所有藥物，包括生物制品和小分子藥物在上市前都需要完成不同專業(yè)領(lǐng)域的研究，包括化學、生產(chǎn)和控制（CMC）、非臨床（藥代動力學、藥理學、毒理學）以及臨床（健康人/患者藥理學和醫(yī)學）研究，證明其安全、有效且質(zhì)量可控。其中，非臨床試驗是藥物開發(fā)中不可或缺的一部分，其主要目標是確保藥物候選物在用于人體研究時是安全的。由于治療性蛋白藥物的性質(zhì)、種屬特異性和免疫原性，生物制品的非臨床研究內(nèi)容通常與小分子項目有所不同。本文主要分享下支持小分子藥物和生物制品上市所需的非臨床研究之間的關(guān)鍵差異和相似之處。
歐盟和美國在藥物審批流程上存在差異。然而，對于這兩個地區(qū)，無論是美國的新藥臨床試驗申請（IND）還是歐盟的臨床試驗授權(quán)（CTA）申請，都要求進行非臨床試驗，才能進入臨床試驗階段。非臨床研究在藥物開發(fā)中起著關(guān)鍵作用。一般來說，非臨床研究的目的是確保候選藥物在用于人體研究時是安全的。非臨床研究提供劑量（初始安全劑量以及后續(xù)人體劑量遞增方案）和毒性數(shù)據(jù)，以支持首次人體研究，并識別潛在的毒性靶器官以及停藥后的潛在可逆性。此外，它們還確定免疫原性和臨床監(jiān)測的安全性參數(shù)，并建立臨床研究中難以評估的毒性終點，如遺傳毒性、生殖毒性以及致癌性，這些內(nèi)容將包含在產(chǎn)品標簽中。雖然有些非臨床研究可以在開始臨床試驗后進行，但大多數(shù)需要在首次人體試驗之前完成，以盡量減少臨床試驗參與者的風險。
非臨床評估通常包括多種研究：藥理學、一般毒性、生殖毒性、遺傳毒性、毒代動力學和非臨床藥代動力學等。藥理學研究包括主要藥效學、次要藥效學和安全性藥理學研究。主要藥效學研究旨在調(diào)查受試物對預期治療靶點的作用機制和/或效果，主要藥效學活性通過體外和/或體內(nèi)實驗進行評估。體外研究旨在考察對目標靶點的藥理學活性。相比于小分子，生物藥還需要在體外研究中考察與不同種屬的靶點親和力、活性等，幫助體內(nèi)毒理研究種屬的選擇。相比之下，體內(nèi)實驗則用于解釋作用機制并在不同藥效模型中評估藥理學活性。
次要藥效學研究的目的是調(diào)查候選藥物與預期治療靶點無關(guān)的作用機制和/或效果，即脫靶作用。小分子因特異性通常較差，需要重點開展次藥藥效學的評估。生物藥對治療靶點具有高特異性，通常不用開展。當然，對于高活性藥物，比如ADC、CAR-T等，脫靶研究也是必要的。
核心安全性藥理學研究包括對呼吸系統(tǒng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)和心血管系統(tǒng)的影響評估，通常應(yīng)在首次人體試驗之前進行。必要時，如需開展補充性和后續(xù)的安全性藥理學研究，可以在后期臨床開發(fā)中進行。
藥代動力學（PK）方面，對于小分子藥物，可以使用放射性標記或未標記藥物在多種種屬中進行充分的體內(nèi)和體外吸收、分布、代謝和排泄（ADME）表征。其中，代謝數(shù)據(jù)可以為小分子相關(guān)動物種屬的選擇提供依據(jù)。對于生物藥物，不像小分子藥物那樣通過CYP 450系統(tǒng)代謝，因此只需要開展有限的ADME有研究，通常僅開展體內(nèi)PK研究。
此外，非臨床安全性評估還可以提示存在風險的人群。對于預期長期使用或有特殊擔憂的藥物，會進行致癌風險評估。許多其他非臨床研究（例如免疫毒性、光毒性、幼年動物毒性或依賴性研究）則根據(jù)具體情況開展。
其它方面，小分子和生物藥在免疫原性、遺傳毒性、組織交叉反應(yīng)試驗等方面也有所區(qū)別。
個中細節(jié)差異，具體來看下。
新分子實體（NME）
臨床前研究是藥物開發(fā)過程中至關(guān)重要的環(huán)節(jié)，其主要目標是：1）明確NME的靶器官毒性；2）闡明不良反應(yīng)與藥物暴露量、劑量依賴性的關(guān)系；3）評估不良反應(yīng)的可逆性。
這些研究數(shù)據(jù)用于：通過異速縮放法（allometric scaling）估算人體臨床試驗的安全起始劑量；確定臨床試驗中需重點監(jiān)測的潛在不良反應(yīng)指標。
臨床前研究通常分為兩大類：藥理學研究、藥代動力學研究、毒理學研究。通常先進行藥理學研究，因其對不良反應(yīng)的初步發(fā)現(xiàn)可指導后續(xù)毒理學試驗的設(shè)計。
1.藥理學研究
1.1主要藥效學研究
化藥大都作用于細胞內(nèi)，故體外多會開展一些對關(guān)鍵激酶、蛋白、信號通路的影響研究，明確作用的強度和機制。細胞學活性也是常用評估手段。體內(nèi)藥效則與生物藥在模型上比較相似，可能的區(qū)別體現(xiàn)在生物藥多結(jié)合在細胞胞外區(qū)，很多靶點的種屬間序列一致性，尤其靶蛋白結(jié)合區(qū)域可能存在種屬區(qū)別，有些動物模型不如小分子用起來方便。
1.2 次要藥效學研究
相較于生物藥，小分子化藥的特異性并不好，超過一半的小分子藥物至少結(jié)合5個不同靶點。真實數(shù)字可能更高，畢竟大部分藥物只開展了有限的靶點結(jié)合驗證，實際潛在靶點卻超過數(shù)千個。多靶點結(jié)合帶來的多藥理作用并不完全是壞事，有可能使藥物具有多個適應(yīng)癥，比如阿司匹林，結(jié)合23個不同靶點，調(diào)節(jié)多條信號通路，在抗炎、解熱鎮(zhèn)痛、心血管疾病中均發(fā)揮作用。也有藥物因為脫靶結(jié)合而退市，比如抑制hERG或激活5-HT2b受體引發(fā)心臟安全性風險的藥物。
