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摘要：目的 建立非布司他片的放大制備工藝，并評價(jià)自研制劑與原研制劑的體外一致性。方法 采用流化床工藝制粒，按2020年版《中國藥典（四部）》溶出度和釋放度測定法第二法（槳法）測定溶出度，以相似因子（f2）法評價(jià)自研制劑與原研制劑的相似性。結(jié)果 所制備的非布司他片f2為76～91，均大于50。結(jié)論 流化床制粒放大工藝可行，自研制劑與原研制劑的體外溶出行為一致。

 

非布司他為黃嘌呤氧化酶抑制劑，臨床用于治療高尿酸血癥伴痛風(fēng)，在降低血尿酸的同時(shí)還能改善血脂代謝異常，安全性較好［1-2］。非布司他片由日本武田北美制藥公司研發(fā)，最早上市于美國［3］。體內(nèi)外相關(guān)性研究可預(yù)測仿制制劑與原研制劑相似的體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)行為，降低研發(fā)成本，縮短研發(fā)周期［4-5］。本研究中開發(fā)了非布司他片的放大制備工藝，并依據(jù)原國家食品藥品監(jiān)督管理總局發(fā)布的相關(guān)指導(dǎo)原則［6-7］，開展了與原研制劑的體外一致性評價(jià)?，F(xiàn)報(bào)道如下。

 

1儀器與試藥

 

1. 1 儀器

 

708-DS型全自動(dòng)溶出儀（美國安捷倫公司）；Waterse2695型高效液相色譜儀（美國Waters公司），配有Waterse2695 型四元梯度泵、Waters 2489 型紫外檢測器、自動(dòng)進(jìn)樣器；MSA225s-100-DA型分析天平（德國Sartrious公司，精度為0. 01mg）；WBF-60 型多功能流化床（重慶英格造粒包衣技術(shù)有限公司）；ZLZ450型真空整粒機(jī)（武漢恒達(dá)昌機(jī)械設(shè)備有限公司）；HF300 型方錐混合機(jī)、GZPL40C型高速壓片機(jī)（南京邦斯特制藥設(shè)備有限公司）；BGB-75C 型包衣機(jī)（宜春萬申制藥機(jī)械有限公司）。

 

1. 2 試藥

 

非布司他對照品（批號(hào)為101278 - 202003，純度為100. 0%），十二烷基硫酸鈉（分析純，批號(hào)為20197656），均購自中國食品藥品檢定研究院；非布司他片（商品名Feburic < 菲布力 > ，安斯泰來制藥 < 中國 > 有限公司，批號(hào)為8155，規(guī)格為每片40mg）；非布司他自研制劑（批號(hào)分別為 2012404，2012405，2012406，規(guī)格為每片40mg）；非布司他原料藥［國內(nèi)某制藥廠，晶型A，粒 徑（D90）<50µm，批號(hào)為20198234］；乳糖（200目，德國美劑樂公司，批號(hào)為6397269）；PC-10型預(yù)膠化淀粉（日本旭化成株式會(huì)社，批號(hào)為5RJ071）；羥丙基纖維素（日本曹達(dá)株式會(huì)社，批號(hào)為NCD-2993）；SD - 711型交聯(lián)羧甲基纖維素鈉（DuPont Nutrition USA Inc. ，批號(hào)為 3201092c34）；硬脂酸鎂（曲阜市天利藥用輔料有限公司，批號(hào)為20182324）；胃溶型薄膜包衣預(yù)混劑（上海卡樂康包衣技術(shù)有限公司，批號(hào) 02F690004-CN）；乙腈（色譜純，德國Merck公司，批號(hào)為HBN0911）；冰醋酸（分析純 ，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司 ，批號(hào)為1000208）；水為純化水。

 

2方法與結(jié)果

 

2. 1 非布司他片放大制備工藝

 

原輔料過篩：將非布司他微粉化，測得合適的粒徑范圍，其他輔料過40目篩，按處方量稱取，備用。

物料混合：配制6%羥丙基纖維素溶液，依次將乳糖、非布司他、預(yù)膠化淀粉加入混合機(jī)中混合30min，得預(yù)混料。

流化床制粒：將預(yù)混料加入流化床，參數(shù)設(shè)置為，進(jìn)風(fēng)溫度（80 ± 10）℃，蠕動(dòng)泵轉(zhuǎn)速80～120 r / min，風(fēng)量750～1200 m3 / h。制粒完畢后，待干燥失重不超過2. 0%，停止干燥。干燥結(jié)束后繼續(xù)抖袋60s，收料完畢后，采用固定真空整粒機(jī)整粒，篩網(wǎng)孔徑為2. 0 mm。

