食用植物油中乙基麥芽酚的測定
（BJS 201708）
1、范圍
本方法規(guī)定了食用植物油中乙基麥芽酚的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜定性確證和定量測定方法。
本方法適用于芝麻油、芝麻調(diào)和油、菜籽油等食用植物油中乙基麥芽酚的確證及測定。
2、原理
用甲醇提取試樣中的乙基麥芽酚后，采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀檢測，外標(biāo)峰面積法定量。
3、試劑和材料
除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682規(guī)定的一級水。
3.1 試劑
3.1.1甲醇（CH3OH)：色譜純。
3.1.2甲酸（HCOOH）：色譜純。
3.2 乙基麥芽酚標(biāo)準(zhǔn)品
乙基麥芽酚標(biāo)準(zhǔn)品的分子式、相對分子量、CAS登錄號見表1，純度≥99%。
表1 乙基麥芽酚標(biāo)準(zhǔn)品的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子量
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中文名稱 |
英文名稱 |
CAS登錄號 |
分子式 |
相對分子量 |
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乙基麥芽酚 |
Ethyl maltol |
4940-11-8 |
C7H8O3 |
140.14 |
3.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制
3.3.1乙基麥芽酚標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液：準(zhǔn)確稱取乙基麥芽酚標(biāo)準(zhǔn)品（3.2）100.0mg（精確至0.000 1 g），用甲醇溶解并定容至100 mL，此溶液濃度為1 mg/mL。貯存于4℃冰箱中，有效期3個(gè)月。
3.3.2乙基麥芽酚標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液：將乙基麥芽酚標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（3.3.1）用甲醇逐級稀釋成1.25µg/mL、2.5µg/mL、5µg/mL、25µg/mL、50µg/mL標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，準(zhǔn)確稱取與試樣基質(zhì)相應(yīng)的陰性試樣10g（精確至0.01g），分別加入標(biāo)準(zhǔn)系列溶液200µL，與試樣同時(shí)進(jìn)行提取，制成最終濃度為12.5ng/mL、25ng/mL、50ng/mL、250ng/mL、500ng/mL標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液。臨用時(shí)配制。
3.4 0.1%甲酸水溶液：取甲酸1mL用水稀釋至1000mL，用濾膜（0.22 µm，水相）過濾后備用。
3.5 0.1%甲酸甲醇溶液：取甲酸1mL用甲醇稀釋至1000mL，用濾膜（0.22 µm，有機(jī)相）過濾后備用。
4、儀器和設(shè)備
4.1液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源。
4.2 渦旋振蕩器。
4.3 分析天平：感量為0. 1 mg和0.01 g。
4.4 離心機(jī)：可冷卻至4℃，轉(zhuǎn)速9000 r/min以上。
4.5 具塞刻度試管：20 mL。
4.6 聚丙烯離心管：50 mL。
4.7 移液器：10 mL和250µL。
5、分析步驟
5.1 試樣制備
準(zhǔn)確稱取10g試樣（精確至0.01g）置于50 mL聚丙烯離心管中，用移液器準(zhǔn)確加入10mL甲醇(3.1.1)，渦旋振搖2min，4℃條件下9000 r/min離心10min，將上清液移入20mL具塞刻度試管中，下層油液再用10mL甲醇重復(fù)提取一次，合并上清液，用甲醇定容至20mL，經(jīng)微孔濾膜（0.22 µm，有機(jī)相）過濾，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析。
5.2 儀器參考條件
5.2.1 液相色譜條件
a)色譜柱：C18色譜柱，100mmX 2.1mm（i.d.），1.7μm，或性能相當(dāng)者。
b)流動相：A 為0.1%甲酸水溶液（3.4），B 為0.1%甲酸甲醇溶液（3.5），梯度洗脫程序見表2。
c)流速：0.3 mL/min。
d)柱溫：40℃。
e)進(jìn)樣量：2μL。
表2 梯度洗脫程序
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時(shí)間/min |
流動相比例/（%） |
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流動相A |
流動相B |
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0 |
50 |
50 |
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0.5 |
50 |
50 |