次要藥效學研究有一個基本的panel組合，是基于Bowes、Lynch等人早期研究建立的一個組合，包括44個靶點。除了以上靶點外，根據(jù)對18家國際藥企調(diào)研結(jié)果，還有額外33個新的靶點也建議添加到次要藥理學研究的組合中。具體靶點清單、脫靶累及的組織或器官以及靶點激活或抑制潛在引發(fā)的毒性總結(jié)在下表之中。
1.3安全藥理學研究
本部分旨在評估藥物對關(guān)鍵生命功能系統(tǒng)的潛在不良影響。根據(jù)ICH S7A指南，核心組合（core battery）必須包括以下三大系統(tǒng)：
需要注意的是，核心組合可能無法覆蓋所有潛在風險。若基于藥物類別、前期研究或臨床數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)其他安全性擔憂（如腎臟、泌尿、胃腸功能影響），應(yīng)開展補充性安全藥理學研究（supplemental studies）。
另外，安全藥理學研究存在一些豁免情況。在以下情形中，首次人體給藥前可能無需進行完整安全藥理學研究：1）局部用藥（如外用、滴眼劑）：若已證明其全身暴露極低且藥理作用明確；2）用于終末期癌癥患者的細胞毒藥物，但若其作用機制新穎，仍建議開展相關(guān)研究以識別非預期毒性。
安全藥理學評估應(yīng)在首次人體試驗（FIH）之前。若重復給藥毒性試驗（如28天或90天研究）已充分涵蓋核心系統(tǒng)的功能終點（如持續(xù)監(jiān)測心電、行為、呼吸等），則可減少或免除單獨的安全藥理學試驗。不過，從一些成熟案例來看，大部分小分子化藥選擇單獨開展安全藥理學研究。如下表所示，37款化藥中，25款選擇了單獨開展的形式。
2.藥代動力學（PK）與毒代動力學（TK）研究
PK研究旨在獲取候選藥物的全身暴露程度與持續(xù)時間信息，是臨床前開發(fā)核心藥理學組成部分，通常采用放射性標記與非標記藥物，在多種動物中開展體內(nèi)、體外實驗。TK則是在臨床前毒性研究中整合獲取PK數(shù)據(jù)（或通過專門設(shè)計的支持性研究），用于評估藥物全身暴露水平，為毒性結(jié)果解讀及臨床安全性關(guān)聯(lián)分析提供依據(jù)，其數(shù)據(jù)通常嵌入毒性研究中同步收集。
臨床前PK與代謝研究的多個組成部分均有助于毒性結(jié)果的解讀，但TK數(shù)據(jù)更聚焦于毒性研究特定條件下候選藥物的動力學特征。PK研究的核心目標是闡明藥物的吸收、分布、代謝與排泄（ADME）過程。
2.1 ADME各環(huán)節(jié)研究要點
吸收（Absorption）
臨床前吸收特性研究通常通過給藥后連續(xù)測定血液和尿液中的藥物濃度，評估吸收程度與速率。需同時開展靜脈給藥研究作為參比標準，核心評價的PK參數(shù)包括：血漿藥物濃度-時間曲線下面積（AUC）、最大血漿濃度（Cmax）及給藥后特定時間點的血漿濃度（Ctime）。生物利用度指藥物到達全身循環(huán)的量，其高低取決于藥物的吸收程度及進入全身循環(huán)前的代謝水平。
分布（Distribution）
分布研究旨在明確藥物及/或其代謝產(chǎn)物在組織中的蓄積與消除程度及時間進程，通常通過給藥后特定時間點處死實驗動物，測定目標組織中的藥物/代謝產(chǎn)物濃度實現(xiàn)。常規(guī)開展單次給藥分布研究，在以下場景需考慮重復給藥分布研究：1）單次給藥組織分布研究顯示，藥物（及/或代謝產(chǎn)物）在器官/組織中的表觀半衰期顯著長于血漿消除相表觀半衰期，且超過毒性研究給藥間隔的2倍；2）重復給藥PK/TK研究中測得的循環(huán)系統(tǒng)藥物/代謝產(chǎn)物穩(wěn)態(tài)水平，顯著高于單次給藥動力學研究的預測值；3）觀察到短期毒性研究、單次給藥組織分布研究及藥理學研究無法預測的、對藥物安全性評價至關(guān)重要的組織病理學改變（此類研究需聚焦病變靶器官）；4）藥物針對特定部位靶向遞送開發(fā)時。
分布評估的關(guān)鍵參數(shù)還包括分布容積，其反映體內(nèi)藥物總量與血液/血漿藥物濃度的相關(guān)性：若藥物廣泛結(jié)合血漿蛋白但與組織成分結(jié)合有限，分布容積將接近血漿容積。
代謝（Metabolism）
為全面理解藥物的安全性與有效性，需在毒性研究所用動物種屬中評估并量化藥物的代謝譜。需注意種屬間毒性差異可能與藥物代謝差異相關(guān)，代謝譜分析需通過給藥后不同時間點測定血漿、糞便、膽汁、尿液及其他組織中藥物及其主要代謝產(chǎn)物的濃度實現(xiàn)。
藥物進入體內(nèi)后通過Ⅰ相和Ⅱ相代謝途徑進行生物轉(zhuǎn)化：1）Ⅰ相反應(yīng)生成的代謝產(chǎn)物更易具有化學活性或藥理活性，需重點開展安全性評價（如活性代謝產(chǎn)物可能結(jié)合治療靶點或其他受體、與酶/蛋白相互作用引發(fā)非預期效應(yīng)）；2）Ⅱ相結(jié)合反應(yīng)通常使化合物水溶性增強、藥理活性喪失，一般無需進一步評價，但如生成酰基葡萄糖醛酸等毒性結(jié)合物，需補充安全性評估。
需特別關(guān)注種屬間代謝差異：1）僅在人類中生成的代謝產(chǎn)物罕見，但人類中代謝產(chǎn)物水平顯著高于臨床前安全測試動物種屬的情況較常見；2）若至少一種實驗動物種屬在母體藥物毒性測試中，代謝產(chǎn)物暴露水平達到或超過人類暴露水平，可認為該代謝產(chǎn)物對整體毒性評估的貢獻已得到驗證；3）化學活性中間體代謝產(chǎn)物因半衰期短難以直接檢測，但可通過其穩(wěn)定產(chǎn)物（如谷胱甘肽結(jié)合物）間接測定；4）對靶點受體無藥理活性的代謝產(chǎn)物，不能默認無毒性，需通過臨床前毒性研究驗證。
