摘要
該文介紹并分析了美國 FDA《cGMP 生產(chǎn)和過程控制相關(guān)法規(guī)問答》指南文件，通過其中 12 個與微生物控制相關(guān)的問答，從無菌生產(chǎn)工藝藥品、非無菌藥品中的不可接受微生物、藥品微生物控制共性問題及眼用制劑無菌性 4 個方面，探討加強(qiáng)藥品生產(chǎn)過程中微生物控制的方法。對無菌工藝生產(chǎn)的藥品，應(yīng)關(guān)注非傳統(tǒng)微生物污染、培養(yǎng)基模擬灌裝試驗頻率和環(huán)境監(jiān)測 ；對非無菌藥品，應(yīng)建立不可接受微生物的書面程序，并進(jìn)行風(fēng)險評估和控制 ；共性問題包括抑菌效力和局部消毒產(chǎn)品，不可利用抑菌劑降低藥品的初始微生物負(fù)載并予以放行，局部消毒產(chǎn)品也應(yīng)關(guān)注微生物污染風(fēng)險 ；對眼用制劑，應(yīng)確保其生產(chǎn)過程和有效期內(nèi)的無菌性。最后，結(jié)合 ChP 2025 年版的制修訂動態(tài)，提出了制定微生物控制策略的相關(guān)建議，以期提升國內(nèi)藥品的微生物控制水平，降低微生物污染風(fēng)險。
【關(guān)鍵詞】FDA ；風(fēng)險評估 ；微生物控制 ；無菌生產(chǎn)工藝 ；培養(yǎng)基模擬灌裝 ；抑菌效力 ；不可接受微生物 ；眼用制劑
美國 FDA于2024年5月發(fā)布了《cGMP 生產(chǎn)和過程控制相關(guān)法規(guī)問答》(Questions and Answers on Current Good Manufacturing Practice Regulations | Production and Process Controls) 指南文件 ( 以下簡稱“《指南》”)。該《指南》以《聯(lián)邦食品、藥品和化妝品法案》(Federal Food，Drug，and Cosmetic Act，F(xiàn)D&C Act)、《美國聯(lián)邦法規(guī)》第 21 卷 (The Code of Federal Regulations，21 CFR)、《現(xiàn)行藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》(Current Good Manufacturing Practice，cGMP) 及相關(guān)指導(dǎo)原則為依據(jù)，以問答形式表達(dá)了FDA 對涉及藥品生產(chǎn)和過程控制的 23 個問題的觀點(diǎn)，其中也包含了不具有約束力的建議。本文將《指南》中涉及微生物控制的內(nèi)容歸納為 ：無菌生產(chǎn)工藝藥品、非無菌藥品中的不可接受微生物、藥品微生物控制共性問題及眼用制劑的無菌性，從這 4 個方面進(jìn)行介紹和分析，借鑒國外先進(jìn)經(jīng)驗，促進(jìn)國內(nèi)的新藥開發(fā)和過程控制，降低微生物污染風(fēng)險。
01《指南》概述
《指南》中有 12 個問題 ( 表 1) 涉及微生物控制，占比 52％。
由表 1 可知，《指南》中的問題 3、6、10、14、22 涉及無菌產(chǎn)品，問題 11、12、13 涉及局部消毒產(chǎn)品，問題 19、20 涉及非無菌產(chǎn)品，問題 21 涉及微生物控制共性問題，問題23 為無菌產(chǎn)品中的眼用制劑。根據(jù)所討論的內(nèi)容相似性，進(jìn)一步歸納、討論局部消毒產(chǎn)品、抑菌劑和抑菌效力等相關(guān)內(nèi)容。
▲表1-與微生物控制相關(guān)的 12 個問題
02無菌生產(chǎn)工藝藥品
2.1 支原體污染
