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嘉峪檢測網(wǎng) 2022-05-25 15:42
目的: 通過對比溶出曲線,研究處方中的輔料對瑞舒伐他汀鈣片溶出的影響?
方法:采用粉末直接壓片工藝,通過單因素試驗,考察處方中乳糖的型號?微晶纖維素的來源?鈣鹽的種類?交聯(lián)聚維酮的型號及用量?硬脂酸鎂的用量和包衣粉的用量對瑞舒伐他汀鈣片溶出的影響?
結果:不同的乳糖型號(T80?PW80?315)?微晶纖維素來源(PH102?M102?102)?硬脂酸鎂用量(0.5%?1%?2%)?包衣粉用量(2%?3%?4%)對溶出的影響差異較小,鈣鹽的種類(磷酸鈣?無水磷酸氫鈣?碳酸鈣)?交聯(lián)聚維酮的型號(XL?XL-10)及用量(3%?5%)對溶出的影響有一定差異?
結論:處方中的穩(wěn)定劑及崩解劑對瑞舒伐他汀鈣片的溶出有影響,填充劑?潤滑劑及包衣粉對溶出影響較小?
關鍵詞:輔料;瑞舒伐他汀鈣片;溶出;直接壓片
正文
瑞舒伐他汀鈣是一種選擇性HMG-CoA 還原酶抑制劑[1],由鹽野義(Shionogi)與阿斯利康(AZ)聯(lián)合開發(fā)研制,用于治療原發(fā)性高膽固醇血癥?混合型血脂異常癥及純合子家族性高膽固醇血癥[2-3]?已在全球多個國家和地區(qū)上市,劑型為片劑,全球上市規(guī)格有2.5,5,10,20,40 mg,國內上市規(guī)格為5,10,20 mg?
瑞舒伐他汀鈣片活性成分為瑞舒伐他汀鈣,參比制劑輔料:微晶纖維素?乳糖一水合物?磷酸鈣?交聯(lián)聚維酮?硬脂酸鎂以及包衣材料[4]?本品參比制劑中無粘合劑成分,推測為粉末直接壓片工藝?粉末直接壓片工藝簡單易行,節(jié)能且高效,該工藝常用輔料[5]的發(fā)展及引入,推動了制劑工藝的發(fā)展,使其得以推廣和實現(xiàn)?本文以瑞舒伐他汀鈣片為研究對象,采用粉末直接壓片工藝,以參比制劑為標準,系統(tǒng)研究處方中各輔料對制劑溶出的影響,旨在為仿制藥開發(fā)和上市后輔料變更提供依據(jù)?
1材料
1.1 儀器
HBD-5 型固定料斗混合機(迦南科技集團有限公司);C&C800 型旋轉壓片機(北京創(chuàng)博佳維科技有限公司) ; BG1-5 高效包衣機( 北京航空制造工程研究所) ; AT7 Smart 型溶出儀(STOAX);1260 型高效液相色譜儀(Agilent)?
1.2 試藥
瑞舒伐他汀鈣原料藥(山東朗諾制藥有限公司,含量100.1%,批號170902001);瑞舒伐他汀鈣對照品(中國食品藥品檢定研究院,含量97.6%,批號101028-201202);參比制劑(阿斯利康,10mg 規(guī)格,批號131956);乳糖(T80,MEGGLE,批號L104315215A552);乳糖(PW80,江蘇道寧藥業(yè)有限公司, 批號P181001 ) ; 乳糖( 315 ,KERRY, 批號8516031051 ) ; 微晶纖維素(PH102, FMC,批號P216829643);微晶纖維素(102,JRS,批號5610273519);微晶纖維素(M102,明臺化工股份有限公司,批號C1808050);交聯(lián)聚維酮(XL,ASHLAND,批號NPC-0042 ) ; 交聯(lián)聚維酮( XL-10 ,ASHLAND, 批號0001964827 ) ; 磷酸鈣( TRI-CAFOS 250 ,Budenheim,批號MV5730E);無水磷酸氫鈣(DCPA 128,PRAYON,批號A057339);碳酸鈣(SUDEEP,批號3GH0036);硬脂酸鎂(浙江中維藥業(yè)有限公司,批號180402);薄膜包衣預混劑(32K640002-CN,上?？房蛋录夹g有限公司,批號THL52944)?