代謝產(chǎn)物的臨床前表征原則：僅當人類中代謝產(chǎn)物暴露量占藥物相關(guān)總暴露量的10%以上，且顯著高于毒性研究中的最大暴露水平時，需開展臨床前表征（通常支持Ⅲ期臨床試驗）。每日給藥劑量＜10mg的藥物，可適當提高代謝產(chǎn)物測試的暴露量閾值。多數(shù)谷胱甘肽結(jié)合物等代謝產(chǎn)物無需毒性關(guān)注，而具有明確風險的代謝產(chǎn)物（如人類特有代謝產(chǎn)物）需個案評估。該10%閾值標準與FDA及美國環(huán)境保護局（EPA）指導原則一致。
代謝產(chǎn)物毒性評估方法：優(yōu)先篩選常規(guī)毒性研究種屬中能生成目標代謝產(chǎn)物且暴露水平相當或高于人類的種屬，開展針對性毒性研究。若無法找到合適種屬，需合成該代謝產(chǎn)物并直接給藥動物進行安全性評價（需開發(fā)能在臨床前毒性研究中識別和定量該代謝產(chǎn)物的分析方法）。不過，直接給藥代謝產(chǎn)物可能存在局限性（如后續(xù)代謝與臨床場景不一致、引發(fā)母體藥物未出現(xiàn)的新毒性），但為保障臨床安全，代謝產(chǎn)物的識別與潛在毒性評估至關(guān)重要，是否開展直接安全性測試需基于母體藥物數(shù)據(jù)及代謝產(chǎn)物現(xiàn)有信息綜合判斷。
排泄（Elimination）
藥物排泄或清除率反映實驗動物給藥后排出藥物的能力，排泄速率與藥物濃度相關(guān)，清除率（CL）定義為排泄速率與濃度的比值（CL=排泄速率/C）。通常藥物排泄迅速且完全時，毒性風險更低。
2.2 TK的核心作用與應(yīng)用原則
TK是臨床前測試計劃的重要組成部分，其價值體現(xiàn)在：助力毒性試驗結(jié)果解讀、作為人類風險與安全性評估的核心環(huán)節(jié)銜接臨床前與臨床數(shù)據(jù)。由于TK整合于毒性測試中，核心聚焦毒性結(jié)果解讀而非表征藥物基礎(chǔ)PK參數(shù)。
無需在所有研究中均收集TK數(shù)據(jù)，需基于科學判斷確定數(shù)據(jù)的實用性。
2.3 臨床前PK/TK數(shù)據(jù)的提交時機要求（依據(jù)ICH S3A）
啟動人體臨床試驗前，需評估動物與人類的體外代謝數(shù)據(jù)、血漿蛋白結(jié)合數(shù)據(jù)，以及重復給藥毒性研究所用種屬的全身暴露數(shù)據(jù)；
大規(guī)模人群暴露或長期治療前（通常在Ⅲ期臨床試驗前），需補充以下數(shù)據(jù)：測試種屬的PK詳細信息（吸收、分布、代謝、排泄）、與潛在藥物相互作用相關(guān)的體外信息，用于比較人類與動物代謝產(chǎn)物差異及判斷是否需要補充測試。
3.毒理學
體內(nèi)動物毒理學研究和體外研究可用于評估藥物在短期和長期使用中可能引起的功能性和形態(tài)學不良反應(yīng)。具體開展哪些毒性試驗，取決于藥物的性質(zhì)、預期用途以及計劃在臨床試驗中的使用范圍和時長。
典型的毒性測試項目包括以下幾類：
3.1 急性毒性研究（單次給藥毒性研究）
目的：評估藥物在單次給藥或24小時內(nèi)多次給藥后產(chǎn)生的短期不良反應(yīng)。
實驗設(shè)計：在兩種哺乳動物（其中一種為非嚙齒類）中進行。通常采用臨床擬用給藥途徑，必要時也可包括注射途徑。也可通過劑量遞增研究或短期劑量范圍研究確定最大耐受劑量（MTD），替代傳統(tǒng)單次高劑量致死實驗。本研究不應(yīng)以動物死亡作為研究終點。
提供信息：人類急性中毒的可能性；估算人體安全的單次劑量；潛在毒性靶器官；藥物引起臨床癥狀的時間進程；為重復給藥毒性研究提供劑量依據(jù)；不同物種間毒性反應(yīng)的差異。
臨床意義：應(yīng)在III期臨床前獲得急性毒性數(shù)據(jù)；對于易發(fā)生過量用藥的患者群體（如抑郁癥、疼痛、癡呆等門診患者），應(yīng)更早評估急性毒性風險。
3.2 重復給藥毒性研究
包括亞急性、亞慢性和慢性毒性研究，在兩種動物（一種非嚙齒類）中進行，用于評估藥物長期使用的潛在毒性。
一些基本原則或情況：動物研究的持續(xù)時間應(yīng)等于或超過對應(yīng)階段人體臨床試驗的用藥時長；通常每日給藥；明確毒性靶器官；評估毒性是否可逆。
設(shè)置最高劑量和最低無可見有害作用水平（NOAEL）。NOAEL應(yīng)顯著高于預計的人體最大臨床劑量。
亞急性和亞慢性研究結(jié)果常用于確定致癌性試驗的劑量（如MTD）。
MTD定義：能引起輕微毒性但不顯著縮短動物壽命（非因腫瘤）的最高劑量。
(1)亞急性毒性研究
持續(xù)時間通常2–4周，為后續(xù)亞慢性/慢性研究選擇劑量，支持用藥不超過4周的早期臨床試驗。局限性在于不足以發(fā)現(xiàn)長期用藥可能出現(xiàn)的繼發(fā)效應(yīng)。
(2)亞慢性毒性研究
持續(xù)時間通常1–3個月（通常為90天），用于支持最長3個月的臨床試驗。
(3)慢性毒性研究
持續(xù)時間通常為6個月至1年，用于確定長期毒性靶器官，評估毒性可逆性，確定NOAEL，評估長期用藥下的臨床風險。
根據(jù)ICH S4A），嚙齒類最長6個月，非嚙齒類9個月。
FDA存在靈活處理的場景，可接受6個月非嚙齒類研究的情況：1）用于短期間歇治療的慢性?。ㄈ缂毦腥尽⑵^痛、勃起功能障礙、皰疹）；2）用于危及生命的疾?。ㄈ缤砥诎┌Y化療或輔助治療），且已有充分長期人體數(shù)據(jù)。
需進行12個月研究的情況：藥物基于短期臨床試驗（使用替代終點指標）獲批，但缺乏長期人體安全性數(shù)據(jù)（如某些艾滋病療法）；屬于全新藥理類別，無同類藥物長期毒性經(jīng)驗。
開展時機：應(yīng)在II期臨床顯示有效性后啟動，可與III期臨床同步進行，用于支持長期臨床試驗的安全性評估和上市批準。
3.3 遺傳毒性研究
目的：檢測化合物是否通過直接或間接機制引起DNA損傷，包括：基因突變、染色體結(jié)構(gòu)損傷（如斷裂、重排）、染色體數(shù)目異常、重組事件。
這些損傷若被“固定”（即未被修復并傳代），可能引發(fā)可遺傳效應(yīng)或參與多步驟致癌過程。