問題 3 是某企業(yè)在隔離系統(tǒng)內(nèi)開展灌裝工藝的培養(yǎng)基模擬灌裝試驗時，出現(xiàn)多次失敗。該培養(yǎng)基模擬灌裝試驗中，使用的是商品化非無菌散裝干粉TSB( 配制后經(jīng) 0.22 μm 除菌過濾器過濾，制成無菌液體培養(yǎng)基 )。通過傳統(tǒng)微生物學(xué)方法，包括選擇性 ( 如血平板 ) 和非選擇性 [ 如 TSB 和胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基 (tryptic soy agar，TSA)] 培養(yǎng)，以及顯微觀察進(jìn)行調(diào)查溯源，但結(jié)果未能有效分離或回收污染微生物。隨后，使用 16S rRNA 基因鑒定方法，鑒定該污染菌為萊氏無膽甾原體 (Acholeplasma laidlawii)，溯源結(jié)果顯示其源自所使用的 TSB 培養(yǎng)基，即污染菌來自使用的培養(yǎng)基而非生產(chǎn)工藝。
萊氏無膽甾原體屬于支原體，僅包含細(xì)胞膜，無細(xì)胞壁，對 β- 內(nèi)酰胺類藥物不敏感，也不吸收革蘭染色液 ；其單個生物體呈多形性 ( 如球狀、棒狀、細(xì)絲狀等各種形狀 )，能穿透 0.2 μm 過濾器，但可被 0.1 μm 的過濾器截留 [1]。萊氏無膽甾原體與動物來源的材料有關(guān)，而微生物培養(yǎng)基包含動物源性成分。目前，該企業(yè)已采用 0.1 μm 過濾器過濾制備TSB 用于培養(yǎng)基模擬灌裝試驗 ( 注意 ：FDA 不希望或不要求企業(yè)定期使用 0.1 μm 過濾器制備培養(yǎng)基 )；并且，采用選擇性培養(yǎng)基 [ 如 Pleuropneumonia-Like Organisms (PPLO) 液體瓊脂培養(yǎng)基 ] 監(jiān)測支原體，以及重新進(jìn)行清潔驗證以證明其去除情況。若培養(yǎng)基供應(yīng)商能提供經(jīng)輻照處理的無菌 TSB，企業(yè)可優(yōu)先考慮選用，以降低微生物污染風(fēng)險。
該案例中，企業(yè)通過徹底調(diào)查，確定了污染的根本原因并采取了適當(dāng)?shù)募m正措施。
2.2 螺旋體污染
鉤端螺旋體是需氧革蘭陰性螺旋菌，使用氧氣作為電子受體，長鏈脂肪酸作為主要能量來源。鉤端螺旋體可分為致病性和非致病性兩大類，前者能引起人和動物的鉤端螺旋體病 [2]。當(dāng)前，鉤端螺旋體污染并不多見，因為細(xì)胞培養(yǎng)后的純化工藝能防止其殘留在成品原料藥中。對報告案例相關(guān)產(chǎn)品的原料藥檢測中未檢出鉤端螺旋體，且在已知的案例研究中也未發(fā)現(xiàn)其影響產(chǎn)品質(zhì)量的情況。
然而，F(xiàn)DA 提供此信息是為了提醒生產(chǎn)企業(yè)，這類微生物可能會造成以下影響 ：①穿透除菌級膜式過濾器 ；②出現(xiàn)在生產(chǎn)現(xiàn)場環(huán)境中 ；③影響產(chǎn)品生產(chǎn) ( 如影響產(chǎn)量、雜質(zhì)水平、工藝性能等 )。由于當(dāng)前藥典收載的生物負(fù)載測試對該類微生物存在局限性，因此未在檢測中發(fā)現(xiàn)。作為一般原則，生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)采用合理的風(fēng)險管理，并了解已報道的可能影響生產(chǎn)工藝 ( 如細(xì)胞培養(yǎng)生物技術(shù)、傳統(tǒng)無菌藥品生產(chǎn) ) 的異常微生物類群。生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)評估自身特點(diǎn)，了解潛在風(fēng)險，并在了解可能或新出現(xiàn)的污染風(fēng)險基礎(chǔ)上，實施適當(dāng)?shù)娘L(fēng)險管理。