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2方法
2.1 處方工藝
處方：瑞舒伐他汀鈣、乳糖、微晶纖維素、交聯(lián)聚維酮、磷酸鈣、硬脂酸鎂及薄膜包衣預混劑。處方中輔料用量設計參考俄羅斯藥監(jiān)局公布的10 mg 規(guī)格瑞舒伐他汀鈣片（阿斯利康）的輔料用量[6]：乳糖（89.50 mg/片）、微晶纖維素（29.82 mg/片）、磷酸鈣（10.90 mg/片）、交聯(lián)聚維酮（7.50 mg/片）、硬脂酸鎂（1.88 mg/片）、薄膜包衣預混劑（組分總和4.50 mg/片）。為便于生產投料的折算，自研制劑在此基礎上通過適量優(yōu)化調整，片芯總重150 mg，瑞舒伐他汀鈣10.40 mg/片，輔料用量：乳糖（90.00 mg/片）、微晶纖維素（30.00 mg/片）、磷酸鈣（10.60 mg/片）、交聯(lián)聚維酮（7.50 mg/片）、硬脂酸鎂（1.50 mg/片）、薄膜包衣預混劑（組分總和4.50 mg/片）。本文研究中按照2 000 片處方投料。
工藝：在混合料斗中順次加入1/2 的乳糖、原料藥、微晶纖維素、交聯(lián)聚維酮和磷酸鈣，以10r·min-1 混合20 min；之后加入剩余的乳糖，以10 r·min-1 混合20 min；再加入硬脂酸鎂，以10 r·min-1混合10 min；最后進行壓片和包衣。
2.2 溶出方法
瑞舒伐他汀鈣片在pH 1.0 鹽酸溶液中溶出速率最慢，故以此介質作為篩選條件[7]。照溶出度與釋放度測定法[8]（ 槳法） ， 以pH 1.0 鹽酸溶液為溶出介質（900 mL）、轉速50 r·min-1，溫度（37±0.5）℃進行溶出試驗，在5，10，15，30，45，60 min 取樣，測定累積溶出量，繪制溶出曲線。
2.3 溶出曲線相似性
根據(jù)國家藥品監(jiān)督管理局藥品審評中心發(fā)布的《普通口服固體制劑溶出曲線測定與比較指導原則》中推薦使用的相似因子（f2）法，評價溶出曲線相似度，若50≤ f2 ≤100，表示自研制劑與參比制劑溶出行為相似[9]。指導原則明確了f2 法最適合3~4 個或更多取樣點，且溶出量超過85%的時間點不超過1 個，故根據(jù)參比制劑及自研制劑的溶出情況，選擇5，10，30 min 取樣點累積溶出量計算f2。
2.4 檢測方法及驗證
按高效液相色譜法[10]（中國藥典2020 版四部通則0512），參考進口注冊標準（JX20050198）[11]溶出度項下的色譜條件，按外標法以峰面積計算。
2.4.1 色譜條件
色譜柱：XBridgeC18（4.6 mm×150 mm，3.5 μm）；以水-乙腈-磷酸（600: 400: 1）為流動相；檢測波長：242 nm；柱溫：40 ℃；流速：1.0 mL·min-1；進樣量：10 μL。
2.4.2 溶液的制備
對照品溶液：精密稱取瑞舒伐他汀鈣對照品約11 mg，置100 mL 量瓶中，加溶出介質溶解并稀釋至刻度，搖勻作為對照品貯備液。精密量取對照品貯備液1 mL，置10 mL 量瓶中，加溶出介質稀釋至刻度，搖勻即得。
供試品溶液：取瑞舒伐他汀鈣片，照“2.2”項下方法取樣10 mL，過0.45 μm 水系濾膜，棄去初濾液3 mL，取續(xù)濾液即得。
空白溶液：取處方量的輔料混合均勻，照“供試品溶液”操作方法，制成空白溶液。
2.4.3 專屬性
分別精密吸取空白溶液、對照品溶液及供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖（圖1），結果表明溶出介質及輔料對測定無干擾，方法專屬性良好。
2.4.4 溶液穩(wěn)定性
精密量取“2.4.2”項下對照品溶液，按“2.4.1”項下色譜條件分別在0，2，4，8，12，16，20，24 h測定其峰面積。以主峰面積計，各時間點主峰面積隨時間的增加呈降低趨勢（37 ℃條件下，從0 h 的100.0%降低到24 h 的75.6%；10 ℃條件下，從0 h 的100.0%降低到24 h 的91.5%。），樣品不穩(wěn)定。以主峰面積和降解產物峰面積的和計算，在37 ℃和10 ℃條件下各時間點峰面積相對0 h 均在98.0%~102.0%范圍內，表明按此法計算，穩(wěn)定性良好。
2.4.5 濾膜吸附
