fù)性、系統(tǒng)精密度、保留時(shí)間偏差、長(zhǎng)分析序列下 SST 的合理執(zhí)行方案、SST 連續(xù)失敗的調(diào)查啟動(dòng)節(jié)點(diǎn)與依據(jù)、長(zhǎng)時(shí)分析中 SST 及標(biāo)準(zhǔn)品的重復(fù)頻次、含量與有關(guān)物質(zhì)分析中平行樣品的精密度評(píng)估方法，以及色譜柱平衡進(jìn)樣的實(shí)操建議等。以下為具體問(wèn)答內(nèi)容：
1.1《歐洲藥典》2.2.46章近期新增了系統(tǒng)適用性的可接受標(biāo)準(zhǔn)（如拖尾因子）。我們實(shí)驗(yàn)室有一個(gè)已驗(yàn)證的成品含量檢測(cè)方法，該方法中未評(píng)估拖尾因子。除已建立方法的標(biāo)準(zhǔn)外，我們是否應(yīng)開(kāi)始評(píng)估《歐洲藥典》規(guī)定的這些標(biāo)準(zhǔn)？
《歐洲藥典》2.2.46章列出了所有可定義的相關(guān)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)（SST）參數(shù)。但建議制定相關(guān)依據(jù)（例如針對(duì)相應(yīng)分析目標(biāo)譜圖（ATP）的定義），明確哪些SST參數(shù)與特定分析流程真正相關(guān)。例如，若分離質(zhì)量不存在關(guān)鍵影響，可不檢測(cè)拖尾因子，而是采用色譜分離度等其他SST參數(shù)?！稓W洲藥典格式指南》建議采用一項(xiàng)或多項(xiàng)SST參數(shù)作為通用信息。
1.2 離子色譜法與液相色譜法的系統(tǒng)適用性標(biāo)準(zhǔn)是否相同？
相同，二者原理一致。
1.3 采用氣相色譜法測(cè)定殘留溶劑時(shí)，是否需要評(píng)估系統(tǒng)重復(fù)性？
系統(tǒng)重復(fù)性在2.2.46章中有通用說(shuō)明，該要求同樣適用于氣相色譜法。一種做法是在“毒理學(xué)關(guān)注閾值”水平條件下評(píng)估系統(tǒng)重復(fù)性。此外，也可通過(guò)信噪比（S/N）、色譜分離度和峰形（拖尾因子）來(lái)定義系統(tǒng)適用性試驗(yàn)（SST）的標(biāo)準(zhǔn)（如針對(duì)頂空氣相色譜法）。在新的《歐洲藥典格式指南》中，氣相色譜法相關(guān)的系統(tǒng)適用性試驗(yàn)（SST）說(shuō)明部分也引用了2.2.46章的內(nèi)容。
1.4 采用液相色譜法測(cè)定有機(jī)雜質(zhì)/相關(guān)物質(zhì)時(shí)，系統(tǒng)精密度評(píng)估是否為強(qiáng)制性要求？《歐洲藥典》中無(wú)相關(guān)提及（僅USP有規(guī)定）。
《歐洲藥典》對(duì)系統(tǒng)精密度有通用描述。盡管根據(jù)《歐洲藥典》規(guī)定，系統(tǒng)精密度評(píng)估可能并非強(qiáng)制性要求，但它仍是一項(xiàng)優(yōu)良的SST參數(shù)，尤其在接近定量限的情況下，可用于檢驗(yàn)分析流程的變異性。
1.5 培訓(xùn)中提到，例如可將保留時(shí)間定義為2.0分鐘±0.2分鐘，對(duì)應(yīng)10%的保留時(shí)間變異。那么，在高效液相色譜（HPLC）鑒別試驗(yàn)中，樣品與工作標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間差異最大為10%，這種情況是否可接受？若可接受，應(yīng)遵循哪項(xiàng)指南？
目前尚無(wú)針對(duì)鑒別試驗(yàn)等場(chǎng)景中保留時(shí)間變異性的專項(xiàng)指南。培訓(xùn)中提及的案例僅為一種參考方法，保留時(shí)間的變異性需在依據(jù)文件（甚至分析目標(biāo)譜圖（ATP））中進(jìn)行合理性說(shuō)明。
2.1 針對(duì)分析序列運(yùn)行時(shí)長(zhǎng)較長(zhǎng)的情況，你提到要“重復(fù)進(jìn)行系統(tǒng)適用性測(cè)試（SST）”。那么，例如在序列開(kāi)始時(shí)進(jìn)行5次系統(tǒng)適用性測(cè)試進(jìn)樣，僅在序列末尾進(jìn)行1次標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)樣，并以此計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（%RSD），這種做法是否可行？
對(duì)于“序列開(kāi)始時(shí)進(jìn)行5次系統(tǒng)適用性測(cè)試進(jìn)樣、末尾進(jìn)行1次進(jìn)樣”的方案，我有以下幾點(diǎn)顧慮：
系統(tǒng)適用性測(cè)試（SST）合格前，不得啟動(dòng)樣品分析工作。這意味著必須先計(jì)算前5次進(jìn)樣結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。因此，第6次系統(tǒng)適用性測(cè)試進(jìn)樣無(wú)法納入前5次進(jìn)樣的結(jié)果計(jì)算，因?yàn)闃悠贩治鲈诘?次進(jìn)樣前就已經(jīng)啟動(dòng)。
否則，單次系統(tǒng)適用性測(cè)試（SST）進(jìn)樣不具備實(shí)際意義，因?yàn)闊o(wú)法據(jù)此計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。
