孔雀石綠是一種工業(yè)染料，具有良好的殺菌抑菌作用，被廣泛用于活魚的保鮮。但孔雀石綠具有高毒性、高殘留風(fēng)險(xiǎn)，可帶來致癌、致畸、致突變作用，已被農(nóng)業(yè)部禁止用于養(yǎng)殖環(huán)節(jié)。根據(jù)近日國家食藥總局的公告，本次共抽檢鮮活水產(chǎn)品808批次，檢出不合格樣品69批次，其中孔雀石綠不合格水產(chǎn)品46批次，占不合格總數(shù)近七成。說明孔雀石綠仍在被廣泛非法使用。本實(shí)驗(yàn)使用免疫層析膠體金法快速檢測活魚肉中的孔雀石綠殘留。

檢測原理

孔雀石綠殘留檢測試紙條應(yīng)用了競爭抑制免疫層析的原理， 樣本中的孔雀石綠在流動的過程中與膠體金標(biāo)記的特異性單克隆抗體結(jié)合， 抑制了抗體和 NC 膜檢測線（ T 線） 上的孔雀石綠—BSA 偶聯(lián)物的結(jié)合，從而導(dǎo)致檢測線顏色的變化。 當(dāng)樣本中沒有孔雀石綠或孔雀石綠低于檢測限時， T 線顯色強(qiáng)于C 線或與 C 線顯色無差異； 當(dāng)樣本中的孔雀石綠超過檢測限時， T 線不顯色或明顯弱于 C 線； 而無論樣本中是否含有孔雀石綠， 質(zhì)控線（ C 線） 都會顯色， 以示檢測有效。

適用范圍

本產(chǎn)品適用于水產(chǎn)中孔雀石綠的定性檢測。

檢測限

顯性孔雀石綠： 1ng/ml (ppb) 隱性孔雀石綠 1ng/ml (ppb)

結(jié)晶紫： 1ng/ml (ppb) 隱性結(jié)晶紫 1ng/ml (ppb)

樣本收集和前處理

實(shí)驗(yàn)過程中， 用紅色標(biāo)記筆進(jìn)行標(biāo)記， 黑色標(biāo)記筆含有結(jié)晶紫， 會對該實(shí)驗(yàn)造成污染。

魚、 蝦樣本前處理方法：

（1） 用均質(zhì)器均質(zhì)組織樣本；

（2） 稱取 1.0±0.05g 均質(zhì)物至 10ml 聚苯乙烯離心管中， 加入 1ml 去離子水，渦動 2min， 加入 100 ml 孔雀石綠提取劑 1， 再加入 1 瓶孔雀石綠提取劑 2， 渦動 2min， 3000rpm 以上， 室溫（ 20-25℃） 離心 5min；

（3） 取 1ml 上清液至 10ml 聚苯乙烯離心管中，加入 50ml 孔雀石綠氧化劑,渦動 15s， 于 50～60℃水浴氮?dú)饣蚩諝饬飨麓蹈桑?/span>

（4）加入 0.3ml 樣本復(fù)溶液渦動溶解 3min，取 100 ml 用于分析?！緜渥ⅲ簭?fù)溶過程中垂直加入一支 250ul吸頭以輔助渦旋溶解】

操作步驟

（1） 從原包裝中取出試劑桶， 打開后取出所需數(shù)目的微孔試劑和試紙條，并做好標(biāo)記。 請?jiān)?60min 內(nèi)盡快使用。所需微孔試劑取出后，請立即蓋好試劑桶蓋，防止受潮。

（2） 用微量移液器吸取 100 ml待檢樣本溶液于微孔中，緩慢抽吸且充分與微孔中試劑混勻。

（3） 室溫（20~25℃）孵育 3min 后，吸取混勻液約 100ul 垂直滴于加樣孔（S 孔） 中。

（4） 液體流動時開始計(jì)時，反應(yīng) 10min，根據(jù)示意圖判定結(jié)果，其他時間判定無效。

結(jié)果判定

陰性（ -） ： T 線顯色強(qiáng)于 C 線顯色或與 C 線顯色無明顯差異， 表示水產(chǎn)樣本中不含有待檢物或其

濃度低于檢測限。

陽性（ +） ： T 線顯色明顯弱于 C 線顯色或 T 線不顯色， 表示水產(chǎn)樣本中待檢物濃度等于或高于檢

測限。

無 效 ： 未出現(xiàn) C 線， 表明不正確的操作過程或試紙條已失效。

在此情況下， 應(yīng)再次仔細(xì)閱讀說明書， 并用新的試紙條重新測試。