在產(chǎn)品和工藝生命周期中，生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)酌情實施預(yù)防措施。如果可能存在或已發(fā)生鉤端螺旋體污染，為了說明該微生物的風(fēng)險情況，糾正程序和措施應(yīng)至少包括以下內(nèi)容。①回顧已發(fā)表的相關(guān)文獻(xiàn)和技術(shù)報告。②必要時使用分子生物學(xué)方法或非常規(guī)微生物監(jiān)測方法，檢測可能存在于生產(chǎn)工藝或直接環(huán)境中的、難以檢測的鉤端螺旋體。例如，采用 EMJH 培養(yǎng)基或其他適宜的專用培養(yǎng)基，使用經(jīng)驗證的 PCR 法快速篩查和檢測螺旋體 ；或考慮使用特殊染色技術(shù)或其他方法進(jìn)行鑒別。需要注意的是，這類微生物的生長通常非常緩慢。
2.3 培養(yǎng)基模擬灌裝試驗頻率
企業(yè)應(yīng)基于風(fēng)險管理，依據(jù)操作類型和培養(yǎng)基灌裝工藝設(shè)計，合理設(shè)置與輪班相關(guān)的培養(yǎng)基模擬灌裝試驗頻率。對于多班次運(yùn)行的封閉式、高度自動化系統(tǒng)，具有嚴(yán)格培養(yǎng)基灌裝工藝設(shè)計的企業(yè)可減少培養(yǎng)基模擬灌裝試驗頻次，但須確保每條無菌工藝生產(chǎn)線至少每半年進(jìn)行 1 次培養(yǎng)基模擬灌裝試驗。FDA 在 2004 年發(fā)布的行業(yè)指南《用無菌工藝生產(chǎn)的無菌藥品》指出 ：代表每個班次和班次轉(zhuǎn)換的技術(shù)及干預(yù)措施應(yīng)納入半年 1 次的工藝確認(rèn)計劃的設(shè)計中。此外，EU GMP 附錄 1《無菌藥品的生產(chǎn)》規(guī)定 ：無菌藥品的生產(chǎn)通常每個班次和每個工藝應(yīng)每年重復(fù) 2 次培養(yǎng)基模擬灌裝工藝測試。
某些生產(chǎn)設(shè)計 ( 隔離系統(tǒng)和密閉樣品瓶灌裝 )可在整個生產(chǎn)工藝中將無菌工藝與微生物污染風(fēng)險( 如操作員和周圍房間環(huán)境 ) 隔離。對于此類封閉系統(tǒng)，若生產(chǎn)設(shè)備的設(shè)計具備穩(wěn)健性且生產(chǎn)過程中的手動操作范圍已實現(xiàn)最小化，企業(yè)在確定培養(yǎng)基模擬灌裝驗證方法時可進(jìn)行如下考慮 ：預(yù)計每年對采用兩班制運(yùn)行的傳統(tǒng)無菌工藝生產(chǎn)線開展 2 次評估，最終完成 4 次培養(yǎng)基模擬灌裝試驗。但是，對于在隔離系統(tǒng)中分 2 班次進(jìn)行的無菌灌裝工藝，每年執(zhí)行少于 4 次的培養(yǎng)基模擬灌裝試驗也是合理的，同時仍需每半年評估 1 次生產(chǎn)線，以確保無菌工藝處于持續(xù)受控狀態(tài)。較低的培養(yǎng)基模擬灌裝試驗運(yùn)行總數(shù)應(yīng)基于合理的風(fēng)險評估，如果出現(xiàn)污染問題( 例如產(chǎn)品無菌檢查失敗、培養(yǎng)基模擬灌裝試驗失敗、任何有問題的環(huán)境趨勢 )，都需要重新進(jìn)行評估。以上情形不適用于限制訪問屏障系統(tǒng) (restricted access barrier systems，RABS)。
2.4 環(huán)境監(jiān)測