研究要求：無單一試驗?zāi)軝z出所有遺傳毒性物質(zhì)，因此需采用組合試驗策略（in vitro+in vivo）。
根據(jù)ICH S2(R1)，推薦的標準試驗組合包括：細菌基因突變試驗（Ames試驗）；哺乳動物細胞體外染色體損傷試驗（如體外微核試驗）或小鼠淋巴瘤tk基因突變試驗；體內(nèi)嚙齒類造血細胞染色體損傷試驗（如骨髓微核試驗）。
結(jié)果解讀與后續(xù)行動：1）陰性結(jié)果：完成標準組合通常足以證明無遺傳毒性風險；2）陽性結(jié)果：需根據(jù)藥物適應(yīng)癥決定是否進行擴展試驗。
臨床開發(fā)階段要求：1）單次給藥臨床試驗（如I期）：僅需基因突變試驗（如Ames）即可支持；2）重復給藥臨床試驗：必須額外完成哺乳動物系統(tǒng)染色體損傷評估。完整遺傳毒性試驗組合應(yīng)在II期臨床前完成。
3.4 致癌性研究
是否需要開展？非注冊必需前置條件，有些情況下可在上市后承諾完成，甚至某些情況下無需進行。
通常使用大鼠和小鼠，持續(xù)2年，給藥途徑應(yīng)與臨床一致。
需要開展的情況：藥物預計連續(xù)使用≥6個月；或用于慢性/復發(fā)性疾病，雖為間歇用藥但頻繁長期使用（如哮喘、銀屑?。?。
無需開展的情況：短期或極少使用的藥物（如麻醉劑、放射性顯像劑），除非有特殊擔憂。
觸發(fā)致癌性研究的其他因素：1）同類藥物已有人類相關(guān)致癌證據(jù)；2）構(gòu)效關(guān)系（SAR）提示致癌風險；3）重復給藥毒性試驗中發(fā)現(xiàn)癌前病變；4）藥物或代謝物長期滯留組織，引發(fā)局部病理反應(yīng)；
明確遺傳毒性陽性：此類化合物通常被視為跨物種致癌物，無需再做長期致癌試驗。但若擬用于長期人體治療，仍建議進行最長1年的慢性毒性研究，以早期發(fā)現(xiàn)腫瘤信號。
上市時間安排：一般應(yīng)在提交上市申請前完成致癌性研究；但對于嚴重或危及生命疾?。ㄈ缤砥诎┌Y、無有效療法的罕見?。?，可推遲至上市后進行；若目標人群預期壽命<2–3年，可豁免長期致癌試驗。
3.5 生殖毒性研究
研究外源物質(zhì)對生殖功能、胚胎發(fā)育及子代健康的不良影響。
法規(guī)要求（FDA&ICH）：凡用于育齡女性（WOCBP,Women of Childbearing Potential），無論是否針對孕婦，均需進行生殖毒性評估。
經(jīng)典三段式試驗設(shè)計（ICH S5）：1）生育力與一般生殖表現(xiàn)（Segment I）：大鼠，評估雄性和雌性生殖功能；2）致畸性/胚胎-胎仔毒性（Segment II）：大鼠和兔，評估器官形成期毒性；3）圍產(chǎn)期與出生后發(fā)育（Segment III）：大鼠，覆蓋妊娠晚期至哺乳期。
臨床試驗中的階段性要求（依據(jù)ICHM3(R2)）：1）男性受試者：可在完成雄性生育力專項研究前納入I/II期試驗。因重復給藥毒性研究（≥2周）已包含睪丸組織病理學檢查，其敏感性等同于專門生育力試驗；不過，在大型或長期臨床試驗（如III期）前，應(yīng)完成雄性生育力專項研究。2）育齡女性（WOCBP）：核心原則是要防止無意中暴露胚胎/胎兒，需評估風險并采取避孕措施。兩種風險控制方式，一是完成生殖毒性研究，明確內(nèi)在風險，并在試驗中采取防護。二是嚴格避孕，包括高效避孕方法、妊娠檢測、確認月經(jīng)來潮后入組。
那么何時必須完成生殖毒性研究呢？若WOCBP未使用高效避孕或妊娠狀態(tài)不明，則必須在入組前完成：1）所有女性生殖毒性研究（三段）；2）完整遺傳毒性試驗組合。孕婦入組臨床試驗前，同樣需完成上述全部研究，并有人體安全性數(shù)據(jù)支持。
區(qū)域差異與靈活性：1）歐盟和日本：要求在WOCBP暴露前完成確定性發(fā)育毒性研究（Segment II）；2）美國：若采取嚴格避孕措施，可推遲至III期前完成胚胎-胎仔發(fā)育研究；3）所有ICH地區(qū)：WOCBP可參與重復給藥的I/II期試驗，前提是已完成重復給藥毒性研究（含卵巢評估）；III期或大規(guī)模長期試驗前，需完成女性生育力專項研究；上市批準前，必須完成圍產(chǎn)期與出生后發(fā)育研究（Segment III）。
特殊情況下的早期入組：若已有兩個物種的初步生殖毒性數(shù)據(jù)，且臨床試驗規(guī)模?。?le;150名WOCBP）、療程短（≤3個月）、采取嚴格避孕措施。則可在完成確定性生殖毒性研究前納入WOCBP——基于此類試驗中妊娠發(fā)生率極低，且初步研究已能識別主要發(fā)育毒性風險。
3.6 特殊毒理學研究
免疫毒性研究
所有擬用于人體的新分子實體均應(yīng)評估其潛在免疫毒性。
評估方式：首先通過常規(guī)毒理學研究（如重復給藥毒性試驗）觀察是否有免疫相關(guān)信號（如淋巴器官重量變化、血液學異常等）；若存在可疑信號，需基于“證據(jù)權(quán)重法（weight-of-evidence）”決定是否開展額外的專門免疫毒性研究。
時間要求：若需開展額外研究，應(yīng)在大規(guī)模人群暴露前完成（如III期臨床試驗前）。
光安全性研究
藥物引起的光毒性皮膚反應(yīng)或眼部光損傷日益受到監(jiān)管機構(gòu)和制藥行業(yè)重視，已成為非臨床開發(fā)的必要環(huán)節(jié)。
是否需要開展？取決于以下因素：1）NME的光化學性質(zhì)（如吸收波長、光反應(yīng)活性）；2）結(jié)構(gòu)類似物是否具有光毒性；3）藥物在皮膚和眼睛中的分布；4）非臨床研究中是否出現(xiàn)疑似光毒性表現(xiàn)（如光照后皮膚/眼組織損傷）。
