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嘉峪檢測(cè)網(wǎng) 2017-04-22 19:42
液體活檢的檢測(cè)對(duì)象主要有CTC、ctDNA、循環(huán)microRNA和Exsome(外泌體),其中,ctDNA可應(yīng)用于腫瘤的早期診斷、動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)腫瘤的發(fā)生發(fā)展及療效、耐藥檢測(cè)、復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估等,在腫瘤診治中前景廣闊,受到越來(lái)越多的關(guān)注。在5月份美國(guó)醫(yī)療保險(xiǎn)機(jī)構(gòu)Palmetto宣布將體細(xì)胞變異ctDNA分析測(cè)試納入其保險(xiǎn)范圍,可見(jiàn)液體活檢(ctDNA檢測(cè))的臨床價(jià)值已獲得醫(yī)保機(jī)構(gòu)的認(rèn)可,并有望在臨床推廣。
ctDNA是由腫瘤細(xì)胞釋放到血漿中的單鏈或者雙鏈DNA,攜帶有與原發(fā)腫瘤組織相一致的分子遺傳學(xué)改變。是一種特征性的腫瘤生物標(biāo)記物,并且可以被定性、定量和追蹤。但由于ctDNA含量低(<1.0%總cfDNA),片段短(180-200bp),半衰期短(~2小時(shí)),故其檢測(cè)對(duì)痕量核酸檢測(cè)技術(shù)提出全新的挑戰(zhàn)。
液體活檢能否真正落實(shí)到臨床應(yīng)用,有賴(lài)于檢測(cè)技術(shù)的臨床普及。目前具備極微量核酸基因突變檢測(cè)能力的技術(shù)主要有ARMS技術(shù)(包括Super-ARMS)、第二代測(cè)序(NGS)和數(shù)字PCR(ddPCR,包括BEAMing技術(shù)),這些技術(shù)也是近期液體活檢專(zhuān)家共識(shí)中推薦的檢測(cè)技術(shù)。
ARMS技術(shù)是目前歐盟及中國(guó)CFDA批準(zhǔn)用于臨床的血液檢測(cè)方法,更是血液EGFR突變檢測(cè)專(zhuān)家共識(shí)推薦的技術(shù)。ARMS技術(shù)具有簡(jiǎn)便快速,特異性好,技術(shù)普及度高等特點(diǎn),非常適合醫(yī)院廣泛開(kāi)展。作為腫瘤液體活檢臨床上唯一獲得法規(guī)支持的檢測(cè)技術(shù),EGFR突變血液檢測(cè)產(chǎn)品(采用ADx-ARMS法)已廣泛應(yīng)用于臨床診斷,讓越來(lái)越多的患者受益。同時(shí),ARMS技術(shù)自身也在不斷升級(jí)改造,Super-ARMS是ARMS技術(shù)的升級(jí)版,敏感度進(jìn)一步提高。隨著相關(guān)檢測(cè)試劑盒的開(kāi)發(fā)和產(chǎn)業(yè)化,未來(lái)有望成為普及性的臨床血液檢測(cè)方法。
NGS技術(shù)可檢測(cè)未知突變且檢測(cè)基因數(shù)量不受限,在檢測(cè)靈敏度方面亦有潛力可以挖掘,在腫瘤耐藥突變的監(jiān)測(cè)與研究等領(lǐng)域有很大的應(yīng)用潛力。然而,NGS建庫(kù)技術(shù)復(fù)雜,常規(guī)建庫(kù)測(cè)序方法使得血漿中含量極低的腫瘤信號(hào)完全淹沒(méi)在背景噪聲中,建庫(kù)過(guò)程原始信息丟失嚴(yán)重或成為敏感度潛力發(fā)揮的限制因素。同時(shí),由于NGS技術(shù)專(zhuān)業(yè)要求高、檢測(cè)流程及信息解讀標(biāo)準(zhǔn)化、檢測(cè)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)、費(fèi)用過(guò)高等限制了其臨床應(yīng)用。因此,NGS技術(shù)要實(shí)現(xiàn)在液體活檢中的臨床應(yīng)用,還有許多問(wèn)題亟待解決。
數(shù)字PCR技術(shù),具有極高的敏感性,可絕對(duì)定量;但該方法檢測(cè)通量較低,且不能檢測(cè)融合變異,目前應(yīng)用此技術(shù)進(jìn)行ctDNA檢測(cè)的試劑盒尚待開(kāi)發(fā)中。值得一提的是,作為檢測(cè)已知基因變異位點(diǎn)的檢測(cè)技術(shù),數(shù)字PCR技術(shù)與Super-ARMS技術(shù)具有高度的檢測(cè)一致性,且檢測(cè)靈敏度相當(dāng),從臨床普及性上來(lái)看,Super-ARMS更適合于臨床應(yīng)用推廣。
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