總混：外加輔料交聯(lián)羧甲基纖維素鈉，混合10min；加入硬脂酸鎂，混合5min。

壓片：采用直徑為9. 0mm 的圓形雙弧淺凹沖對總混顆粒壓片?？刂破居捕葹?0～70N。

包衣：稱取處方量胃溶型薄膜包衣預(yù)混劑適量，緩慢加入純化水中，攪拌均勻（≥ 45 min），配制12%的包衣液。打開包衣機(jī)，包衣前將素片放入包衣鍋內(nèi)，調(diào)整噴槍角度，設(shè)置主機(jī)轉(zhuǎn)速為2r / min，預(yù)熱磨片1～3min，取100片素片，稱定質(zhì)量，設(shè)置參數(shù)為，進(jìn)風(fēng)溫度（60 ± 10）℃，主機(jī)轉(zhuǎn)速2～5r / min，蠕動(dòng)泵轉(zhuǎn)速30～600r / min，開槍壓力0. 20～0. 40MPa，霧化壓力0. 20～0. 40MPa，開始包衣，包衣增重約3%，停止噴漿，將主機(jī)轉(zhuǎn)速調(diào)至2 r / min，干燥15～25min，停止加熱，待冷卻至出風(fēng)溫度不超過35 ℃，出料，即得非布司他片包衣片。

 

2. 2 溶出介質(zhì)確定

 

測定非布司他在不同pH（pH = 1. 0，2. 0，3. 0，4. 0， 5. 0，5. 2，5. 4，5. 6，5. 8，6. 0，6. 2，6. 4，6. 6，6. 8，7. 0， 8. 0）條件下的溶解度，結(jié)果非布司他為 pH - 溶解度依賴藥物，幾乎不溶于水和酸性溶液，溶解度隨pH的增大而逐漸增大。為建立具備區(qū)分能力的溶出曲線，測定非布司他在水及0. 1%，0. 3%，0. 4%，0. 5%，0. 6% 十二烷基硫酸鈉溶液中的溶解度，各pH條件平行測定3次，結(jié)果非布司他在 0. 5% 十二烷基硫酸鈉溶液中能達(dá)到漏槽條件。故最終確定溶出介質(zhì)為0. 5%十二烷基硫酸鈉溶液。

 

2. 3 含量測定

 

2. 3. 1 色譜條件

 

色譜柱：ACE Excel 3 C18 - AR柱（50 mm × 4. 6 mm， 5 µm）；流動(dòng)相：乙腈 - pH 3. 0醋酸溶液（50∶50，V / V）；流速：1. 0 mL / min；檢測波長：317 nm；柱溫：40 ℃；進(jìn)樣量：20 µL。

 

2. 3. 2 溶液制備

 

取非布司他對照品適量，精密稱定，加乙腈 - 水溶液（60∶40，V / V）溶解，稀釋成每1mL含非布司他40µg的對照品溶液。取樣品，加0. 5% 十二烷基硫酸鈉溶液900mL，按 2020年版《中國藥典（四部）》0931溶出度與釋放度測定法第二法（槳法）測定，設(shè)置轉(zhuǎn)速為50r / min，分別取溶出 10，15，20，30，45，60 min時(shí)的溶液適量，即時(shí)補(bǔ)充相同體積 0. 5% 十二烷基硫酸鈉溶液，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。按處方量稱取不含主藥的輔料，混勻，取細(xì)粉300mg，加0. 5% 十二烷基硫酸鈉溶液900 mL，超聲（功率為600W，頻率為40kHz）10min，濾過，即得空白輔料溶液。

 

2. 3. 3 方法學(xué)考察

 

專屬性試驗(yàn) ：分別吸取2. 3. 2項(xiàng) 下3種溶液及0. 5%十二烷基硫酸鈉溶液、乙腈 - 水溶液（60∶40，V / V），按2. 3. 1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定。結(jié)果供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相同位置處有相應(yīng)色譜峰，其他溶劑均無干擾，表明方法專屬性良好。色譜圖見圖1。

 

 

線性關(guān)系考察：取非布司他對照品適量，精密稱定，加乙腈 - 水溶液（60∶40，V / V）溶解，稀釋成每1mL約含非布司他0. 1 mg 的線性試驗(yàn)貯備液。精密量取線性試驗(yàn)貯備液1，2，5，8，10，15 mL，置100 mL容量瓶中，加乙腈 - 水溶液（60∶40，V / V）稀釋至刻度，搖勻，得10%，20%，50%，80%，100%，150% 系列溶液。精密量取上述溶液各20µL，按2. 3. 1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄色譜圖，以質(zhì)量濃度（X，µg / mL）為橫坐標(biāo)、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y = 1 577 459. 94X +38 998. 32（r = 0. 999 9，n = 6）。結(jié)果表明，非布司他質(zhì)量濃度在0. 99～14. 85 µg / mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

定量限與檢測限確定：取線性關(guān)系考察項(xiàng)下線性試驗(yàn)貯備液適量，逐級稀釋，按 2. 3. 1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定6次，分別以信噪比（S / N）的10倍和3倍 為定量限和檢測限。結(jié)果定量限和檢測限分別為2. 59ng / mL和0. 78ng /mL。