實施建議：初步評估應(yīng)基于NME的光化學特性及藥理/化學類別；若綜合數(shù)據(jù)提示存在顯著人體光毒性風險，應(yīng)在臨床試驗中采取防護措施（如避光、防曬指導）；應(yīng)進一步評估藥物在皮膚和眼部的分布，以判斷是否需要補充試驗；必要時，在大規(guī)模臨床試驗前（如III期）開展體外、體內(nèi)或臨床光毒性試驗；
若評估提示潛在光致癌風險，需在臨床試驗知情同意書中加入警示；上市后藥品說明書中明確風險提示。
藥物濫用潛力評估
對具有中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）活性的藥物（無論適應(yīng)癥），均應(yīng)考慮是否需評估其濫用潛力。
目的：支持臨床濫用潛力研究設(shè)計；協(xié)助監(jiān)管機構(gòu)進行藥物分類/管制（如是否列入管制藥品）；為藥品說明書提供依據(jù)。
評估策略：1）早期篩選（臨床前）：開展體外受體結(jié)合實驗，明確藥物及其活性代謝物在腦內(nèi)的作用靶點（如受體、轉(zhuǎn)運體、離子通道）；關(guān)注與濫用相關(guān)的神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)：多巴胺、去甲腎上腺素、5-羥色胺、GABA、乙酰膽堿、阿片系統(tǒng)、NMDA、大麻素系統(tǒng)等；通常在首次人體給藥前獲得藥代/藥效（PK/PD）特征（如起效快、作用時間短易被濫用）；化學結(jié)構(gòu)與已知濫用藥物相似；受體結(jié)合譜提示成癮通路激活；動物行為學表現(xiàn)（如興奮行為）。若早期無濫用信號，可能無需深入評估，但若存在已知濫用信號或全新CNS作用機制，則需進一步研究。2）正式濫用潛力模型（通常在III期前完成）：推薦在嚙齒類動物中進行（前提是其代謝和靶點與人相似）；若嚙齒類模型不適用，可考慮非人靈長類。常用三種核心試驗，一是藥物辨別試驗（Drug discrimination），評估藥物是否產(chǎn)生類似已知濫用藥物的主觀效應(yīng)。二是自我給藥試驗（Self-administration），直接反映動物是否“主動尋求”該藥物。三是戒斷反應(yīng)評估（Withdrawal assessment），該研究可整合到重復給藥毒性研究的“可逆性”部分。3）劑量選擇：推薦使用遠高于人體治療劑量的血藥濃度（通常為治療濃度的數(shù)倍），以充分暴露潛在濫用效應(yīng)。
監(jiān)管溝通建議：建議在II期結(jié)束前與監(jiān)管機構(gòu)溝通，明確是否需要開展動物濫用研究及最佳時機；I期階段通常不適宜開展正式濫用研究，因有效劑量尚未確定，可能導致劑量選擇不當，影響結(jié)果可靠性。
局部耐受性研究
評估藥物在給藥部位（如注射、吸入、皮膚）是否引起刺激、炎癥或其他局部不良反應(yīng)。
實施原則：應(yīng)使用擬用于臨床的給藥途徑進行評估；不應(yīng)作為獨立研究，而應(yīng)整合進常規(guī)毒理學試驗中，以減少動物使用；對于注射劑，還需評估非預期注射部位（如靜脈旁滲漏）的耐受性，尤其在III期前完成。
區(qū)域差異：1）美國通常不要求單獨的靜脈旁給藥研究；2）歐盟和日本建議對靜脈制劑進行單次靜脈旁（paravenous）給藥評估；3）若使用新型靜脈輔料，需單獨評估其局部耐受性。
生物制品
生物技術(shù)來源藥物（也稱生物制藥或生物制品）是一類結(jié)構(gòu)復雜、分子量大的治療產(chǎn)品，例如：單克隆抗體（mAbs）、重組蛋白、核酸類藥物（如基因治療載體、siRNA等）。這類產(chǎn)品與傳統(tǒng)小分子化學藥在理化性質(zhì)、作用機制和代謝特征上存在顯著差異。
常規(guī)用于小分子藥物的非臨床安全性研究方案通常不適用于生物制品。每種生物制品的非臨床研究“組合包”都需量身定制（individualized design）。
不過，生物制品的非臨床安全性評價的目標與小分子藥物是一致的，包括：識別潛在毒性；確定臨床監(jiān)測的關(guān)鍵指標；支持人體起始劑量和給藥方案的確定。
生物制品毒理學研究的主要特點還包括：
1.給藥方案更貼近臨床
動物試驗中的給藥途徑和給藥頻率通常直接模擬擬用于人體的治療方案（如靜脈輸注、每周一次等）。
2.必須使用“藥理相關(guān)種屬”（Relevant Species）
指該動物體內(nèi)表達與人相同的靶點（如受體、抗原表位或啟動子序列），從而使藥物能產(chǎn)生藥理活性。比如單抗需表達相應(yīng)抗原表位；重組蛋白需表達對應(yīng)受體；基因治療產(chǎn)品需具備可被調(diào)控的啟動子序列。主要目的是確保觀察到的毒性是由藥理作用本身（on-target effect）引起，而非非特異性反應(yīng)。
在人體試驗啟動前及整個臨床開發(fā)過程中，對新型生物制品（New Biological Entity）進行藥理學和毒理學特征的全面表征。
若某生物制品在結(jié)構(gòu)和藥理作用上與已有豐富臨床經(jīng)驗的產(chǎn)品高度相似，可適當減少毒性試驗的廣度。
試驗設(shè)計需考慮的關(guān)鍵因素：相關(guān)動物種屬的選擇（藥理響應(yīng)種屬）；動物的年齡與生理狀態(tài)；給藥方式，包括劑量、給藥途徑、治療方案；供試品在使用條件下的穩(wěn)定性。
GLP（良好實驗室規(guī)范）要求：毒性試驗應(yīng)盡可能符合GLP。但某些使用特殊檢測系統(tǒng)的研究（如復雜生物測定）可能無法完全滿足GLP，此時應(yīng)明確說明不符合項，并評估其對整體安全性評價的影響。不完全符合GLP≠數(shù)據(jù)無效——在合理解釋下，仍可用于支持臨床試驗和上市申請。
生物制品與小分子藥物的非臨床開發(fā)策略差異詳見下表。
1.藥理學研究
1.1 藥效學
