聚合酶鏈反應(yīng)(基因擴增):基本原理類似于DNA的天然復(fù)制過程,其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。PCR是模擬體內(nèi)DNA復(fù)制過程,在體外特異性擴增DNA片段的一種技術(shù)。
二、PCR的應(yīng)用領(lǐng)域
1、遺傳病和某些疑難病的診斷
2、病原體的檢測。某些惡性疾病一般用微生物學(xué)、生化和免疫 學(xué)技術(shù)無法查出病原體時,可用PCR來檢查。
3、法醫(yī)和刑偵鑒定。
4、癌基因的檢查。
5、基因探針的制備。
6、基因組測序、染色體巡視。
7、cDNA庫的構(gòu)建。
8、基因突變的分析和定位誘變。
9、DNA重組。
10、基因的分享和克隆。
三、標準的PCR過程,分為三步:
1. DNA變性
(90℃-96℃):雙鏈DNA模板在熱作用下,氫鍵斷裂,形成單鏈DNA
2. 退火
(60℃-65℃):系統(tǒng)溫度降低,引物與DNA模板結(jié)合,形成局部雙鏈。
3. 延伸
(70℃-75℃):在Taq酶(在72℃左右,活性最佳)的作用下,以dNTP為原料,從引物的3′端開始以從5′??′端的方向延伸,合成與模板互補的DNA鏈。