從 cGMP 角度看，無菌生產(chǎn)工藝藥品的生產(chǎn)企業(yè)在進(jìn)行設(shè)施確認(rèn)時，僅依據(jù) ISO 14644-1 和 ISO 14644-2 標(biāo)準(zhǔn)是不可接受的。實際上，企業(yè)應(yīng)將這些ISO 標(biāo)準(zhǔn)與適用的 FDA 法規(guī)、指南及其他相關(guān)參考資料結(jié)合應(yīng)用，以確保潔凈環(huán)境處于恰當(dāng)?shù)氖芸貭顟B(tài)。企業(yè)應(yīng)采取適當(dāng)措施強(qiáng)化 ISO 的建議 ( 例如使用微生物數(shù)據(jù) )，從而使制藥設(shè)施不低于 cGMP 要求。
2.5 參數(shù)放行
參數(shù)放行僅適用于最終滅菌的藥品。盡管最終滅菌和無菌生產(chǎn)工藝生產(chǎn)的每批藥品在上市前均須符合無菌檢查要求，但這 2 種工藝生產(chǎn)的藥品間存在內(nèi)在差異。
最終滅菌藥品是由滅菌器在其最終密封容器中進(jìn)行滅菌。在生產(chǎn)過程中，要以較高的精度和準(zhǔn)確度對離散的物理參數(shù) ( 即關(guān)鍵工藝參數(shù)，如溫度、壓力和時間等 ) 進(jìn)行連續(xù)監(jiān)測和控制。參數(shù)放行是一種基于關(guān)鍵工藝參數(shù)監(jiān)控替代最終產(chǎn)品檢驗的無菌放行程序。監(jiān)視器在參數(shù)放行中扮演核心角色，通過持續(xù)監(jiān)測關(guān)鍵工藝參數(shù)來證明滅菌物品已暴露于規(guī)定的物理條件。這使得生產(chǎn)企業(yè)能夠?qū)缇芷趨?shù)的遵守情況與監(jiān)測數(shù)據(jù)相結(jié)合，以確定熱致死率，從而直接確認(rèn)藥品的無菌性并替代無菌檢查。
相比之下，無菌生產(chǎn)工藝不會對最終密封容器中的藥品進(jìn)行滅菌操作。在整個無菌生產(chǎn)操作中，依賴間接監(jiān)測方法來評估和保障藥品的無菌性。在100 級潔凈度 ( 對應(yīng) ISO 5) 環(huán)境中執(zhí)行除菌過濾工藝后，潔凈度后續(xù)操作 ( 如灌裝 ) 前須確保過濾系統(tǒng)完整性、環(huán)境控制及工藝驗證符合要求，以維持無菌保證水平。在這些環(huán)境中，偶然事件可能會在生產(chǎn)過程中帶來微生物污染風(fēng)險。然而，無菌生產(chǎn)工藝中的間接測量能提供的信息有限，無法得出該批次產(chǎn)品是否無菌的結(jié)論。雖然在封閉的 RABS 和隔離系統(tǒng)中進(jìn)行的現(xiàn)代無菌操作技術(shù)比傳統(tǒng)的潔凈室和開放式 RABS 操作具有更高的穩(wěn)定性，但也可能會發(fā)生無菌和培養(yǎng)基模擬灌裝試驗失敗的情況。因此，無菌檢查是監(jiān)測無菌操作控制狀態(tài)的基本要素，是一系列基本的必須控制措施的最后一步，這些控制措施需協(xié)同作用，以保證通過給定的生產(chǎn)操作規(guī)程生產(chǎn)的藥品符合無菌性要求。無菌檢查還可在一定程度上預(yù)防被污染的無菌藥品放行，防止造成嚴(yán)重的安全問題，保護(hù)患者的健康。
所有的質(zhì)量控制試驗 ( 包括無菌檢查 ) 都有局限性。盡管無菌檢查可能無法詳盡地評估每批產(chǎn)品的無菌性，但仍然是綜合控制策略的關(guān)鍵組成部分。該策略旨在防止無菌藥品受到微生物污染。無菌檢查方面的技術(shù)創(chuàng)新 ( 如快速微生物檢測方法、基因分型 ) 可能會進(jìn)一步改善生產(chǎn)操作時的即時反饋，從而提高批次放行效率。與此同時，須確保這些創(chuàng)新方法的檢測能力與藥典方法相當(dāng)或更好。FDA 鼓勵將有益的檢測技術(shù)創(chuàng)新與先進(jìn)的生產(chǎn)技術(shù) ( 如機(jī)器人隔離器 ) 結(jié)合使用，以改進(jìn)工藝設(shè)計并提高微生物檢測和鑒定結(jié)果的準(zhǔn)確性。
03非無菌藥品中的不可接受微生物
