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配制溶液步驟因配置的溶液不同而有所不同，現(xiàn)舉兩個(gè)例子：

舉例1：配置0.05mol/L，400mL NaOH溶液的步驟：

要準(zhǔn)確配置氫氧化鈉的濃度，則要用容量瓶定容，實(shí)驗(yàn)室沒有400毫升的容量瓶，則選用500毫升的容量瓶。
1.計(jì)算需要?dú)溲趸c的質(zhì)量： 
0.5L*0.05mol/L*40.01=1.000克 
2.稱1.000克氫氧化鈉于燒杯中，加少量水溶解，然后倒入500毫升容量瓶里，分3次洗燒杯，將溶液全部倒入容量瓶里，最后用水稀釋至刻度線，搖勻，即，得到0.05mol/L的氫氧化鈉溶液。
如果不需要很準(zhǔn)確的話，可以直接用量筒量400毫升，稱的時(shí)候只要稱0.8克就可以了。

 

舉例2：配置1.5mol/L的稀硫酸200mL步驟：

第1步：計(jì)算：根據(jù)C1V1=C2V2，計(jì)算需要濃硫酸的體積； 
第2步：量取，利用刻度吸管吸取需要濃硫酸的體積；
第3步：稀釋，將濃硫酸轉(zhuǎn)移到小燒杯中，加少量水稀釋；
第4步：轉(zhuǎn)移,待溶液溫度降低后，將燒杯中的硫酸轉(zhuǎn)移到200mL容量瓶中； 
第5步：洗滌，洗滌小燒杯，和轉(zhuǎn)移的時(shí)候用到的玻璃棒，至少三次，將洗滌的水一并轉(zhuǎn)移到容量瓶中； 
第6步：定容，加水定容到刻度線，在距離刻度線一厘米左右改用膠頭滴管定容； 
第7步：搖勻,將溶液搖勻,如果液面下降也不可再加水定容； 
第8步：將配得的溶液轉(zhuǎn)移至試劑瓶中，貼好標(biāo)簽；

  

舉例3：配制500mL，0.1mol/L碳酸鈉溶液步驟及注意事項(xiàng)

 

所需的儀器：燒杯、容量瓶、玻璃棒、膠頭滴管、分析天平、藥匙、量筒

步驟：

第一步：計(jì)算：所需碳酸鈉的質(zhì)量=0.5*0.1*106=5.3克；

第二步：稱量：在天平上稱量5.3克碳酸鈉固體，并將它倒入小燒杯中；

第三步：溶解：在盛有碳酸鈉固體的小燒杯中加入適量蒸餾水，用玻璃棒攪拌，使其溶解；

第四步：移液：將溶液沿玻璃棒注入500mL容量瓶中；

第五步：洗滌：用蒸餾水洗燒杯2～3次，并倒入容量瓶中；

第六步：定容：倒水至刻度線1～2cm處改用膠頭滴管滴到與凹液面平直；

第七步：搖勻：蓋好瓶塞，上下顛倒、搖勻；

第八步：裝瓶、貼簽；

 

誤差分析：

固體藥品的稱量與液體藥品的量取是否準(zhǔn)確；

把溶液向容量瓶中轉(zhuǎn)移，溶液灑了；

未洗滌燒杯和玻璃棒；

用待配液潤(rùn)洗了容量瓶；

定容時(shí)水加多了或加少了；

定容時(shí)未平視刻度線。

仰視、俯視對(duì)溶液濃度有何影響？

★俯視刻度線，實(shí)際加水量未到刻度線，使溶液的物質(zhì)的量濃度增大；

★仰視刻度線，實(shí)際加水量超過刻度線，使溶液的物質(zhì)的量濃度減小。

 

市售鹽酸密度1.19，質(zhì)量分?jǐn)?shù)36%～38%

以37%計(jì)算：

步驟：

1.計(jì)算：

假若需要2mol/L的硫酸100mL，則需37%濃硫酸16.6mL；

計(jì)算過程如下：假設(shè)鹽酸VmL：

（0.1L*2mol/L*36.5g/mol）/37%=V/1.19

V=16.59mL,考慮到量筒的精確度0.1mL，故取16.6m

L即可。

2.量?。?/span>

16.6mL濃硫酸；

3.溶解：

把16.6mL濃硫酸倒入已經(jīng)加入蒸餾水的小燒杯中，用玻璃棒不斷攪拌。

4.轉(zhuǎn)移：

待溶液冷卻后，將溶液沿玻璃棒倒入100毫升的容量瓶中。

5.洗滌：

再用少量蒸餾水洗滌燒杯和玻璃棒2-3次，并將全部洗液移入容量瓶中。

6.定容：

向容量瓶?jī)?nèi)加蒸餾水，當(dāng)液面接近刻度線1-2厘米處時(shí)，改用滴管滴加蒸餾水到一面恰好與刻度線相切。

7.搖勻：

塞上瓶塞，反復(fù)顛倒容量瓶數(shù)次，使瓶?jī)?nèi)的溶液均勻，此時(shí)可以把溶液倒入到試劑瓶中貼標(biāo)簽保存。完成配制過程

 

