中文字幕一级黄色A级片|免费特级毛片。性欧美日本|偷拍亚洲欧美1级片|成人黄色中文小说网|A级片视频在线观看|老司机网址在线观看|免费一级无码激情黄所|欧美三级片区精品网站999|日韩av超碰日本青青草成人|一区二区亚洲AV婷婷

一、接種

1、接種定義

接種：將微生物接到適于它生長繁殖的人工培養(yǎng)基上或活的生物體內(nèi)的過程叫做接種。

 

2、接種工具

在實驗室中，用得最多的接種工具是接種環(huán)、接種針。有時滴管、吸管也可作為接種工具進行液體接種。在固體培養(yǎng)基表面要將菌液均勻涂布時，需要用到涂布棒。

 

3、微生物檢驗常見接種方法

（1）劃線接種法

 

平板劃線分離法--分區(qū)劃線分離法

①用接種環(huán)先將培養(yǎng)物涂布于平板1區(qū)并作數(shù)次劃線，再在2、3……區(qū)依次劃線；

②每劃完一個區(qū)域，轉(zhuǎn)動培養(yǎng)皿約70度角，并將接種環(huán)滅菌一次，待冷后再劃下一區(qū)域；

③每一區(qū)域的劃線均接觸上一區(qū)域的接種線1～2次，使接種量逐漸減少，以獲得單個菌落；

④其他操作與上述曲線劃線分離法相同。

 

（2）斜面接種法

主要用于經(jīng)劃線分離培養(yǎng)所獲得的單個菌落的移種，以及觀察細菌的某些培養(yǎng)特征。

以菌種移種為例，其接種方法是：

①  取一菌種管和培養(yǎng)基管，置左手食指、中指、無名指間，拇指壓住兩管底部上側(cè)面，使菌種管位于外側(cè)，培養(yǎng)基管位于內(nèi)側(cè)；

②  右手拇指和食指分別旋松兩管棉塞?；鹧鏈缇臃N環(huán)；

③  以右手小指與手掌，小指與無名指分別夾取棉塞（先外管后內(nèi)管），將兩管口迅速通過火焰1~2次；

④將已滅菌的接種環(huán)伸入菌種管中，從斜面上取菌少許，迅速伸入待接種的培養(yǎng)基管中，在斜面底部向上劃一條直線，然后從底部起向上作曲折連續(xù)劃線，直至斜面上方頂端；

⑤取出接種環(huán)，火焰滅菌管口，塞上棉塞（先塞內(nèi)管）；最后將接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌放好；

⑥做好標識，置35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18~24小時。斜面培養(yǎng)一般形成均勻一致的菌苔。一般可觀察表面、透明度、色澤等特征。

 

（3）涂布接種法

涂布法接種是一種常用的接種方法，不僅可以用于計算活菌數(shù)，還可以利用其在平板表面生長形成菌苔的特點用于檢測化學(xué)因素對微生物的抑殺效應(yīng)。

原理：將一定濃度，一定量的待分離菌液移到已凝固的培養(yǎng)基平板上，再用涂布棒快速地將其均勻涂布，使長出單菌落而達到分離的目的。

 

（4）液體接種法（肉湯接種）

①如斜面接種法持好菌種管及培養(yǎng)基管；

②滅菌接種環(huán)，從菌種管取菌，伸入培養(yǎng)基管中，在接近液面的管壁上方輕輕研磨，并沾取少許培養(yǎng)基液體調(diào)和，使細菌混合于培養(yǎng)基的液體中。液體培養(yǎng)基一般以18~24小時培養(yǎng)后觀察生長特征。

肉湯培養(yǎng)可觀察如下幾項：

a.發(fā)育程度：有無生長、微弱、中等、旺盛；

b.混濁度：有無及程度（混、中等、微混、透明）、均勻混濁、有顆粒、絮狀生長；

c.沉淀：有無及量多少、性狀（粉狀、顆粒狀、絮狀、沾性）；

d.表面：有無生長、性狀（膜狀、環(huán)狀）、菌膜厚薄及表面特征（光滑、顆粒、皺狀）；

e.其他：有無特殊氣味，色素。如果是糖發(fā)酵培養(yǎng)基則主要觀察是否產(chǎn)酸和有無氣體。

 

（5）穿刺接種法（半固體接種）

多用于保存菌種、觀察動力及厭氧培養(yǎng)等也可以用于觀察細菌的某些生化反應(yīng)。

①如斜面接種法持好菌種管及培養(yǎng)基管；

②以滅菌接種針從菌種管取菌，垂直刺入培養(yǎng)基的中心（半固體或一般瓊脂高層）直達近管底部（但不能完全刺到管底），接種針應(yīng)沿原路退出；

③經(jīng)培養(yǎng)后半固體培養(yǎng)基可觀察到：沿穿刺線生長，線外的培養(yǎng)基清亮表示細菌無動力；穿刺線模糊不清，或沿穿刺線向外擴散生長，或整個培養(yǎng)基混濁表示細菌有動力。

 

二、分離純化

1、幾個定義

混和培養(yǎng)物：含有一種以上的微生物培養(yǎng)物稱為混和培養(yǎng)物（Mixed culture）；

純培養(yǎng)：如果在一個菌落中所有細胞均來自于一個親代細胞，那么這個菌落稱為純培養(yǎng)（Pure culture）；

分離純化：在進行菌種鑒定時，所用的微生物一般均要求為純的培養(yǎng)物，得到純培養(yǎng)的過程稱為分離純化。包括傾注平板法、涂布平板法、平板劃線法等等。

