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        維生素A（Vit A）是最早被認(rèn)識(shí)并應(yīng)用于臨床的維生素，屬脂溶性維生素，為全反式視黃醇的一組有活性的β2紫香酮的衍生物，包括視黃醇、視黃醛、視黃酸（RA）及其酯類[1]。Vit A對(duì)機(jī)體的生長(zhǎng)發(fā)育、組織細(xì)胞增殖與分化均具有廣泛的調(diào)控作用[2]。魚(yú)肝油收載于《中國(guó)藥典》2005年版，是維生素類非處方藥，其中含有維生素A和D是人體生長(zhǎng)發(fā)育的必需物質(zhì)，尤其是對(duì)胎兒、嬰幼兒的發(fā)育，上皮組織的完整性，視力，血鈣和磷的恒定，骨骼、牙的發(fā)育等有重要作用。復(fù)合魚(yú)肝油制劑是由魚(yú)肝油及多種維生素和輔料加工制成的溶液劑，臨床用于預(yù)防和治療因維生素A和D以及B族維生素缺乏所致的各種疾病。為了解本品質(zhì)量，保證臨床療效，我科采用高效液相色譜法測(cè)定復(fù)合魚(yú)肝油制劑中維生素A的含量，現(xiàn)報(bào)道如下： 
　　 
　　1 儀器與試藥 
　　島津LC-10ATVP高效液相色譜儀，大連中北色譜工作站；AT-201電子分析天平（分辨率d=0.01 mg，瑞士梅特勒)，島津UV-2550紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)。維生素A醋酸酯對(duì)照品（規(guī)格：20 mg，含量為100%，廣州珠江制藥廠提供）；復(fù)合魚(yú)肝油制劑（魚(yú)肝油乳劑，規(guī)格：500 ml/瓶，國(guó)藥準(zhǔn)字H44024528，廣州珠江制藥廠生產(chǎn)，批號(hào)：081105；081102；080202）。甲醇為色譜純，水為雙蒸純化水，其他試劑為分析純。 　　 
　　2 方法與結(jié)果 
　　2.1 色譜條件 
　　選擇迪馬（Diamonsil） C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色譜柱，流動(dòng)相為甲醇-水（95∶5），檢測(cè)波長(zhǎng)為326 nm，流速為1.0 ml/min，進(jìn)樣量為20 μl，柱溫為35℃。 
　　2.2 溶液的制備 
　　2.2.1 對(duì)照品溶液制備 
　　取維生素A醋酸酯對(duì)照品約100 mg，精密稱定，置100 ml容量瓶中，加環(huán)己烷至刻度制成每1 ml含1 mg維生素A醋酸酯的對(duì)照品貯備液。精密吸取10 ml貯備液，置100 ml容量瓶中，用甲醇稀釋成每1 ml含0.1 mg維生素A醋酸酯的對(duì)照品溶液。 
　　2.2.2 供試品溶液制備 
　　精密量取復(fù)合魚(yú)肝油制劑5 ml置分液漏斗中，加入無(wú)水乙醇20 ml，振搖5 min，精密加入環(huán)己烷25 ml，強(qiáng)力振搖15 min，靜置使其分層；將無(wú)水硫酸鈉鋪至濾器，棄去水層，將環(huán)己烷層液體倒入濾器過(guò)濾，精密量取濾過(guò)液5 ml，置25 ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻即得。 
　　2.2.3 陰性樣品溶液制備 
　　按處方組分比例制備成缺維生素A的陰性樣品，按照供試品溶液制備方法制成陰性樣品溶液。 
　　2.3 線性關(guān)系考察 
　　精密吸取濃度為0.1 mg/ml的維生素A醋酸酯對(duì)照品貯備液1.0、2.0、4.0、6.0、12.0 ml，置100 ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度。搖勻后分別精密量取20 μl進(jìn)樣，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定。按照維生素A 1 IU =0.344 μg 維生素A 醋酸酯換算。記錄色譜峰面積，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，以對(duì)照品進(jìn)樣量（IU/ml）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，得回歸方程Y=6.137 8X-0.615 3，r=0.999 6。結(jié)果表明：維生素A進(jìn)樣量在2.907 0~34.883 7 IU/ml（1~12 μg/ml）范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。 
　　2.4 陰性對(duì)照試驗(yàn) 
　　取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液，分別進(jìn)樣20 μl，結(jié)果在維生素A色譜峰相應(yīng)保留時(shí)間為6.8~10.0 min，陰性樣品溶液無(wú)干擾峰出現(xiàn)。維生素A 的保留時(shí)間為8.85 min。 