容量瓶的使用六忌：

 

1.忌用容量瓶進(jìn)行溶解（體積不準(zhǔn)確）

2.忌直接往容量瓶倒液（灑到外面）

3.忌加水超過刻度線（濃度偏低）

4.忌讀數(shù)仰視或俯視（仰視濃度偏低，俯視濃度偏高）

5.忌不洗滌玻璃棒和燒杯（濃度偏低）

6.忌標(biāo)準(zhǔn)液存放于容量瓶（容量瓶是量器，不是容器）

 

1 mol/L的氫氧化鈉溶液250mL，完成下列步驟：

①用天平稱取氫氧化鈉固體/克。

②將稱好的氫氧化鈉固體放入燒杯中加少量蒸餾水將其溶解，待完全溶解后將溶液沿玻璃棒移入250mL的容量瓶中。

③用少量蒸餾水沖洗2～3次，將沖洗液移入容量瓶中，在操作過程中不能損失點(diǎn)滴液體，否則會(huì)使溶液的濃度偏低。

④向容量瓶?jī)?nèi)加水至刻度線1～2cm時(shí)，改用膠頭滴管小心地加水至溶液凹液面與刻度線相切，若加水超過刻度線，會(huì)造成溶液濃度偏低應(yīng)該重新配制。

⑤最后蓋好瓶蓋，搖勻，將配好的溶液移入試劑瓶中貼好標(biāo)簽。

 

常用貯液與溶液

 

1mol/L亞精胺（Spermidine）：

溶解2.55g亞精胺于足量的水中，使終體積為10mL。分裝成小份貯存于-20℃。

 

1mol/L精胺（Spermine）：

溶解3.48g精胺于足量的水中，使終體積為10mL。分裝成小份貯存于-20℃。

 

10mol/L乙酸胺（ammoniumacetate）：

將77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔徑的濾膜過濾除菌。

 

10mg/mL牛血清蛋白(BSA）：

加100mg的牛血清蛋白（組分V或分子生物學(xué)試劑級(jí)，無DNA酶）于9.5mL水中（為減少變性，須將蛋白加入水中，而不是將水加入蛋白），蓋好蓋后，輕輕搖動(dòng)，直至牛血清蛋白完全溶解為止。不要渦旋混合。加水定容到10ml，然后分裝成小份貯存于-20℃。

 

1mol/L二硫蘇糖醇（DTT）：

在二硫蘇糖醇5g的原裝瓶中加32.4mL水，分成小份貯存于-20℃，或轉(zhuǎn)移100mg的二硫蘇糖醇
至微量離心管，加0.65mL的水配制成1mol/L二硫蘇糖醇溶液。

 

8mol/L乙酸鉀（potassiumacetate）：

溶解78.5g乙酸鉀于足量的水中，加水定容到100mL。

 

1mol/L氯化鉀（KCl）：

溶解7.46g氯化鉀于足量的水中，加水定容到100mL。

 

3mol/L乙酸鈉（sodiumacetate）：

溶解40.8g的三水乙酸鈉于約90mL水中，用冰乙酸調(diào)溶液的pH至5.2，再加水定容到100mL。

 

0.5mol/L EDTA:

配制等摩爾的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三鈉鹽?；蚍Q取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。

 

1mol/L HEPES：

將23.8gHEPES溶于約90mL的水中，用NaOH調(diào)pH（6.8～8.2），然后用水定容至100ml。

 

1mol/L HCl：

加8.6ml的濃鹽酸至91.4ml的水中。

 

25mg/ml IPGT：

溶解250mg的IPGT（異丙基硫代-β-D-半乳糖苷）于10ml水中，分成小份貯存于-20℃。

 

1mol/LMgCl2:

溶解20.3g MgCl2·6H2O于足量的水中，定容到100mL。

100mmol/L PMSF：溶解174mg的PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的異丙醇中，定容到10ml。分成小份并用鋁箔將裝液管包裹或貯存于-20℃。

 