cGMP 要求建立非無菌藥品中不可接受微生物的書面程序。每個藥品生產(chǎn)企業(yè)都需結(jié)合自身具體情況，對“不可接受”一詞的含義進(jìn)行評估——這一評估主要針對微生物污染物，需綜合考量微生物的種類、數(shù)量，以及藥品的劑型、預(yù)期用途、適用人群和給藥途徑等因素，以明確其對產(chǎn)品質(zhì)量的影響。
被評估為不可接受微生物的原因可能是多方面的。例如，可能是已知的致病菌，可能會影響產(chǎn)品穩(wěn)定性，可能會與容器密封系統(tǒng)發(fā)生反應(yīng)或損害其完整性 ( 例如發(fā)酵產(chǎn)生的氣體會導(dǎo)致藥品容器破裂或密封性被破壞 )，也可能會干擾分析方法或活性成分生物利用度。
建立生產(chǎn)工藝時限和存放時限是防止不可接受微生物生長的控制措施之一，企業(yè)必須確定并遵守完成每個生產(chǎn)階段的時限 ( 如適用 )。例如，若企業(yè)認(rèn)為某散裝的外用或液體產(chǎn)品有必要存放數(shù)月，則應(yīng)設(shè)定存放時限，以防止不可接受微生物聚集、生長。對某些外用產(chǎn)品所用的純化水系統(tǒng)的生物負(fù)載進(jìn)行驗證與控制，同樣是這類程序的示例。
04藥品微生物控制共性問題
4.1 抑菌效力問題
4.1.1 抑菌劑
抑菌劑不能代替 GMP 管理，也不能用于降低多劑量包裝制劑滅菌或除菌前的生物負(fù)載。藥品生產(chǎn)企業(yè)不應(yīng)依賴抑菌劑將初始微生物計數(shù)不合格的樣品處理至符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的范圍后再放行藥品，即便后續(xù)檢測結(jié)果符合標(biāo)準(zhǔn)要求，微生物超標(biāo)的初始檢測結(jié)果仍不應(yīng)被忽視。對于初始檢測結(jié)果不合格的情況，F(xiàn)DA 希望生產(chǎn)企業(yè)拒絕放行。生產(chǎn)企業(yè)在檢測產(chǎn)品之前不恰當(dāng)?shù)亻L時間 ( 如數(shù)周 ) 存放產(chǎn)品，這種做法也是不可接受的，因為這樣可能會通過抑菌劑的作用降低生產(chǎn)過程中引入的生物負(fù)載，從而導(dǎo)致不合規(guī)的檢測結(jié)果。最后，藥品生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)審查其生產(chǎn)工藝，以確定可能將污染微生物引入工藝或藥品的程序或設(shè)備。
4.1.2 抑菌效力
新藥開發(fā)階段進(jìn)行抑菌效力測試，以確定抑菌劑的最低有效量。一旦確定了抑菌劑的最低有效量，就可以建立適當(dāng)?shù)臋z測標(biāo)準(zhǔn)。在藥品上市階段，可通過在藥品放行和有效期內(nèi)的穩(wěn)定性考察測定抑菌劑含量，以反映抑菌效力。
4.2 局部消毒產(chǎn)品
4.2.1 關(guān)注局部消毒產(chǎn)品的微生物污染情況
FDA 已公布了若干局部消毒藥品 ( 例如用于注射前皮膚消毒的酒精棉片或棉簽 ) 的不可接受微生物污染事件。微生物污染可能是由不合規(guī)的生產(chǎn)導(dǎo)致的，而這種污染與感染等安全風(fēng)險相關(guān)。文獻(xiàn)[3-4]和美國疾病預(yù)防和控制中心均報告了與使用受污染的局部消毒藥品相關(guān)的微生物污染事件，導(dǎo)致一些產(chǎn)品被召回。報告事件的范圍囊括了注射部位的局部感染和導(dǎo)致死亡的全身感染。FDA 已審查了 4 例死亡、5 例傷口感染、7 例腹膜炎、10 例化膿性關(guān)節(jié)炎、14 例需要更換的留置導(dǎo)管、16 例注射部位感染和 32 例菌血癥的報告，這些感染均已被證實是由受污染的局部消毒產(chǎn)品引起的 [5]。這些產(chǎn)品所用的消毒成分包括乙醇、碘伏、葡萄糖酸氯己定和季銨鹽類物質(zhì) ；與污染相關(guān)的微生物包括蠟樣芽孢桿菌、洋蔥伯克霍爾德菌、銅綠假單胞菌、木糖氧化無色桿菌、皮氏羅爾斯通菌、黏質(zhì)沙雷菌和膿腫分枝桿菌。FDA 要求變更一些外用抗菌產(chǎn)品 ( 非處方藥 ) 的標(biāo)簽和一次性包裝，以降低微生物污染風(fēng)險。