　　2.5 精密度試驗(yàn) 
　　精密吸取供試品溶液，進(jìn)樣20 μl，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定維生素A峰面積，結(jié)果RSD為0.48%，表明本法精密度良好。 

　　2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 

　　取同一供試品溶液，室溫放置，分別于0、0.5、1、2、4、8 h進(jìn)樣20 μl，測(cè)定維生素A峰面積。結(jié)果RSD為0.75%，表明樣品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。 
　　2.7 重現(xiàn)性試驗(yàn) 
　　取供試品樣品（批號(hào)分別為081105；081102；080202），每批3份，共9份，依“2.2.2供試品溶液”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別進(jìn)樣20 μl測(cè)定，RSD為0.58%，表明本法重現(xiàn)性良好。 
　　2.8 回收率試驗(yàn) 
　　取已知含量的復(fù)方魚(yú)肝油制劑樣品（081105）6份各4 ml，分別加入精密吸取濃度為0.1 mg/ml的維生素A醋酸酯對(duì)照品貯備液1.0 ml，按供試品溶液制備方法加入無(wú)水乙醇20 ml，振搖5 min后，精密加入環(huán)己烷25 ml，強(qiáng)力振搖15 min，靜置使其分層；將無(wú)水硫酸鈉鋪至濾器，棄去水層，將環(huán)己烷層液體倒入濾器過(guò)濾，精密量取續(xù)濾液5 ml，置50 ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，充分搖勻，分別進(jìn)樣20 μl測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果顯示其平均回收率為98.84%，RSD為0.75%?！　?nbsp;
　　2.9 樣品含量測(cè)定 
　　分別取“2.7”中所述三批次復(fù)方魚(yú)肝油制劑樣品各3份，共9份，依法制備供試品溶液，分別進(jìn)樣20 μl測(cè)定含量，按外標(biāo)法計(jì)算含量，詳細(xì)結(jié)果見(jiàn)表2。 
　　3 討論 
　　維生素A是第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)，也是一種極其重要、極易缺乏的，為人體維持正常代謝和機(jī)能所必需的脂溶性維生素[4]。常見(jiàn)的檢測(cè)維生素A的方法主要有比色法、紫外分光光度法、近紅外光譜法和高效液相色譜法[5]?！吨袊?guó)藥典》中對(duì)魚(yú)肝油乳劑中維生素A的測(cè)定采用計(jì)算分光光度法[6]，測(cè)定前需將魚(yú)肝油制劑進(jìn)行皂化處理，而皂化的處理過(guò)程容易導(dǎo)致維生素A降解，且測(cè)定步驟繁瑣，計(jì)算復(fù)雜。測(cè)量時(shí)，容易出現(xiàn)測(cè)量值，校正值的差與測(cè)量值的比值超過(guò)-15~3的范圍，導(dǎo)致含量無(wú)法計(jì)算，且不同儀器間誤差較大[5]。高效液相色譜的基本原理是將微量經(jīng)過(guò)提純的試樣注入加樣系統(tǒng)，在高壓條件下，試樣被流動(dòng)相帶入色譜柱內(nèi)，按照樣品所含物質(zhì)在固定相與流動(dòng)相之間的分配系數(shù)、分子極性的大小以及所帶的電荷數(shù)的多少，經(jīng)過(guò)固定相與流動(dòng)相之間多次交換進(jìn)行分離，通過(guò)檢測(cè)器檢測(cè)，根椐檢測(cè)獲得的色譜結(jié)果峰高或峰面積可以精確地計(jì)算出所測(cè)物質(zhì)的含量，方法簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確。 
　　本品為復(fù)合魚(yú)肝油制劑，成分復(fù)雜，干擾成分較多，因此，在測(cè)定含量時(shí)我們對(duì)維生素A采用無(wú)水乙醇和環(huán)己烷提取，以甲醇-水（95∶5）為流動(dòng)相，用流動(dòng)相稀釋維生素A對(duì)照品純品，置紫外分光光度計(jì)下掃描，測(cè)得維生素A最大吸收波長(zhǎng)為325~328 nm，故本實(shí)驗(yàn)采用326 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。采用HPLC法測(cè)定復(fù)合魚(yú)肝油制劑中維生素A的含量，可有效排除干擾，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，精密度高，可用于控制本品的質(zhì)量。