針對(duì)這類長(zhǎng)時(shí)長(zhǎng)分析序列的情況，我建議在序列開(kāi)始時(shí)執(zhí)行系統(tǒng)適用性測(cè)試（SST），必要時(shí)可在序列中途再次執(zhí)行。
不過(guò)，最優(yōu)方案是在啟動(dòng)樣品分析前完成系統(tǒng)適用性測(cè)試（SST），并通過(guò)在分析過(guò)程中額外注入對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)品來(lái)監(jiān)控整個(gè)分析序列。對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)品可在分析序列中按固定間隔進(jìn)樣。
2.2 若系統(tǒng)適用性測(cè)試（SST）連續(xù)失敗，例如已失敗2次且第3次嘗試仍未通過(guò)，應(yīng)在何時(shí)停止測(cè)試并啟動(dòng)正式調(diào)查？是否有相關(guān)指導(dǎo)原則或法規(guī)文件對(duì)該情況作出規(guī)定？此類調(diào)查的處理方式是否應(yīng)參照檢驗(yàn)結(jié)果超標(biāo)（OOS）調(diào)查的第一階段流程？
每次系統(tǒng)適用性測(cè)試（SST）失敗后均需開(kāi)展調(diào)查，且應(yīng)在首次測(cè)試失敗后立即啟動(dòng)！
FDA的《檢驗(yàn)結(jié)果超標(biāo)（OOS）處理指導(dǎo)原則》對(duì)此作出如下描述：“若對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)品的響應(yīng)信號(hào)表明分析系統(tǒng)運(yùn)行異常，則可疑時(shí)間段內(nèi)采集的所有數(shù)據(jù)均需明確標(biāo)識(shí)，且不得使用。應(yīng)先查明系統(tǒng)故障原因，若條件允許需予以糾正，之后再?zèng)Q定是否采用可疑時(shí)間段之前采集的任何數(shù)據(jù)。”
此類調(diào)查與檢驗(yàn)結(jié)果超標(biāo)（OOS）后的調(diào)查并不完全相同（但需注意，若部分或全部樣品分析是在系統(tǒng)適用性測(cè)試（SST）不合格的狀態(tài)下完成的，則調(diào)查流程需相應(yīng)調(diào)整）。
2.3 若樣品分析時(shí)長(zhǎng)較長(zhǎng)，系統(tǒng)適用性測(cè)試（SST）應(yīng)多久重復(fù)一次？此外，標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)樣是否也需要重復(fù)進(jìn)行？
對(duì)于超時(shí)長(zhǎng)色譜分析（例如24小時(shí)），可在分析過(guò)程中重復(fù)進(jìn)行系統(tǒng)適用性測(cè)試（SST）。不過(guò)，在完成一定次數(shù)的樣品進(jìn)樣后注入對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)品，監(jiān)控效果可能更佳。需注意的是，若在色譜分析結(jié)束時(shí)進(jìn)行的系統(tǒng)適用性測(cè)試（SST）未通過(guò)，則本次分析所得數(shù)據(jù)均不可使用（詳見(jiàn)問(wèn)題2.2）。
2.4 在含量測(cè)定和有關(guān)物質(zhì)分析中，針對(duì)平行制備的兩份樣品（每份樣品僅進(jìn)樣一次），應(yīng)如何評(píng)估其精密度或結(jié)果一致性？
在方法驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)中，評(píng)估取樣策略的最佳方式是通過(guò)改變分析人員、實(shí)驗(yàn)日期、使用設(shè)備等因素，開(kāi)展中間精密度試驗(yàn)。此外，建議每份樣品制備后至少進(jìn)樣3次，以確定進(jìn)樣重復(fù)性的變異程度?；谏鲜鲈囼?yàn)數(shù)據(jù)，可確定合理的樣品制備份數(shù)及每份樣品的進(jìn)樣次數(shù)（該結(jié)論同樣適用于“平行制備兩份樣品且每份僅進(jìn)樣一次”的情況）。
該策略適用于含量測(cè)定，同時(shí)也適用于雜質(zhì)的檢測(cè)（例如通過(guò)加標(biāo)對(duì)照品的方式進(jìn)行驗(yàn)證）。
2.5 在我們實(shí)驗(yàn)室，會(huì)采用所謂的“首次進(jìn)樣”來(lái)平衡色譜柱。該次進(jìn)樣通常使用緩沖液或溶劑，僅用于色譜柱平衡，相關(guān)數(shù)據(jù)不納入結(jié)果計(jì)算。但目前我們?nèi)狈γ鞔_證據(jù)證明該操作的有效性，請(qǐng)問(wèn)你對(duì)這種做法有何看法？
通常情況下，首次進(jìn)樣會(huì)使用空白溶液，目的是排除可能對(duì)分析結(jié)果產(chǎn)生干擾的因素（例如在雜質(zhì)檢測(cè)項(xiàng)目中）?？瞻兹芤哼M(jìn)樣的數(shù)據(jù)雖不用于系統(tǒng)適用性測(cè)試（SST）的計(jì)算，但可用于排查系統(tǒng)中引入的雜質(zhì)（例如流動(dòng)相雜質(zhì)）。針對(duì)此類情況，可設(shè)定空白峰的峰面積限度，以避免空白峰對(duì)后續(xù)分析物積分結(jié)果造成影響。
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