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　　水楊酸作為一種植物激素，具有抑菌作用，可治療各種慢性皮膚病，廣泛用于醫(yī)藥及護(hù)膚品中，但水楊酸在人體中會(huì)氧化為草酸，引起中毒，是一種食品禁用防腐劑。美國(guó)食品藥品管理局、美國(guó)皮膚病學(xué)會(huì)認(rèn)為水楊酸的安全限量為0.5%～2.0%。中國(guó)食品藥品管理局也規(guī)定了護(hù)膚品中水楊酸的加入限量為2%。因此為了保證我國(guó)食品添加劑的安全性，測(cè)定食品添加劑中的水楊酸的含量具有重要的意義。

　　目前水楊酸的測(cè)定方法有光度法、熒光光譜法和液相色譜法等，但大多數(shù)主要是針對(duì)藥品中水楊酸的檢測(cè)。由于食品添加劑具有種類繁多、成分復(fù)雜、干擾物質(zhì)大量存在等特點(diǎn)，在測(cè)定方法的選用上，考慮的重點(diǎn)是方法的選擇性和穩(wěn)定性。液相色譜法是報(bào)道最多的測(cè)定水楊酸的方法，該方法具有快速、靈敏、選擇性好等優(yōu)點(diǎn)；同時(shí)液相色譜儀是通用性儀器，也便于推廣。本工作采用高效液相色譜法對(duì)食品添加劑中水楊酸進(jìn)行了測(cè)定。

　　1試驗(yàn)部分

　　1.1儀器與試劑

　　Agilent1100高效液相色譜儀(包括二元泵，自動(dòng)進(jìn)樣器，熒光檢測(cè)器，柱溫箱，Chemstation色譜工作站)。

　　水楊酸標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取水楊酸標(biāo)準(zhǔn)品25.0mg，用乙腈溶解、定容至100mL容量瓶中，搖勻，配成0.250g·L-1標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，冷藏保存；使用時(shí)用乙腈稀釋配成10.0mg·L-1。

　　乙腈為色譜純，其余試劑為分析純；試驗(yàn)用水為純凈水(經(jīng)0.22μm濾膜過濾)。

　　1.2色譜條件

　　ZORBAXSB-C18色譜柱

　　(4.6mm×250nm，3.5μm)，柱溫35℃；流動(dòng)相：A為甲酸-乙腈(0.1＋99.9)溶液，B為甲酸-水(0.1＋99.9)溶液；梯度洗脫程序：0min時(shí)，A為20%；20min時(shí)，A為33%；22min時(shí)，A為90%；32min時(shí)，A為20%。流量1.0mL·min-1，進(jìn)樣量10μL；激發(fā)波長(zhǎng)290nm，發(fā)射波長(zhǎng)400nm。

　　1.3試驗(yàn)方法

　　稱取食品添加劑樣品1.0000g于100mL錐形瓶中(固體樣品過0.2mm篩，液體、膏體樣品直接稱量)，加入含0.1%(體積分?jǐn)?shù)，下同)甲酸的甲醇-水(9＋1)混合溶劑30mL，密封并稱量。超聲提取15min，并補(bǔ)足量，離心10min，經(jīng)0.22μm濾膜過濾，濾液按色譜條件進(jìn)行分析。

　　2結(jié)果與討論

　　2.1檢測(cè)器和檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

　　考察了紫外(DAD)和熒光(FLD)檢測(cè)器對(duì)水楊酸測(cè)定的影響。由水楊酸色譜峰的紫外和熒光光譜圖可知：采用熒光檢測(cè)器檢測(cè)，選擇性、干擾峰、基線穩(wěn)定性、靈敏度均好于紫外檢測(cè)器。對(duì)于種類繁多的食品添加劑樣品，應(yīng)選用熒光檢測(cè)器檢測(cè)水楊酸，確定熒光檢測(cè)器發(fā)射波長(zhǎng)為400nm，激發(fā)波長(zhǎng)為290nm。

