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黃曲霉毒素（AFT）是一類毒性極強(qiáng)的化合物，具有強(qiáng)致癌性，有B1、B2、G1、G2、M1、M2六種，廣泛存在于發(fā)霉糧食及其制品中，特別是花生、玉米及其制品。AFT其毒性遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于氰化物、砷化物及有機(jī)農(nóng)藥的毒性，其中以B1毒性最大、致癌力最強(qiáng)，M1、G1次之，其毒性作用主要是對(duì)肝臟的損害。如果奶牛吃了被黃曲霉毒素污染的谷物或飼料，牛奶就會(huì)被污染，國(guó)家質(zhì)檢總局規(guī)定AFB1是大部分食品的必檢項(xiàng)目之一。

適用于牛奶、奶粉中黃曲霉毒素的檢測(cè)。

儀器、試劑與材料

主要儀器設(shè)備

高效液相色譜儀，紫外檢測(cè)器，SPE固相萃取裝置，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，真空泵，渦旋振蕩儀，離心機(jī)。

試劑材料

市售濃縮牛奶，黃曲霉毒素B1標(biāo)品，乙腈、異丙醇（均色譜純），無水乙醇、三氟乙酸、正己烷（均為分析純）。

色譜柱：ATEO-C18（5 μm，120Å，4.6×250 mm，訂貨號(hào)：152200542）

SPE柱：AE.SPE-AFT（1500 mg/12mL）

樣品提取

準(zhǔn)確稱取2 g牛奶于50 mL離心管中，加入2 mL乙腈，充分振蕩1min；再加入4 mL乙腈，充分混合1 min；4000 r/min離心5 min，取上清液4 mL待凈化。

SPE柱凈化

（1）活化：使用前先將小柱保護(hù)液自然流出，再加10 mL乙腈進(jìn)行活化，流出液棄去。

（2）上樣：將待凈化液加入已活化好的固相萃取柱中，以1 mL/min的流速過柱，收集流出液。

（3）洗脫：用10 mL乙腈洗脫，收集流出液，合并步驟（2）、（3）流出液。

（4）重新溶解：流出液于40℃下減壓蒸餾至體積約2 mL，冷卻后向旋蒸瓶中加入5 mL無水乙醇，繼續(xù)減壓蒸餾至完全干燥。

（5）衍生：冷卻后，依次加入0.5 mL 正己烷和0.5 mL三氟乙酸，充分混勻衍生液，45℃靜置10 min。待衍生液揮干后，用10% 乙腈水溶液定容至0.5 mL，0.45 μm微孔濾膜過濾，供HPLC測(cè)定。

液相色譜條件

色  譜  柱：ATEO-C18（250 * 4.6 mm，5 μm）

檢  測(cè)  器：UV2996型紫外/可見光檢測(cè)器

檢測(cè)波長(zhǎng)：UV360 nm                

流  動(dòng)  相：A：B=65:35   A：100% 水   B：甲醇/乙腈（v/v=1/1）

流        速：1.0 mL/min

柱        溫：30℃

進(jìn)  樣  量：20 μL

采用上述方法進(jìn)行固相萃取和高效液相色譜檢測(cè)牛奶中的黃曲霉毒素，添加回收率達(dá)86.77%，表明使用AE.SPE-AFT固相萃取柱及ATEO-C18柱，可檢測(cè)乳制品中黃曲霉毒素B1。