4.2.2 局部消毒產(chǎn)品的評估
導(dǎo)致局部消毒產(chǎn)品受到微生物污染的根本原因多種多樣，生產(chǎn)企業(yè)必須開展風(fēng)險評估，從而明確生產(chǎn)環(huán)節(jié)中存在的問題并落實相應(yīng)的預(yù)防措施。此外，研究人員認(rèn)識到任何風(fēng)險評估方法在評估應(yīng)充分了解相關(guān)消毒產(chǎn)品的微生物污染時都存在一定的局限性。例如，生產(chǎn)企業(yè)需要考慮以下方面 ( 包括但不限于 )。(1) 確定可能在產(chǎn)品中存活或繁殖的微生物類型。(2) 根據(jù)風(fēng)險評估結(jié)果提供額外的控制和檢測手段，以確保產(chǎn)品質(zhì)量。(3) 確保微生物回收方法能夠檢測可能影響產(chǎn)品質(zhì)量的微生物類型。(4)評估組件污染的風(fēng)險，包括組件生產(chǎn)、貯存期間或原材料的內(nèi)在風(fēng)險。(5) 考慮所有可能的微生物污染來源 ：①貯存在敞口容器中的組件或產(chǎn)品可能面臨被芽孢類微生物 ( 如蠟樣芽孢桿菌 )、沙雷菌屬和其他不可接受的空氣傳播微生物污染的風(fēng)險。暴露
于多風(fēng)或惡劣的供熱通風(fēng)與空調(diào) (heating ventilation and air conditioning，HVAC) 條件下的生產(chǎn)區(qū)域可能會增加這種微生物污染的風(fēng)險。②某些天然來源的材料，可能存在包括不可接受微生物在內(nèi)的較高生物負(fù)載。③制藥用水可能存在重大安全風(fēng)險，它是大多數(shù)消毒劑的關(guān)鍵成分，并且很容易受到微生物污染。使用受污染的純化水是局部消毒產(chǎn)品多次被召回的根本原因，其中包括被洋蔥伯克霍爾德菌污染的局部消毒產(chǎn)品。④不衛(wèi)生的做法或來源。⑤在高濕度區(qū)域生產(chǎn)時，可能存在霉菌污染的風(fēng)險。
4.2.3 局部消毒產(chǎn)品的微生物污染控制要求
FD&C Act 第 501(a)(2)(B) 節(jié)要求所有藥品的生產(chǎn)都必須符合 cGMP。21 CFR 第 210 和 211 部分規(guī)定，針對藥品的 cGMP 法規(guī)同時適用于非處方藥和處方藥。cGMP 法規(guī)是進(jìn)行可靠生產(chǎn)的最低法規(guī)要求，局部消毒產(chǎn)品也應(yīng)遵循相關(guān)微生物污染控制的要求。
05眼用制劑的無菌性
無菌性是眼用藥品的關(guān)鍵質(zhì)量屬性，若多劑量眼用制劑不是在無菌條件下生產(chǎn)的，F(xiàn)DA 將認(rèn)定其為“假藥”。最近已報道的受微生物污染的眼用藥品導(dǎo)致嚴(yán)重傷害和死亡的案例，以及相關(guān)召回事件，凸顯了眼用制劑無菌性的重要性。藥品 ( 包括提供或擬用于眼科的無菌產(chǎn)品 ) 生產(chǎn)企業(yè)必須遵守 21 CFR 第 210 和 211 部分的 cGMP 要求。若不遵守這些要求，根據(jù) FD&C Act 第 501(a)(2)(B) 節(jié)的規(guī)定，這些受影響的產(chǎn)品將被視為“假藥”。