20mg/mL蛋白酶K（proteinase K）：

將200mg的蛋白酶L加入到9.5mL水中，輕輕搖動(dòng)，直至蛋白酶K完全溶解。不要渦旋混合。加水定容到10ml，然后分裝成小份貯存于-20℃。

 

10mg/mL R-nase（無D-Nase）（D-Nase－freeR-Nase）：

溶解10mg的胰蛋白R(shí)NA酶于1mL的10mmol/L的乙酸鈉水溶液中（pH5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L的Tris－HCl調(diào)pH至7.5，于-20℃貯存。（配制過程中要戴手套）

 

5mol/L氯化鈉（NaCl）：

溶解29.2g氯化鈉于足量的水中，定容至100mL。

 

10N氫氧化鈉（NaOH）：

溶解400g氫氧化鈉顆粒于約0.9L水的燒杯中（磁力攪拌器攪拌），氫氧化鈉完全溶解后用水定容至1L。

 

10％SDS（十二烷基硫酸鈉）：

稱取100gSDS慢慢轉(zhuǎn)移到約含0.9L的水的燒杯中，用磁力攪拌器攪拌直至完全溶解。用水定容至1L。

 

2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）：

溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使終體積為100mL。

 

100％三氯乙酸（TCA）：

在裝有500gTCA的試劑瓶中加入100mL水，用磁力攪拌器攪拌直至完全溶解。（稀釋液應(yīng)在臨用前配制）

 

2.5％X－gal（5-溴-4-氯-3-吲哚－β-半乳糖苷）：

溶解25mg的X－gal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF），用鋁箔包裹裝液管，貯存于-20℃。

 

100×Denhardt試劑（Denhardt'sregent）

成分及終濃度	配制100mL溶液各成分用量
2%聚蔗糖（Ficoll，400型）  2%聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40）  2%BSA（組分V）  水	2g  2g  2g  加水至總體積為100mL

依照上表稱取各組分，溶于水中定容。過濾除菌及雜質(zhì)，分裝成小份于-20℃貯存。

10×標(biāo)準(zhǔn)DNA連接酶緩沖液（standardDNA ligase buffer）（粘端、平端連接）

成分及終濃度	配制10ml溶液各成分的用量
0.5mol/L  Tris-HCl  100mmol/L MgCl2  100mmol/L DTT  2mmol/L ATP  5mmol/L 鹽酸亞精胺（可選）  0.5mg/ml BSA（組分V）（可選）  水	5ml  1mol/L 貯液  1ml 1mol/L 貯液  1ml 1mol/L 貯液  200ul 100 mmol/L 貯液  50ul 1 mmol/L 貯液  0.5ml 10 mg/mL 貯液  2.25ml

將配制好的緩沖液分裝成小份，貯存于-20℃ 。

 

100 mmol/L dNTP 溶液（dNTP solutions）
可以購(gòu)買到100mmol/L純dNTPs貯液，—80℃可貯存至少6個(gè)月。

 

10mmol/L dNTP混合液

成分及終濃度	配制20μL溶液各成分的用量
10mmol/L  d ATP  10mmol/L d CTP   10mmol/L d GTP  10mmol/L d TTP  水	2μL  100 mmol/L d ATP 貯液  2μL 100 mmol/L d CTP 貯液  2μL 100 mmol/L d GTP 貯液  2μL 100 mmol/L d TTP 貯液  12μL

 

20％PEG8000/2.5M NaCl

成分及終濃度	配制10mL溶液各成分的用量
質(zhì)量濃度為20％聚乙二醇；  2.5mol/L 氯化鈉 水	20g，50mL 5mol/L氯化鈉或14.6g固體氯化鈉；  補(bǔ)足100mL

加聚乙二醇于含有氯化鈉的燒杯中，加水至終體積100mL，用磁力攪拌器攪拌溶解。

 

20×SSC

成分及終濃度	配制1L溶液各成分的用量
300mmol/L  檸檬酸三鈉（二水）  3mol/L 氯化鈉  水	88.2g  175.3g  補(bǔ)足1L

溶解檸檬酸三鈉（二水）和氯化鈉于約0.9L水中，加幾滴10NNaOH溶液調(diào)pH為7.0，用水補(bǔ)足體積至1L。

 

DEPC（焦碳酸二乙酯）處理水
加100μL DEPC 于100mL水中，使DEPC的體積分?jǐn)?shù)為0.1％。在37℃溫浴至少12h，然后在15psi 條件下高壓滅菌20min，以使殘余的DEPC失活。DEPC會(huì)與胺起反應(yīng)，不可用DEPC處理Tris緩沖液。

 