 

2、傾注平板法（倒平板）

將無菌培養(yǎng)皿放入生物安全柜或凈化臺中，然后分別倒入15ml已融化并且冷卻至45℃左右的牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基，加蓋后輕輕搖動培養(yǎng)皿，使培養(yǎng)基均勻分布，待凝固之后，把這平板倒置在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。單一細胞經(jīng)過多次增殖后形成一個菌落，取單個菌落制成懸液，重復(fù)上述步驟數(shù)次，便可得到純培養(yǎng)物。整個操作過程應(yīng)嚴格按照無菌操作。

 

三、微生物的培養(yǎng)方法

微生物的生長，除了受本身的遺傳特性決定外，還受到許多外界因素的影響，如營養(yǎng)物濃度、溫度、水分、氧氣、pＨ等。微生物的種類不同，培養(yǎng)的方式和條件也不盡相同。通常分為：

 

1、一般培養(yǎng)法（需氧培養(yǎng)）   

培養(yǎng)溫度：25~37℃ 。

 

2、厭氧培養(yǎng)方法

（1） 簡易的厭氧培養(yǎng)法：

A、 庖肉培養(yǎng)法

B、鐵絲圈厭氧培養(yǎng)法

C、焦性沒食子酸法

（2） 厭氧罐法

（3） 厭氧手套箱法

 

厭氧缸法：

厭氧缸是普通的干燥缸，用物理化學(xué)的方法使缸內(nèi)造成厭氧環(huán)境，從而將厭氧菌培養(yǎng)出來。

接種好標本的平板或液體培養(yǎng)基試管，可放入?yún)捬醺變?nèi)培養(yǎng)。

厭氧罐法：

裝入待培養(yǎng)的對象，然后密閉罐蓋，接著可采用抽真空→灌氮→抽真空→灌氮→抽真空→灌混合氣（N2∶CO2∶H2=80∶10∶10，V/V）。

 

3、二氧化碳培養(yǎng)法

（1）燭缸法

（2）二氧化碳置換法

（3）化學(xué)法

每一升用重碳酸鈉0.4克與濃鹽酸0.35亳升加入。

（4）二氧化碳培養(yǎng)箱法

 

四、微生物常規(guī)鑒定技術(shù)

1、形態(tài)結(jié)構(gòu)和培養(yǎng)特性觀察

（1）在固體培養(yǎng)基上，觀察：

菌落大小、形態(tài)、顏色（色素是水溶性還是脂溶性）、光澤度、透明度、質(zhì)地、隆起形狀、邊緣特征及遷移性等；

 

（2）在液體培養(yǎng)中：

表面生長情況（菌膜、環(huán)）混濁度及沉淀等；

 

（3）半固體培養(yǎng)基穿刺接種：

觀察運動、擴散情況。

 

2、染色鏡檢

（1）染色原理

由于微生物細胞含有大量水分，機體是無色透明的，與周圍背景沒有明顯的反差， 必須進行染色，使經(jīng)染色后的菌體與背景形成明顯的色差，從而能更清楚地觀察到其形態(tài)和結(jié)構(gòu)。

微生物中細菌、致病菌是很小的生物體，必須通過染色的方法，在顯微鏡下才能看得清楚，并且還可以通過染色的方法鑒別革蘭氏染色特性，以及是否長有鞭毛、周毛、莢膜和芽孢等。

 

（2）染色方法

①簡單染色法

簡單染色法又叫作普通染色法，只用一種染料使細菌染上顏色，觀察細菌的形態(tài)。

②復(fù)染色法

用兩種或多種染料染細菌，目的是為了鑒別不同性質(zhì)的細菌，所以又叫鑒別染色法。主要的復(fù)染色法有革蘭氏染色法和抗酸性染色法。

 

（3）革蘭氏染色法

①原理

革蘭氏染色法是細菌學(xué)中廣泛使用的一種鑒別染色法。1884年由丹麥醫(yī)師Gram創(chuàng)立。

染色反應(yīng)呈藍紫色的稱為革蘭氏陽性細菌，用G+表示；

染色反應(yīng)呈紅色的稱為革蘭氏陰性細菌，用G―表示。

細菌對革蘭氏染色的不同反應(yīng)，是由于它們細胞壁的成分和結(jié)構(gòu)不同而造成的。

②細菌的革蘭氏染色步驟

涂片→干燥→固定→初染→水洗→媒染→水洗→脫色→水洗→復(fù)染→水洗→干燥→觀察

A）取培養(yǎng)物分別做涂片、干燥、固定，方法均與簡單染色的相同；

B）用草酸銨結(jié)晶紫染色1min后水洗；

C）加碘液媒染1min后水洗；

D）斜置載玻片，滴加95％乙醇脫色，至流出的乙醇不現(xiàn)紫色為止，大約需時20～30s，隨即水洗；

E）用蕃紅染液復(fù)染30s，水洗；

F）用吸水紙吸掉水滴，待標本片干后置顯微鏡下，用低倍鏡觀察，發(fā)現(xiàn)目的物后用油鏡觀察，注意細菌細胞的顏色。