無菌藥品必須滿足 cGMP 對人員、廠房和設(shè)施、材料、生產(chǎn)和控制、檢測 ( 視情況而定 ) 的特定要求，以確保藥品在生產(chǎn)時和整個保質(zhì)期內(nèi)的無菌狀態(tài)。FDA 指南中已闡明生產(chǎn)企業(yè)在使用無菌工藝生產(chǎn)藥品和眼用制劑時，應(yīng)如何滿足 21 CFR 第 210 和211 部分的 cGMP 要求。
當(dāng)使用抑菌劑來維持多劑量眼用制劑的無菌性時，生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)證明抑菌劑具有足夠的抑菌效力，可在產(chǎn)品有效期內(nèi)和使用過程中抑制微生物的生長 ；應(yīng)在放行時和整個有效期內(nèi)對藥品進(jìn)行檢測，以確認(rèn)其含有足量的抑菌劑以抑制微生物生長。
06分析與討論
無菌生產(chǎn)工藝的特殊性在于需要進(jìn)行批生產(chǎn)或持續(xù)生產(chǎn)過程的工藝模擬試驗 [6]。對于無菌藥品的生產(chǎn)，需要關(guān)注環(huán)境監(jiān)測、培養(yǎng)基模擬灌裝試驗等方面，建立有效的無菌保障體系，通過穩(wěn)健的污染控制策略 (contamination control strategy，CCS)，實現(xiàn)生產(chǎn)過程中的微生物控制。無菌生產(chǎn)工藝的驗證，主要包括除菌過濾工藝驗證及無菌工藝模擬試驗 [7]。后者應(yīng)進(jìn)行合理的設(shè)計，關(guān)注不同班次的模擬試驗頻次、最差條件和干預(yù)的影響、模擬介質(zhì)等環(huán)節(jié) [8-9]。因藥品生產(chǎn)環(huán)境中微生物具有多樣性，傳統(tǒng)微生物檢驗方法在應(yīng)對新問題時存在局限性。采用 PCR、16S rRNA 序列分析、內(nèi)在轉(zhuǎn)錄間隔 (internal transcribed spacer，ITS) 等現(xiàn)代基因型微生物鑒定技術(shù)，以及特定微生物分析方法 [10-12]，可突破制藥行業(yè)以往側(cè)重需氧菌、霉菌和酵母菌的固有微生物分類體系。應(yīng)從全面的微生物系統(tǒng)分類學(xué)維度出發(fā)，考慮污染的可能來源 ( 包括某些支原體和螺旋體等 )，對無菌生產(chǎn)工藝涉及的微生物開展溯源調(diào)查，以期找到微生物數(shù)據(jù)偏差 (microbial data deviation，MDD) 的根本原因，不斷提升風(fēng)險識別、評估與處置能力 [13-15]。由于無菌檢查的局限性，制藥行業(yè)及藥品監(jiān)管部門探索了實施參數(shù)放行的可行性。盡管我國目前暫未實施參數(shù)放行 [7]，但參數(shù)放行的理念及其推廣應(yīng)用對行業(yè)發(fā)展的意義重大 [16]。參數(shù)放行是一種監(jiān)管前置的模式 [17]，在具備可靠的風(fēng)險管理體系與成熟的滅菌工藝前提下，采用最終濕熱滅菌工藝的藥品將有望逐步滿足參數(shù)放行的實施條件。
不可接受微生物會對藥品的理化特性、功能療效等屬性產(chǎn)生不利影響，或在特定給藥途徑下對患者健康造成損害。不可接受微生物側(cè)重于藥典控制菌之外的微生物 [18-19]，是 2012—2023 年 FDA 微生物污染相關(guān)的非無菌藥品召回的主要原因之一 [20]。ChP 2025年版四部新增了通則 9212“非無菌藥品不可接受微生物風(fēng)險評估與控制指導(dǎo)原則”，明確了不可接受微生物的定義，規(guī)范了風(fēng)險評估的方法及判斷依據(jù)，提出了控制策略。這將推動不可接受微生物控制理念的落實，進(jìn)一步完善我國藥品微生物控制標(biāo)準(zhǔn)體系 [21-23]。