　　2.2色譜柱的選擇

　　在色譜條件下，試驗(yàn)考察了SunfireTMC18色譜柱(4.6mm×250mm，5.0μm)、ZORBAXSB-C18色譜柱(4.6mm×250mm，3.5μm)和AtlantisDC18色譜柱(4.6mm×250mm，5.0μm)的分離效果，結(jié)果表明：3種色譜柱的分離效果相當(dāng)，但ZOR-BAXSB-C18色譜柱的半峰寬較其他兩種色譜柱窄，試驗(yàn)選擇ZORBAXSB-C18色譜柱(4.6mm×250nm，3.5μm)作為分析柱。

　　2.3流動(dòng)相的選擇

　　當(dāng)用純水和純乙腈作流動(dòng)相時(shí)，水楊酸的色譜峰嚴(yán)重拖尾。在流動(dòng)相中加入少量的酸，可消除色譜峰的拖尾現(xiàn)象，當(dāng)加入甲酸的量為流動(dòng)相總體積的0.1%時(shí)，流動(dòng)相的pH值和水楊酸的pKa值接近，試驗(yàn)選擇甲酸-乙腈(0.1＋99.9)溶液、甲酸-水(0.1＋99.9)溶液為流動(dòng)相。

　　2.4樣品前處理?xiàng)l件的選擇

　　提取水楊酸常用的提取溶劑有甲醇、無(wú)水乙醇、乙腈和酸性混合溶劑等。由于水楊酸鄰位的羥基對(duì)羧基的影響比較復(fù)雜，彼此容易形成分子內(nèi)氫鍵。這樣將降低羧基中羥基氧原子上的電子云密度，有利于氫原子解離成質(zhì)子。提取樣品中水楊酸時(shí)，在溶劑中加入適量的酸不僅可以提高提取效率，而且可以降低水楊酸去質(zhì)子化。加入甲酸、三氯乙酸、冰乙酸、磷酸進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果表明：采用含0.1%甲酸的甲醇-水(9＋1)混合溶劑作為萃取溶劑，萃取效果最好。并同固相萃取法進(jìn)行了對(duì)比，結(jié)果顯示：固相萃取前處理對(duì)樣品液相色譜分析影響僅僅限于5min以前，對(duì)水楊酸色譜峰(12.27min)附近的雜質(zhì)洗脫無(wú)顯著作用。試驗(yàn)選擇在測(cè)定食品添加劑中水楊酸含量時(shí)，不采用固相萃取前處理手段。

　　2.5工作曲線

　　移取適量水楊酸標(biāo)準(zhǔn)溶液于25mL容量瓶中，用乙腈稀釋定容，按色譜條件對(duì)水楊酸標(biāo)準(zhǔn)溶液系列進(jìn)行測(cè)定，以水楊酸的質(zhì)量濃度(μg·L-1)對(duì)其峰面積(A)進(jìn)行回歸，水楊酸的質(zhì)量濃度在41.60～1664μg·L-1范圍內(nèi)與峰面積呈線性關(guān)系，線性回歸方程為y＝0.0502＋0.7031ρ，相關(guān)系數(shù)為0.9997。檢出限(3S／N)為1.55μg·L-1。

　　2.6精密度試驗(yàn)

　　按試驗(yàn)方法對(duì)香精樣品溶液連續(xù)測(cè)定6次，測(cè)定值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.08%。

　　2.7樣品分析

　　按試驗(yàn)方法對(duì)30多個(gè)食品添加劑進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明：所測(cè)定的食品添加劑中均未檢出水楊酸。在空白香精、香料樣品中加入適量標(biāo)準(zhǔn)溶液，按試驗(yàn)方法處理樣品并測(cè)定，回收試驗(yàn)結(jié)果見表1。

　　本工作采用高效液相色譜法測(cè)定食品添加劑中的禁用防腐劑水楊酸含量，方法操作簡(jiǎn)便、靈敏度高、且實(shí)用性較強(qiáng)，能夠用于大多數(shù)食品添加劑的測(cè)定，對(duì)保證食品添加劑的安全性有重要的意義。