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1.5 |
15 |
85 |
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2 |
15 |
85 |
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4 |
5 |
95 |
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5 |
5 |
95 |
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5.1 |
50 |
50 |
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7 |
50 |
50 |
5.2.2 質(zhì)譜條件
a）電離方式：電噴霧正離子模式；
b）監(jiān)測方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）；
c）氣簾氣：40 psi；
d) 碰撞氣：7 psi；
e）離子噴霧電壓：5500V；
f）離子源溫度：600℃；
g）定性離子對、定量離子對、去簇電壓和碰撞能見表3。
表3 乙基麥芽酚的定性離子對、定量離子對、去簇電壓和碰撞能
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中文名稱 |
定性離子對/(m/z) （母離子/子離子） |
定量離子對/(m/z) （母離子/子離子） |
去簇電壓/V |
碰撞能/V |
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乙基麥芽酚 |
141.1/126.1 |
141.1/126.1 |
130 |
27 |
|
141.1/71.0 |
130 |
37 |
5.3 定性確證
按照儀器參考條件（5.2）測定試樣溶液和標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，如果試樣中的乙基麥芽酚質(zhì)量色譜峰保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)工作溶液一致（變化范圍在±2.5%之內(nèi)）；且試樣中乙基麥芽酚的兩個(gè)子離子的相對豐度比(k)與濃度相當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中乙基麥芽酚的兩個(gè)子離子的相對豐度比相比，其允許偏差不超過表4規(guī)定的范圍，則可判定為試樣中存在乙基麥芽酚。
表4 定性確證時(shí)相對離子豐度的最大允許偏差
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相對離子豐度（%） |
k>50 |
50≥k>20 |
20≥k>10 |
k≤10 |
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允許的最大偏差（%） |
± 20 |
± 25 |
± 30 |
± 50 |
乙基麥芽酚的參考保留時(shí)間約為1.35 min，質(zhì)量色譜圖參見附錄A中圖A.1-圖A.2。
5.4定量測定
5.4.1 工作曲線的制作
將乙基麥芽酚標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液（3.3.2）按儀器參考條件（5.2）進(jìn)行測定，得到相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液的質(zhì)量色譜峰面積。以標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液的濃度為橫坐標(biāo)，以質(zhì)量色譜峰的峰面積為縱坐標(biāo)，繪制工作曲線。
5.4.2 試樣溶液的測定
將試樣溶液（5.1）按儀器參考條件（5.2）進(jìn)行測定，得到相應(yīng)的試樣溶液的質(zhì)量色譜峰面積。根據(jù)工作曲線得到試樣溶液中乙基麥芽酚的濃度。
6、結(jié)果計(jì)算
試樣中乙基麥芽酚含量按式（1）計(jì)算：
…………………………………………（1）
式中：
X—試樣中乙基麥芽酚的含量，單位為微克每千克（μg/kg）；
c—由工作曲線得出的試樣溶液中乙基麥芽酚的濃度，單位為納克每毫升（ng/mL）；
V—試樣溶液定容體積，單位為毫升（mL）；
m—試樣質(zhì)量，單位為克（g）；
計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。
7、回收率及精密度
芝麻油、芝麻調(diào)和油、菜籽油中乙基麥芽酚加標(biāo)濃度為25μg/kg、50μg/kg和250μg/kg時(shí)，乙基麥芽酚的回收率在80.5% ~ 109.3%之間，精密度在0.7%~6.2%之間。
8檢出限
當(dāng)取樣量為10.00g，定容體積為20mL時(shí)，本方法中乙基麥芽酚的檢出限為25.0 μg/kg。
附錄A
乙基麥芽酚標(biāo)準(zhǔn)溶液多反應(yīng)監(jiān)測質(zhì)量色譜圖
圖A.1乙基麥芽酚定量離子對質(zhì)量色譜圖(m/z141.1/126.1)
圖A.2乙基麥芽酚定性離子對質(zhì)量色譜圖(m/z141.1/71.0)
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