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實(shí)驗(yàn)室霉菌毒素檢測方法的建立

酶聯(lián)免疫吸附法

酶聯(lián)免疫吸附法（Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay，ELISA）是一種利用抗體和抗原之間的專一性將其結(jié)合，對目標(biāo)化合物進(jìn)行檢測的方法。

優(yōu)點(diǎn)：

特異性強(qiáng)、靈敏度高、操作簡單，試驗(yàn)過程中無需昂貴的試驗(yàn)儀器等優(yōu)點(diǎn)。但是該方法所需抗原、抗體的制備需要較高的專業(yè)技術(shù)水平，且通常只能檢測一種物質(zhì)，因此，多被用于快速篩選檢查。目前，已有多種ELISA檢測試劑盒問世，主要包括AFB1、OTA、ZEN、DON等。

缺點(diǎn)：

使用酶聯(lián)免疫吸附法受到檢測樣品數(shù)量的影響，成本投入問題，不能滿足生產(chǎn)一線檢測需求。

膠體金免疫層析法

免疫層析法是20世紀(jì)80年代發(fā)展起來的一種將膠體金免疫技術(shù)和色譜層析技術(shù)相結(jié)合的固相膜免疫分析方法。其原理是將抗體固定在硝酸纖維素膜(Nitrocellulose filter membrane，NC膜)的特定區(qū)域，當(dāng)NC膜的一端浸入樣品，在毛細(xì)管作用下，樣品向前游動，當(dāng)移動到有抗體的地方時(shí)，抗原與抗體特異性結(jié)合，一些標(biāo)記材料帶有顏色，所以結(jié)合的地方就會顯示出相應(yīng)的顏色，從而達(dá)到免疫診斷的效果。

優(yōu)點(diǎn)：

膠體金免疫層析法具有方法操作簡單、檢測時(shí)間短，檢測受干擾少，安全性高，污染少，不需要昂貴的檢測儀器適合各類霉菌毒素的快速檢測等優(yōu)點(diǎn)。

缺點(diǎn)：

成本投入高，不能對霉菌毒素進(jìn)行定量檢測。

霉菌毒素酶標(biāo)檢測實(shí)驗(yàn)室具備的檢測條件

1、ELISA專用高端酶標(biāo)儀

2、霉菌毒素ELISA試劑盒

3、霉菌毒素快速檢測卡

4、移液器、槍頭、離心管

5、技術(shù)服務(wù)及配套解決方案

霉菌毒素檢測方法的建立

（1）RT-6000酶標(biāo)儀的操作程序

1、適用范圍

本規(guī)程規(guī)定了RT-6000酶標(biāo)儀的操作程序及維護(hù)保養(yǎng)注意事項(xiàng)。

2、引用文件：RT-6000酶標(biāo)儀使用說明書

3、操作程序

3.1  開機(jī)，打開電源儀器處于自檢狀態(tài)，開機(jī)后，等待1分鐘預(yù)熱。

3.2  在酶標(biāo)儀測量項(xiàng)目設(shè)置選項(xiàng)中，設(shè)置系統(tǒng)參數(shù)。

3.3  根據(jù)要求編輯測量項(xiàng)目。

3.4  將酶標(biāo)板放入酶標(biāo)儀上，選擇測定項(xiàng)目和方法類型，然后在相應(yīng)空位上點(diǎn)擊實(shí)驗(yàn)序號。

3.5  單擊“開始”按鈕，酶標(biāo)儀自動進(jìn)行檢測，測定完成后，結(jié)果自動顯示在顯示屏上。

3.6  單擊打印，打印檢測結(jié)果，或手工抄錄結(jié)果。

3.7  檢測結(jié)束，取出酶標(biāo)板，清潔酶標(biāo)儀后關(guān)機(jī)。

4、維護(hù)保養(yǎng)及注意事項(xiàng)

4.1  保持酶標(biāo)儀以及工作環(huán)境清潔，光學(xué)部分防止塵埃污染。

4.2  液晶顯示器要用柔軟的布清潔

4.3  儀器應(yīng)在15℃-30℃溫度，相對濕度<85%環(huán)境下使用。

4.4  在測試過程中如果有錯(cuò)誤發(fā)生，點(diǎn)擊停止鍵，取消當(dāng)前測試。

4.4關(guān)閉酶標(biāo)儀，要按照規(guī)程操作進(jìn)行，切勿直接關(guān)閉電源。

（2）樣品處理方法

1、試劑盒的回溫，室溫（20-25℃）放置20min。

2、酶標(biāo)記物工作液和洗液的準(zhǔn)備

3、樣品處理

3.1  原料和飼料預(yù)處理

采用高速粉碎機(jī)粉碎樣品，過20目篩，分析天平準(zhǔn)確稱取所需檢測量樣品，置于100mL三角瓶，加入試劑盒規(guī)定量的甲醇溶液，搖床震蕩15min，過濾取濾液，作為待檢樣液。

3.2  檢測

3.2.1  取所需量的酶標(biāo)板條

3.2.2  各反應(yīng)孔依次加入50μL標(biāo)準(zhǔn)品和樣品。

3.2.3  各反應(yīng)孔依次加入50μL反應(yīng)工作液，混勻后，25℃恒溫避光孵育，時(shí)間按照試劑盒規(guī)定的時(shí)間。

3.2.4  洗板

3.2.5  加入100μL顯色劑，25℃顯色10min，顯色完成后加入100μL終止液，酶標(biāo)儀450nm處檢測吸光值。

幾種霉菌毒素檢測方法特定對照分析表