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國內外李斯特菌主要檢驗方法

嘉峪檢測網        2016-07-07 11:08

目前,食品微生物檢測體系主要包括,中國的國家標準(GB4789)和檢驗檢疫行業(yè)標準(SN)、國際化標準化組織(ISO)方法、美國食品藥品監(jiān)督局(FDA)、美國農業(yè)部(USDA)、美國官方分析化學師協(xié)會(AOAC)、加拿大健康保護部(MFLP)、歐盟食品安全局(EFSA)等檢測體系。
 
國內外李斯特菌主要檢驗方法
 
食品中單增李斯特菌(Li. monocytogenes)的傳統(tǒng)檢測方法主要包括增菌、分離和鑒定3 個環(huán)節(jié)。目前,分離環(huán)節(jié)常會采用顯色培養(yǎng)基,使其菌落顏色不同于其它干擾菌,實現(xiàn)快速分離。鑒定常采用生化反應和血清學反應。目前,生化反應的鑒定技術多采用數(shù)值分類鑒定和自動化檢測技術。
 
常見的李斯特菌快速檢測技術
傳統(tǒng)方法檢測費時費力操作要求高,因此,李斯特菌快速檢測技術和產品的開發(fā)是必要的。美國、歐盟等發(fā)達國家對微生物快速檢測方法的研究和產品認證體系相對成熟,各種不同的快檢系統(tǒng)和自動化儀器被推出,并得到廣泛的應用。當前,李斯特菌快速檢測方法為增菌以后,生化鑒定之前,對樣本進行快速篩選,以縮小檢測范圍,減少檢測任務,提高檢測效率。快速檢測方法主要包括酶底物顯色技術、免疫學和分子生物學檢測三大類。
 
 即用培養(yǎng)技術  即用培養(yǎng)基技術則省掉了前期準備工作,可以直接檢測樣品,從而節(jié)約了大量人力成本。目前,商業(yè)化的固定培養(yǎng)基技術主要有兩種:紙片法和即用平皿法。紙片法是指將顯色培養(yǎng)基固定于紙片上,上方再蓋一層帶有方格的透明薄膜,以方便計數(shù)。即用平皿法是指用已倒有培養(yǎng)基的平皿,接種操作與傳統(tǒng)涂板、劃線法一樣。其優(yōu)點和紙片法一樣,即省掉了前期準備工作,可以直接接種培養(yǎng)。此類產品主要有3M的Petrifilm試紙片、良潤生物的MicroFast®測試片、北京陸橋的Easy test 系列產品及綠洲生化的微生物測試片等,已被許多研究被證明與傳統(tǒng)方法的檢測結果無顯著性差別。
 
免疫學檢測法  該技術以抗原抗體免疫為基礎,制備特異性克隆抗體檢測細菌。目前國內外李斯特菌快速檢測的此類技術主要包括:酶聯(lián)熒光分析法(ELFA)、金標免疫層析技術、流式細胞技術等。ELFA 靈敏度比ELISA 高,并省去了ELISA 中的顏色反應,縮短反應時間;但缺點是成本較高,目前主要應用在自動酶聯(lián)熒光免疫檢測系統(tǒng)(VIDAS)上。金標免疫層析技術是將高度特異性抗單增李斯特菌抗原的抗體束縛在色原載體上,且可與固相支撐基質相分離。當檢測樣品中存在李斯特菌時,測試單元的試劑將會被展開,產生肉眼可見的確定性反應。流式細胞術是一種在功能水平上對單細胞或其他生物粒子進行定量分析和分選的檢測手段,它可以高速分析上萬個細胞,并能同時從一個細胞中測得多個參數(shù)。該檢測技術平均1min 即可得到檢測結果,無需培養(yǎng)和樣品制備,靈敏度可以達到1~100CFU,但儀器投入較大,檢測成本相對較高,對樣本的要求高,嚴重的制約這該技術在食品微生物檢測中的應用。
 
國內外李斯特菌主要檢驗方法
 
分子學檢測方法 主要包括核酸探針雜交技術、PCR 檢測技術等。DNA 探針法是將2 條堿基互補的DNA 鏈在適當?shù)臈l件下雜交,通過檢測樣品與標記性DNA 探針之間形成的雜交分子來檢測樣品中的單增李斯特菌,測定放射性或熒光強度即可得出樣品中單增李斯特菌的個數(shù)。PCR 是近年來廣泛應用的分子生物學檢測方法,在單增李斯特菌的檢測中以其遺傳物質高度保守的核酸序列(常用的靶序列包括hly、actA、prfA等)設計引物進行擴增。該方法特異性好,但靈敏度低,對樣品進行前處理后再進行擴增,可以提高檢出率和檢測靈敏度。國內外目前主要應用的PCR技術包括:實時熒光PCR(Real-time PCR)、多重PCR、恒溫擴增、RT-PCR 方法、IMS-PCR 檢測技術等。
 
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來源:AnyTesting

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