對于不同的非無菌制劑，判斷某種微生物是可接受還是不可接受，應(yīng)基于風(fēng)險評估作出決策，要根據(jù)藥品的特性如水分活度 [24]、給藥途徑、用藥人群、生產(chǎn)工藝等進(jìn)行綜合評估。ChP 2025 年版四部新增的通則 9211“非無菌藥品微生物控制中水分活度應(yīng)用指導(dǎo)原則”，可作為一種風(fēng)險評估的關(guān)鍵工具，指導(dǎo)企業(yè)建立合理的微生物控制策略。風(fēng)險評估時尤其要關(guān)注高水分活度的非無菌產(chǎn)品，包括一些本身具有抑菌能力的產(chǎn)品 [25]，如局部消毒產(chǎn)品。洋蔥伯克霍爾德菌是非無菌水基質(zhì)產(chǎn)品中的常見不可接受微生物 [26]，特別是水分活度大于 0.75 的藥品，如洗劑、口服液、凝膠劑、露劑、糖漿劑、煎膏劑等。2019 年，國家藥典委員會對非無菌產(chǎn)品中的洋蔥伯克霍爾德菌檢查方法進(jìn)行了課題立項，并于 2021 年完成課題研究 [18, 27-28]。在此基礎(chǔ)上，ChP 2025 年版四部新增了通則 1109“洋蔥伯克霍爾德菌群檢查法”。洋蔥伯克霍爾德菌等不可接受微生物的主要來源是水系統(tǒng)，尤其是水系統(tǒng)中的生物膜 [29-31]。因此，研究制藥用水系統(tǒng)中的主要微生物類型及控制措施 [32-34]，是非無菌藥品微生物污染控制的關(guān)鍵之一。ChP 2025 年版四部新增的通則 9209“制藥用水微生物監(jiān)測和控制指導(dǎo)原則”將為藥品生產(chǎn)企業(yè)加強(qiáng)制藥用水全過程的微生物控制提供指導(dǎo)。抑菌效力檢查應(yīng)是新藥開發(fā)階段的研究性試驗，而非日常產(chǎn)品放行的檢查試驗。在日常放行和穩(wěn)定性考察中，一方面應(yīng)監(jiān)測抑菌劑的濃度變化，評價抑菌效力的保持情況 ( 例如在穩(wěn)定性考察中，可通過微生物限度或抑菌效力檢查與水分活度測定相結(jié)合的方式優(yōu)化實驗設(shè)計 ) ；另一方面，宜嚴(yán)格執(zhí)行放行標(biāo)準(zhǔn)，產(chǎn)品生產(chǎn)后應(yīng)盡快檢驗，不應(yīng)依賴產(chǎn)品本身的抑菌效力降低初始生物負(fù)載，以免造成產(chǎn)品符合規(guī)定的假象。
眼用制劑作為無菌制劑，微生物污染風(fēng)險較高。由于制劑自身特性及與藥液接觸的包材制約 [35]，眼用制劑多采用無菌生產(chǎn)工藝生產(chǎn)，即對原料、輔料、藥包材等分步或混合滅菌而后再于無菌條件下進(jìn)行分裝生產(chǎn)。這對潔凈環(huán)境、生產(chǎn)設(shè)備、生產(chǎn)人員 [36]、無菌操作等方面均提出了較高要求。藥品生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)結(jié)合國內(nèi)外指南 ( 例如 FDA《局部外用眼科藥品的質(zhì)量考慮》[37]，F(xiàn)DA《無菌生產(chǎn)工藝藥品行業(yè)指南》，EU GMP 附錄 1《無菌藥品的生產(chǎn)》，《化學(xué)藥品仿制藥溶液型滴眼劑藥學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則》等 )要求，設(shè)計和建立適用于眼用制劑生產(chǎn)的污染控制策略，以保證眼用制劑的無菌性。
借鑒 FDA《指南》表述的監(jiān)管觀點(diǎn)，對于強(qiáng)化我國藥品微生物控制能力，提高藥品質(zhì)量具有現(xiàn)實意義?！吨改稀分幸昧?FD&C Act 和 21 CFR 的諸多條款，受篇幅所限，相關(guān)引用內(nèi)容未詳列。
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