通過體外結(jié)合實驗（如靶點親和力測定）和體內(nèi)動物模型實驗評估生物制品的藥理活性。目的是闡明其作用機制及是否具備臨床相關(guān)生物效應(yīng)。
由于生物制品通常具有高度靶向特異性，一般不常規(guī)開展針對非治療靶點的廣譜篩選研究，即不評估脫靶效應(yīng)，除非有特別擔憂。
1.2安全藥理學研究
小分子藥物通常需進行核心安全藥理學組合試驗（評估對心血管、呼吸、中樞神經(jīng)系統(tǒng)等的影響）。生物制品因高度靶向性，一般無需單獨開展此類研究。
其安全藥理學指標可整合到常規(guī)毒理學研究中一并考察（如在重復給藥毒性試驗中監(jiān)測心電、呼吸功能等）。
之前筆者回顧性分析了已上市的144款單抗、多抗及ADC類藥物，大部分生物藥物安全藥理學研究是以伴隨一般毒理研究開展的形式為主，而且是心血管、呼吸系統(tǒng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)的終點均納入一般毒理試驗中考察。如下表所示。
2.藥代動力學與毒代動力學
本研究目的是建立系統(tǒng)暴露量（如AUC、Cmax）與藥效/毒性之間的關(guān)系；PK參數(shù)（清除率CL、半衰期、分布容積Vd等）對解讀毒性數(shù)據(jù)至關(guān)重要，應(yīng)納入常規(guī)毒理研究。
與小分子化藥不同，生物制品不經(jīng)過CYP450酶系統(tǒng)代謝，主要通過蛋白水解降解為小肽和氨基酸，隨后被排泄或再利用。因此，無需進行小分子藥物式的經(jīng)典生物轉(zhuǎn)化研究。
組織分布研究方面，可使用放射性標記的生物制品進行組織分布研究，幫助識別潛在風險器官。但需注意，放射性標記可能因快速代謝或標記鍵不穩(wěn)定而難以準確追蹤。氨基酸標記存在循環(huán)再利用問題——放射性可能摻入非藥物相關(guān)蛋白，導致結(jié)果誤判。解讀此類數(shù)據(jù)需格外謹慎。
PK研究實施要點：應(yīng)使用與毒理和臨床試驗一致的制劑；采用擬用于臨床的給藥途徑；吸收模式受多種因素影響：劑型、濃度、注射部位、免疫原性、給藥體積等；免疫介導的清除（如抗藥抗體產(chǎn)生）可能顯著改變PK曲線，進而影響毒性解讀；毒理研究中應(yīng)同步監(jiān)測系統(tǒng)暴露水平；PK采樣應(yīng)覆蓋至少3–5個半衰期，以充分描述藥時曲線。
動物模型選擇：PK研究通常在健康的相關(guān)動物種屬中進行；鼓勵使用疾病動物模型，因其更能反映真實臨床的PD效應(yīng)和PK特征；不推薦在非相關(guān)種屬中進行PK研究，因缺乏靶點結(jié)合，藥物清除機制（如靶點介導的內(nèi)化）可能失效，數(shù)據(jù)臨床相關(guān)性低。
在進入臨床前，應(yīng)獲得相關(guān)動物模型中的吸收、分布和清除信息。用于基于暴露量（而非僅劑量），為首次人體試驗提供安全窗口依據(jù)。
3. 毒理學研究
在生物制品進入人體試驗前，必須通過動物毒理學研究達成以下主要目的：1）識別毒性靶器官，并評估停藥后毒性是否可逆；2）確定人體I期臨床試驗的安全起始劑量及后續(xù)劑量遞增方案；3）明確臨床試驗中需監(jiān)測的安全性參數(shù)；4）為藥品說明書中的安全性信息提供數(shù)據(jù)支持。
動物種屬選擇“藥理相關(guān)種屬”。那么什么是“藥理相關(guān)種屬”？
1）表達與人相同的靶抗原/表位或同源受體；2）其組織交叉反應(yīng)譜與人類高度相似；3）藥物在其體內(nèi)能產(chǎn)生預期的藥理活性（即“on-target”作用）。
如何確定相關(guān)種屬？1）免疫組化（IHC）：使用多物種組織芯片進行抗原分布篩查；2）流式細胞術(shù)（FACS）：檢測藥物與動物來源細胞的結(jié)合，通常比IHC更敏感；3）序列比對：比較靶抗原在不同物種間的DNA和氨基酸序列同源性；4）功能與結(jié)構(gòu)一致性：靶點在動物與人之間的分布、功能、結(jié)構(gòu)應(yīng)盡可能一致，以確保觀察到的毒性（尤其是on-target毒性）具有臨床預測價值。若動物與人在靶抗原組織分布上差異較大，雖不完全排除使用，但需在人體風險評估中謹慎考量這些差異。
監(jiān)管要求：在注冊申報資料中，必須提供所選動物種屬的相關(guān)性依據(jù)；若僅使用一個種屬，還需說明為何未發(fā)現(xiàn)其他相關(guān)種屬。
關(guān)于種屬數(shù)量策略：至少在一個藥理相關(guān)種屬中開展毒理研究；若在兩個種屬中均顯示藥理活性（經(jīng)28天試驗確認），則兩者都應(yīng)納入毒性評估；若28天毒性結(jié)果在兩物種中相似，后續(xù)長期毒性研究可僅用一個種屬；若僅在一個種屬中有藥理活性，且機制明確，則無需在第二物種中使用同源替代品進行測試。
無相關(guān)動物種屬時的替代策略1）轉(zhuǎn)基因動物模型：工程化表達人源靶抗原，成功與否取決于抗體-抗原相互作用所產(chǎn)生的藥效學（PD）是否與人體預期一致；2）使用替代分子：開發(fā)一種能與動物同源抗原結(jié)合的替代分子，用于毒理研究。局限性在于替代分子≠擬用于人體的治療分子，二者在生產(chǎn)工藝、雜質(zhì)譜、PK特性、親和力、作用機制等方面可能存在差異，且增加研發(fā)成本與不確定性。英夫利昔單抗、依法珠單抗的生殖/發(fā)育毒性研究曾成功采用此策略。
若上述兩種方案均不可行，仍可考慮：評估脫靶毒性（off-target）對主要生理系統(tǒng)的影響；利用表達靶抗原的人源細胞進行體外研究，評估on-target效應(yīng)及有效生物劑量。但此類體外數(shù)據(jù)對人類風險的預測能力有限，需結(jié)合更充分的藥理學信息謹慎解讀。
3.1 單次給藥毒性研究