甲酰胺（deionized formamide）
直接購(gòu)買或加Dowex XG8混合樹脂于裝有甲酰胺的玻璃燒杯中，用磁力攪拌器輕輕攪拌1h，可去除甲酰胺中的離子。經(jīng)Whatman 1號(hào)濾紙過濾除去樹脂后分成小份，充氮?dú)庥?80℃貯存（防止氧化）。

 

磷酸緩沖液（phosphate buffer）
按照下表所給定的體積，混合1 mol/L 的磷酸二氫鈉（單堿）和1mol/L 磷酸氫二鈉（雙堿）貯液，獲得所需pH的磷酸緩沖液。配制1 mol/L 的磷酸二氫鈉（NaH2PO4·H2O）貯液：溶解138g于足量水中，使終體積為1L；1mol/L 磷酸氫二鈉（Na2HPO4）貯液：溶解142g于足量水中使終體積為1L。

 

電泳緩沖液、染料和凝膠加樣液

 

電泳緩沖液

50×Tris-乙酸（TAE）緩沖液

成分及終濃度	配制1L溶液各成分的用量
2mol/L  Tris堿  1mol/L 乙酸  100 mmol/L EDTA  水	242g  57.1 mL的冰乙酸（17.4  mol/L）  200mL的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）  補(bǔ)足1L

 

5×Tris-硼酸（TBE）緩沖液

成分及終濃度	配制1L溶液各成分的用量
445  mmol/L Tris堿  445 mmol/L 硼酸鹽  10 mmol/L EDTA  水	54g  27.5g 硼酸  20 mL的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）  補(bǔ)足1L

 

染料

1％溴酚藍(lán)（bromophenolblue）
加1g水溶性鈉型溴酚藍(lán)于100ml水中，攪拌或渦旋混合直到完全溶解。

 

1％二甲苯青FF（xylene cyanole FF）
溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。

 

10mg/ml的溴化乙錠（ethidiumbromide）
小心稱取1g溴化乙錠，轉(zhuǎn)移到廣口瓶中，加100ml水，用磁力攪拌器攪拌直到完全溶解。用鋁箔包裹裝液管，于4℃貯存。

 

凝膠上樣液（gel loading solutions）
6×堿性凝膠上樣液（室溫貯存）

成分及終濃度	配制10mL溶液各成分用量
0.3  N 氫氧化鈉  6 mmol/L EDTA  18％聚蔗糖（400型）  0.15％溴甲酚綠  0.25％二甲苯青FF  水	300μL 10N 氫氧化鈉  120μL 0.5mol/L EDTA（pH8.0）  1.8g  15mg  25mg  補(bǔ)足到10mL

 

6×聚蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存）

成分及終濃度	配制10mL溶液各成分用量
0.15％溴酚藍(lán)  0.15％二甲苯青FF  5 mmol/L EDTA  15％聚蔗糖（400型）  水	1.5mL  1％溴酚藍(lán)  1.5mL 1％二甲苯青FF  100μL 0.5mol/L EDTA（pH8.0）  1.5g  補(bǔ)足到10mL

 

6×溴酚藍(lán)/二甲苯青/聚蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存）

成分及終濃度	配制10mL溶液各成分用量
0.25％溴酚藍(lán)  0.25％二甲苯青FF  15％聚蔗糖（400型）  水	2.5mL  1％溴酚藍(lán)  2.5mL 1％二甲苯青FF  1.5g   補(bǔ)足到10mL

 

6×甘油凝膠上樣液（4℃貯存）

成分及終濃度	配制10mL溶液各成分用量
0.15％溴酚藍(lán)  0.15％二甲苯青FF  5 mmol/L EDTA  50％甘油  水	1.5mL  1％溴酚藍(lán)  1.5mL 1％二甲苯青FF  100μL 0.5mol/L EDTA（pH8.0）  3mL   3.9mL

 

6×蔗糖凝膠上樣液（室溫貯存）

成分及終濃度	配制10mL溶液各成分用量
0.15％溴酚藍(lán)  0.15％二甲苯青FF  5 mmol/L EDTA  40％聚蔗糖  水	1.5mL  1％溴酚藍(lán)  1.5mL 1％二甲苯青FF  100μL 0.5mol/L EDTA（pH8.0）  4g   補(bǔ)足到10mL

 

10×十二烷基硫酸鈉/甘油凝膠上樣液（室溫貯存）

成分及終濃度	配制10mL溶液各成分用量
0.2％溴酚藍(lán)  0.2％二甲苯青FF  200 mmol/L EDTA  0.1％SDS  50％甘油   水	20mg  20mg  4mL 0.5mol/L EDTA(pH8.0)  100μL 10% SDS  5mL  補(bǔ)足到10mL