日間精密度試驗(yàn)：取2. 3. 2項(xiàng)下溶出60min時(shí)的供試品溶液適量，由不同分析人員在不同時(shí)間采用不同溶出儀，按2. 3. 1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積，并計(jì)算溶出度。結(jié)果平均溶出量為97. 73%，RSD為0. 93% （n = 6）。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取供試品溶液適量，分別于室溫下放置 2，4，6，8，12，24 h 時(shí)按2. 3. 1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。結(jié)果的RSD小于1. 00%（n = 6），且未發(fā)現(xiàn)其他新的未知峰，表明供試品溶液在室溫下放置24h穩(wěn)定性良好。

加樣回收試驗(yàn)：取非布司他對照品20，40，48 mg，精密稱定，分別置200 mL容量瓶中，按處方比例加入空白輔料230mg，加乙腈 - 水溶液（60∶40，V / V）適量， 超聲使溶解，稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5mL，置100mL容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為低、中、高3個(gè)濃度水平的加樣回收試驗(yàn)溶液，每個(gè)濃度水平平行制備3份。按 2. 3. 1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，結(jié)果見表1。

 

 

2. 4 體外一致性評價(jià)

 

取3批自研制劑與1批原研制劑，各12片，溶出介質(zhì)為0. 5% 十二烷基硫酸鈉溶液，按2020年版《中國藥典（四部）》0931溶出度與釋放度測定法第二法（槳法）測定，比較溶出曲線。采用相似因子（f2）法評價(jià)相似性，結(jié)果見表2?？梢?，3批自研制劑的f2最低為76，均大于50，表明相似性較好。

 

 

3討論

 

3. 1 流化床制粒

 

流化床制粒可在一臺(tái)設(shè)備內(nèi)一步完成混合、制粒、干燥、包衣，具有簡便、機(jī)械化程度高的特點(diǎn)。處方中選擇的輔料適合流化床的工藝特點(diǎn)，混合工序能保證顆粒的均勻性，表明本工藝具有良好的可行性，適用于放大生產(chǎn)。物料溫度是制粒的關(guān)鍵步驟，溫度過高，霧化后的液滴來不及黏附在粉末上，即被干燥成細(xì)粉和細(xì)顆粒；溫度過低，粉末表面的浸膏來不及干燥，甚至形成團(tuán)塊，出現(xiàn)“塌床”現(xiàn)象。本研究中進(jìn)風(fēng)溫度為（80 ± 10）℃，蠕動(dòng)泵轉(zhuǎn)速為80～120r / min，可合理控制物料溫度。原料藥難溶于水，為增加其溶出度，同時(shí)擬合原研制劑的溶出行為，將非布司他原料藥經(jīng)微粉化處理，得到≤25µm、≤50µm、≤75µm、≤100µm 4個(gè)粒徑的原料藥，分別制成片劑后考察其溶出行為。結(jié)果該溶出方法能區(qū)分這4種不同粒徑原料藥生產(chǎn)的制劑。

 

3. 2 溶出度測定方法

 

本研究中采用高效液相色譜法測定溶出度，同紫外光譜法相比，其測定靈敏，結(jié)果準(zhǔn)確，更能保證f2測定的準(zhǔn)確性。方法學(xué)考察結(jié)果表明，本方法專屬、靈敏、準(zhǔn)確，符合2020年版《中國藥典（四部）》中相關(guān)要求［8］。

美國食品藥物管理局發(fā)布的橙皮書中收載的溶出度方法，以pH6. 0磷酸鹽緩沖液為介質(zhì)，采用槳法，以50r/min的轉(zhuǎn)速進(jìn)行測定。在該條件下，自研制劑于30min時(shí)溶出超過80%，不具備區(qū)分能力。采用紫外光譜法， 以0. 5% 十二烷基硫酸鈉溶液為溶出介質(zhì)［9］，區(qū)分能力仍然不夠。非布司他為BCSⅡ類低溶解性-高滲透性藥物，溶出速率是藥物吸收的限速步驟［10］，樣品投入溶出杯后迅速崩解成細(xì)小顆粒。故確定了2. 2項(xiàng)下的溶出介質(zhì)，非布司他滿足漏槽條件，且與腸道生理?xiàng)l件下的pH相近，能合理模擬體內(nèi)的溶解環(huán)境。

以不同品牌十二烷基硫酸鈉為溶劑時(shí)，溶出度測定結(jié)果存在差異［11］，故其品牌不能隨意更換，且批號(hào)應(yīng)盡量一致。按本試驗(yàn)條件測定原研制劑的溶出度，結(jié)果在45～60min 時(shí)溶出量達(dá)85%，且曲線上無拐點(diǎn)和突釋，可用于區(qū)分溶出能力。

 

3. 3 原料藥選擇

 

原料藥的晶型和粒度嚴(yán)重影響藥品的溶出，故研究原料藥的晶型十分必要。經(jīng)調(diào)研，本品具有6種晶型［9］，但不同晶型的表觀溶解度和飽和溶解度無顯著差異，且晶型不影響本品的有效性。故可使用適合工業(yè)化生產(chǎn)的晶型A。

 

3. 4 方法評價(jià)

 

本研究中采用流化床工藝制備非布司他片，其與原研制劑的 f2均大于50，體外溶出曲線相似，適用于非布司他片的制備。