雖然單次給藥毒性研究可提供劑量與全身/局部毒性之間的關(guān)系信息，但目前企業(yè)普遍跳過此類研究。
單次給藥毒性研究數(shù)據(jù)可用于支持重復給藥毒性研究中的劑量選擇。劑量-反應(yīng)關(guān)系信息也可通過單次毒性研究、藥理學研究或動物疾病模型療效研究獲得。建議在這些研究設(shè)計中納入安全藥理學參數(shù)。
3.2 重復給藥毒性研究
物種選擇：通常推薦使用兩個相關(guān)動物種屬進行安全性評價；在特定情況下（如僅有一個相關(guān)種屬，或?qū)ι镏破返纳飳W活性已充分了解），一個種屬可能足夠；若短期研究中兩個種屬毒性特征相似，長期研究可僅用一個種屬。
給藥方案：給藥途徑和方案應(yīng)模擬臨床擬用方式。如可行，應(yīng)包含TK/PK評估。
研究持續(xù)時間：應(yīng)基于臨床擬用療程和適應(yīng)癥確定。短期使用（如7天）或用于急性危重疾病的生物藥：2周重復給藥研究通常足夠支持臨床試驗及上市；慢性適應(yīng)癥：長期毒性研究需科學論證，6個月研究通常被監(jiān)管機構(gòu)接受，但根據(jù)情況可更短或更長。
恢復期設(shè)置：研究應(yīng)包含無藥恢復期，以評估毒性是否可逆、惡化或出現(xiàn)延遲毒性；若藥物引起持久藥理/毒性效應(yīng)，應(yīng)持續(xù)監(jiān)測恢復期動物直至確認可逆性。
抗藥抗體（ADA）的影響：生物藥常誘導動物產(chǎn)生抗藥抗體（ADA），可能影響藥效、PK/PD及毒性表現(xiàn)；所有重復給藥毒性研究均應(yīng)檢測總抗體和中和抗體，采樣時間點包括給藥前、給藥期間、末次給藥后剖檢時、恢復期末（存活動物）。ADA的存在本身不構(gòu)成提前終止或修改研究的理由，除非其干擾了毒性、PK或PD數(shù)據(jù)的解讀。
劑量選擇原則：基于體外/體內(nèi)初步活性數(shù)據(jù)及藥理模型中的有效劑量；考慮預測的人體等效劑量；研究通常應(yīng)能確定NOAEL（腫瘤藥物除外），并包含一個明顯毒性劑量；最高劑量的暴露量應(yīng)至少為預期最高臨床劑量的10倍。
生物藥通常采用靜脈或皮下注射，口服給藥一般不可行（因胃腸道蛋白酶快速降解），這點與小分子不同。
3.3 免疫原性研究
多數(shù)人用生物藥在動物中具有免疫原性，故重復給藥毒性研究中必須檢測抗體。根據(jù)ICH S6指南，應(yīng)表征抗體反應(yīng)（如滴度、陽性動物數(shù)、是否中和），并關(guān)聯(lián)藥理/毒理變化。
需評估ADA對以下方面的影響：PK/PD參數(shù)；不良反應(yīng)發(fā)生率/嚴重程度；補體激活；新毒性出現(xiàn)；免疫復合物沉積相關(guān)的病理改變（如血管炎）。
ADA不應(yīng)單獨作為終止研究的依據(jù)，除非顯著干擾數(shù)據(jù)解讀。另外，動物中ADA的產(chǎn)生不能預測人體是否產(chǎn)生抗體。人體即使產(chǎn)生抗體（如人源化抗體），也可能不影響藥效；
豚鼠過敏試驗（如全身過敏反應(yīng)）對重組蛋白價值有限：結(jié)果常為陽性，但不能預測人體反應(yīng)；人類中嚴重過敏反應(yīng)罕見。
ADA可能通過以下機制導致間接毒性：形成免疫復合物，沉積于血管，激活炎癥通路（免疫復合物病）；與內(nèi)源性蛋白交叉反應(yīng)，中和或干擾其功能，引發(fā)毒性。
3.4 免疫毒性研究
目的：評估生物治療藥物對免疫系統(tǒng)的不良影響。許多生物藥可激活或抑制免疫系統(tǒng)，或間接干擾免疫細胞功能（如抗IGF-1R單抗可抑制胸腺T細胞成熟）；
主要免疫毒性表現(xiàn)：免疫激活→自身免疫??；免疫抑制→抗感染或抗腫瘤能力下降。
常規(guī)毒性研究中的免疫評估指標：1）血液學：總白細胞計數(shù)、分類計數(shù)；2）解剖：脾臟、胸腺等淋巴器官重量；3）組織病理學：脾、胸腺顯微結(jié)構(gòu)。這些變化可能提示免疫毒性。
應(yīng)區(qū)分免疫毒性與應(yīng)激反應(yīng)：高劑量（接近最大耐受劑量）可能引起應(yīng)激（如皮質(zhì)酮升高），導致中性粒細胞↑、淋巴細胞↓；胸腺重量↓、皮質(zhì)細胞減少；脾/淋巴結(jié)細胞減少；腎上腺重量↑；體重增長減緩、活動減少。需有充分證據(jù)證明是應(yīng)激所致，才能排除直接免疫毒性。
進階免疫毒性評估：若初步研究提示免疫毒性，應(yīng)在后續(xù)研究中加入特異性終點。免疫表型分析（如流式細胞術(shù)/FACS、免疫組化/IHC）可較易整合入常規(guī)研究，用于鑒定/計數(shù)白細胞亞群，但表型分析非功能性檢測，需結(jié)合功能試驗（如T細胞依賴性抗體反應(yīng)），功能性免疫毒性試驗參考ICH S8指南。
種屬選擇與數(shù)據(jù)外推的局限性：應(yīng)使用藥理學相關(guān)種屬。不同物種免疫系統(tǒng)差異大，可能影響可行性、數(shù)據(jù)解讀及人體相關(guān)性。淋巴細胞亞群標志物在小鼠、人、部分非人靈長類中可用，但未必跨種屬一致表達?，F(xiàn)有標志物尚未被證實能良好預測免疫毒性；即使使用藥理相關(guān)種屬，動物免疫反應(yīng)仍可能無法準確預測人體反應(yīng)。建議結(jié)合臨床數(shù)據(jù)或人源白細胞體外實驗，驗證動物發(fā)現(xiàn)的人體相關(guān)性。
3.5發(fā)育與生殖毒性研究
是否開展取決于：藥物適應(yīng)癥；目標患者人群（如育齡女性）；產(chǎn)品特性（如作用機制、半衰期等）。
若藥物擬用于育齡女性且需重復或長期給藥，則應(yīng)開展相關(guān)研究。
