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微生物無(wú)菌操作技術(shù)

嘉峪檢測(cè)網(wǎng)        2017-09-01 11:43

一、無(wú)菌操作技術(shù)

1、定義 

是指在執(zhí)行實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,防止一切微生物侵入機(jī)體和保持無(wú)菌物品及無(wú)菌區(qū)域不被污染的操作技術(shù)和管理方法;

無(wú)菌操作技術(shù)是微生物實(shí)驗(yàn)的基本技術(shù),是保證微生物實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確和順利完成的重要環(huán)節(jié)。

 

2、內(nèi)容

無(wú)菌操作技術(shù)主要包括兩方面:

1)創(chuàng)造無(wú)菌的培養(yǎng)環(huán)境。包括提供密閉的培養(yǎng)容器、培養(yǎng)容器的滅菌、培養(yǎng)基的滅菌等;

2)在操作和培養(yǎng)過(guò)程中防止一切其它微生物的侵入的措施。包括紫外線殺菌、甲醛熏蒸、超凈臺(tái)的消毒與檢測(cè)、操作工具、器皿滅菌、操作方法等。

 

3、無(wú)菌操作原則

1)在執(zhí)行無(wú)菌操作時(shí),必須明確物品的無(wú)菌區(qū)和非無(wú)菌區(qū),接種時(shí)必須穿工作服、戴工作帽,應(yīng)在進(jìn)無(wú)菌室前用肥皂洗手,然后用75%酒精棉球?qū)⑹植粮蓛簦?/span>

2)在操作前20~30分鐘要先啟動(dòng)超凈臺(tái)和紫外燈,進(jìn)行接種所用的吸管、平皿及培養(yǎng)基等必須經(jīng)消毒滅菌,打開包裝未使用完的器皿,不能放置后再使用,金屬用具應(yīng)高壓滅菌或用95%酒精點(diǎn)燃燒灼3次后使用。嚴(yán)禁用手直接拿無(wú)菌物品,如瓶塞等,而必須用消毒的鉗、鑷子等;

3)從包裝中取出吸管時(shí),吸管尖部不能觸及外露部位,使用吸管接種于試管或平皿時(shí),吸管尖不能觸及試管或平皿邊;

4)接種樣品、轉(zhuǎn)種細(xì)菌必須在酒精燈前操作,接種細(xì)菌或樣品時(shí),吸管從包裝中取出后及打開試管塞都要通過(guò)火焰消毒;

5)接種環(huán)或接種針在接種細(xì)菌前應(yīng)經(jīng)火焰燒灼全部金屬絲,必須時(shí)還要燒到環(huán)和針與桿的連接處;

6)吸管吸取菌液或樣品時(shí),應(yīng)用相應(yīng)的橡皮頭吸取,不得直接用口吸。傾倒平板應(yīng)在超凈臺(tái)內(nèi)操作,并且在開啟和加蓋瓶塞時(shí)需反復(fù)用酒精燈燒。

 

二、無(wú)菌操作的環(huán)境要求

1、無(wú)菌室

(1)無(wú)菌室的結(jié)構(gòu):更衣間、緩沖間、操作間;

(2)無(wú)菌室的消毒和防污染

•每日(使用前)紫外線照射(0.5~1小時(shí));

•每月用新潔爾滅擦拭地面和墻壁一次的方式進(jìn)行消毒;

•每季度用甲醛、乳酸、過(guò)氧乙酸熏蒸(2小時(shí)),特殊情況下可增加熏蒸頻次。

 

(3)無(wú)菌室使用要求

①無(wú)菌室內(nèi)應(yīng)保持清潔,工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒,拭擦工作臺(tái)面,不得存放與實(shí)驗(yàn)無(wú)關(guān)的物品;

②無(wú)菌室使用前后應(yīng)將門關(guān)緊,打開紫外線,如采用室內(nèi)懸吊紫外燈消毒時(shí),需30W紫外燈,距離在1.0m處,照射時(shí)間不少于30min,使用紫外燈,應(yīng)注意不得直接在紫外線下操作,以免引起損傷,燈管每隔兩周需用酒精棉球輕輕拭擦,除去上面灰塵和油垢,以減少紫外線穿透的影響;

③處理和接種食品標(biāo)本時(shí),進(jìn)入無(wú)菌室操作,不得隨意出入,如需要傳遞物品,可通過(guò)小窗傳遞。在無(wú)菌室內(nèi)如需要安裝空調(diào)時(shí),則應(yīng)有過(guò)濾裝置。

 

2、超凈工作臺(tái)

超凈臺(tái)的使用與保養(yǎng):

(1)風(fēng)速穩(wěn)定,且符合要求;

(2)使用前開啟紫外燈照射30分鐘以上;

(3)讓超凈臺(tái)預(yù)工作10-15分鐘;

(4)使用完畢后,用70%酒精將臺(tái)面和臺(tái)內(nèi)四周擦拭干凈。

 

3、無(wú)菌器材

(1)滅菌器材:玻璃器皿、培養(yǎng)基、無(wú)菌衣等;

(2)消毒器材:無(wú)菌室內(nèi)的凳子、試管架、天平、工作臺(tái)、手等。

(3)無(wú)菌間一般只允許放置無(wú)菌操作臺(tái)、轉(zhuǎn)椅等物品;無(wú)菌操作臺(tái)上一般只允許擺放以下物品: 酒精燈、打火機(jī)、接種針、消毒棉球、洗耳球、鑷子、油性筆、滅菌平皿、試管架、滅菌吸管、電子天平、250ml滅菌三角瓶、培養(yǎng)基、均質(zhì)器等。

 

三、無(wú)菌操作的基本技術(shù)

1、無(wú)菌接種操作

培養(yǎng)基經(jīng)高壓滅菌后,用經(jīng)過(guò)滅菌的工具(如接種針和吸管等)在無(wú)菌條件下接種含菌材料(如樣品、菌苔或菌懸液等)于培養(yǎng)基上,這個(gè)過(guò)程叫做無(wú)菌接種操作。

在實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)中的各種接種必須是無(wú)菌操作。

 

2、微生物檢驗(yàn)過(guò)程中的無(wú)菌操作要求

(1)在操作中不應(yīng)有大幅度或快速的動(dòng)作;

(2)使用玻璃器皿應(yīng)輕取輕放;

(3)在正火焰上方操作;

(4)接種用具在使用前、后都必須灼燒滅菌;

(5)在接種培養(yǎng)物時(shí),協(xié)作應(yīng)輕、準(zhǔn);

(6)不能用嘴直接吸吹吸管;

(7)帶有菌液的吸管、玻片等器材應(yīng)及時(shí)置于盛有5%來(lái)蘇爾溶液的消毒桶內(nèi)消毒。

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來(lái)源:AnyTesting

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