評估生物藥對哺乳動物從受孕到性成熟全過程的影響，包括：成年動物的生育力；早期胚胎發(fā)育；胚胎-胎兒發(fā)育；圍產(chǎn)期及出生后發(fā)育（含母體功能）；潛在的發(fā)育免疫毒性（尤其適用于具有長期免疫調(diào)節(jié)作用的生物藥，如單抗），可通過修改研究設(shè)計評估新生動物的免疫功能。
開展時機與監(jiān)管要求：歐盟和日本要求在III期臨床前完成。無論如何，注冊前必須完成相關(guān)研究。
早期臨床階段的重復給藥毒性研究可提供男性生育力影響的初步信息。
動物種屬選擇：應(yīng)使用藥理學相關(guān)種屬；若在常規(guī)種屬（如大鼠、兔）中無活性，則非人靈長類（NHP）常是唯一選擇。
非人靈長類的局限性：性成熟動物數(shù)量有限；個體遺傳異質(zhì)性高（非近交系）；每胎僅產(chǎn)1仔；自發(fā)流產(chǎn)率高；妊娠期長達5–7倍于大鼠/兔（約5–6個月）。
建議
胚胎-胎兒發(fā)育研究：必要時在NHP中進行，以評估對胚胎的風險。
生育力與早期胚胎發(fā)育研究：若組織交叉反應(yīng)顯示藥物結(jié)合生殖器官，或重復毒性研究提示風險，應(yīng)在NHP中開展；否則，可在重復給藥毒性研究中納入相關(guān)終點替代。
圍產(chǎn)期及出生后發(fā)育研究：因NHP繁殖周期長、產(chǎn)仔少，通常無法完整開展。當然，并不絕對，國內(nèi)已有一些NHP開展先例，并走到了BLA階段。
若為免疫調(diào)節(jié)劑且需評估子代免疫功能，可在修改版“胚胎-胎兒發(fā)育研究”中加入相關(guān)終點。
無相關(guān)動物種屬時的替代方案：可考慮使用轉(zhuǎn)基因小鼠或同源蛋白進行研究。不過，因設(shè)計復雜，應(yīng)提前與監(jiān)管機構(gòu)相關(guān)部門溝通研究必要性與方案。
3.6 遺傳毒性研究
標準ICH S2B推薦的遺傳毒性試驗（檢測DNA損傷、突變、染色體畸變）不適用于生物藥。原因在于生物藥分子量大，無法穿透完整細胞的細胞膜和核膜，不能直接接觸DNA。通常無需開展遺傳毒性研究。
3.7 致癌性研究
一般不要求進行標準嚙齒類致癌性生物測定（如2年大鼠/小鼠試驗）。
但需根據(jù)以下因素評估是否需進行產(chǎn)品特異性致癌風險評估：目標人群；治療持續(xù)時間；生物學活性（如是否為生長因子、免疫調(diào)節(jié)劑）。
不依賴標準致癌試驗，而應(yīng)整合多源數(shù)據(jù)：已發(fā)表文獻（如轉(zhuǎn)基因/敲除動物模型、人類遺傳病數(shù)據(jù)）；同類藥物效應(yīng)；靶點生物學信息；體外數(shù)據(jù)；慢性毒性研究結(jié)果；臨床數(shù)據(jù)。
特殊情況處理：若機制提示可能促進腫瘤生長?？赏ㄟ^長期重復給藥毒性研究中的組織病理學、體外細胞增殖實驗等進行評價。若現(xiàn)有證據(jù)未提示致癌風險→無需嚙齒類致癌試驗；若存在理論風險但體外/慢性毒性研究未支持，而企業(yè)希望避免標簽警示，可開展額外研究以消除疑慮。
嚙齒類致癌試驗或使用同源產(chǎn)品的短期試驗通常價值有限，不推薦用于臨床候選物評估。
致癌性評估結(jié)果用于：說明書風險提示；制定風險管理計劃（RMP）；指導臨床監(jiān)測與上市后監(jiān)測。
某些情況下（如免疫調(diào)節(jié)劑、生長因子），上市后臨床監(jiān)測比臨床前研究更有效。
3.8 局部耐受性研究
應(yīng)在相關(guān)動物種屬中，使用擬上市制劑，采用與臨床相同的給藥途徑和方案進行。應(yīng)在首次人體給藥前完成。
可整合進其他毒性研究中，無需單獨開展（若單次/重復給藥研究已能評估局部反應(yīng)）。
局部刺激的可能原因：T細胞活化相關(guān)病理；免疫復合物沉積；對處方輔料的超敏或刺激反應(yīng)；注射針頭造成的機械損傷。
評估方法：推薦在毒理研究中對注射部位進行組織病理學檢查；
注意：人源蛋白在動物中反復注射可能引起嚴重局部反應(yīng)，但該反應(yīng)在人體中未必發(fā)生，解讀時需謹慎。
3.9 可比性研究（Comparability Studies）
生物藥在臨床開發(fā)及上市后常發(fā)生工藝變更。臨床前研究用樣品無需與臨床/上市樣品完全相同，但需證明可比性。
可比性評估內(nèi)容：理化特性表征；體外功能活性比較（如結(jié)合力、效價、信號通路激活等）。確認變更不影響產(chǎn)品的身份、安全性、純度或有效性。
“可比”的判定標準：若理化、生物活性、免疫化學性質(zhì)高度相似→可比；即使存在微小理化差異，但不影響安全性和有效性→仍可視為可比。
若判定“不可比”：需評估變更前樣品的非臨床數(shù)據(jù)是否仍可用于支持變更后產(chǎn)品的臨床開發(fā)或注冊。
補充研究（橋接研究）：若質(zhì)量屬性數(shù)據(jù)不足以證明可比性，可考慮在合適動物模型中開展橋接研究。PK橋接研究最常見，在藥理相關(guān)種屬中直接比較變更前后產(chǎn)品的PK參數(shù)；所選動物的PK特征應(yīng)盡可能接近人體（如有臨床PK數(shù)據(jù)可供比對）。
何時需要額外動物研究？
當存在以下情況時，可能需補充PD或毒性橋接研究：變更前產(chǎn)品有特殊安全性特征；工藝變更幅度大；發(fā)現(xiàn)產(chǎn)品在純度、結(jié)構(gòu)或體外活性方面存在差異。
建議：申辦方應(yīng)提前與監(jiān)管機構(gòu)溝通橋接研究計劃，確保研究設(shè)計充分支持可比性結(jié)論。
新分子實體和生物制品支持臨床Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期所需的非臨床研究內(nèi)容匯總?cè)缦拢?/span>
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