取對照品溶液和供試品溶液各兩份，一份離心后取上清液，另一份用0.45 μm 的水系濾膜過濾，分別棄去初濾液0，1，2，3，5 mL 后取續(xù)濾液進行測定。對照品溶液和供試品溶液在棄去不同體積初濾液后，與離心樣品峰面積的比值均在98.0%~102.0%范圍內，可認為濾膜對樣品無吸附作用，選擇棄去初濾液3 mL。
2.4.6 線性范圍
精密量取“2.4.2”項下對照品貯備液適量，加溶出介質，分別稀釋成質量濃度為1.12，2.23，5.58，11.17，16.75，22.34，33.50 μg·mL-1 的7 份線性溶液，以溶液濃度（X）為橫坐標、峰面積（Y）為縱坐標進行線性回歸。瑞舒伐他汀鈣在1.12~33.50 μg·mL-1 濃度范圍內，回歸方程Y=22449.655 3X+822.060 9，r= 0.999 9，表明線性關系良好。
2.4.7 精密度
精密量取“2.4.2”項下對照品溶液，按“2.4.1”項下色譜條件連續(xù)進樣5 次（峰面積為251593，251081，250118，251196，252887），計算峰面積RSD 為0.4%，表明方法精密度良好。
2.4.8 重復性
取 6 份“2.4.2”項下供試品溶液，按“2.4.1”項下色譜條件測定各樣品溶出量（分別為93.08%，90.69%，90.02%，93.88%，93.54%，90.59%），計算RSD 為1.9%，表明方法重復性良好。
2.4.9 準確度
在處方量空白輔料的 900 mL pH 1.0 介質溶出液中，分別加入相當于制劑中藥物含量50%、100%、150%的對照品，攪拌混勻，制備低、中、高3 種濃度溶液各3 份，按“2.4.1”項下的條件進樣，記錄色譜圖，計算回收率（表1）。所有濃度回收率均在98.0%~102.0%范圍內，9 個回收率數(shù)據(jù)的RSD 為0.8%，小于2.0%，表明該方法準確度良好。
經(jīng)驗證，所建HPLC 方法專屬性、穩(wěn)定性、線性、精密度、重復性、準確度良好，適用于瑞舒伐他汀鈣片在pH 1.0 鹽酸介質溶出液的測定。
3結果
3.1 乳糖型號的影響
乳糖作為填充劑，占比達到60%，選擇3 種不同廠家乳糖型號制備樣品，對比結果，見表2，溶出曲線f2 均＞50，與參比制劑相似。表明所選乳糖對處方溶出的影響差異較小，在制劑開發(fā)過程中均可作為選擇。
3.2 微晶纖維素來源的影響
微晶纖維素作為填充劑，占比為20%，選擇3 種不同來源、相同型號的微晶纖維素制備樣品，對比結果，見表3，溶出曲線f2 均＞50，與參比制劑相似。表明所選微晶纖維素對處方溶出的影響差異較小，在制劑開發(fā)過程中均可作為選擇。
3.3 交聯(lián)聚維酮型號及用量的影響
交聯(lián)聚維酮作為崩解劑，在處方中占比較小，為5%，選擇不同型號及用量的交聯(lián)聚維酮制備樣品，對比結果，見表4，交聯(lián)聚維酮XL（3%、5%）處方，溶出曲線f2 均＜50，與參比制劑不相似；交聯(lián)聚維酮XL-10（3%、5%）處方，溶出曲線f2 均＞50，與參比制劑相似。表明交聯(lián)聚維酮的型號及用量對處方溶出的影響有一定差異，優(yōu)選交聯(lián)聚維酮XL-10，用量在3%~5%。
3.4 不同類型鈣鹽的影響
鈣鹽作為穩(wěn)定劑，占比7.1%，通過穩(wěn)定片劑微環(huán)境（pH 值），從而抑制內酯的生成[7]。選擇不同類型的鈣鹽制備樣品，對比結果，見表5，沒有加鈣鹽的處方和碳酸鈣處方，溶出曲線f2＜50，與參比制劑不相似；磷酸鈣與無水磷酸氫鈣處方溶出曲線f2＞50，與參比制劑相似。表明不同類型的鈣鹽對處方的溶出有一定影響，磷酸鈣與無水磷酸氫鈣的處方可作為選擇。
3.5 硬脂酸鎂用量的影響
硬脂酸鎂作為潤滑劑，占比較小，為1%，具有疏水性，能減緩藥物的溶出速度。選擇不同用量的硬脂酸鎂制備樣品，對比結果，見表6，溶出曲線f2 均＞50，與參比制劑相似。表明硬脂酸鎂用量（0.5%、1%、2%）對溶出的影響較小，用量可選擇0.5%~2%。
3.6 包衣粉用量的影響
包衣粉可以優(yōu)化產品外觀，改進產品的口味及氣味，也能避免速釋片劑受潮，用量為片芯的3%。采用同一批片芯，分別在包衣增重2%、3%和4%時取樣，對比結果，見表7，溶出曲線f2 均＞50，與參比制劑相似。表明不同用量包衣粉（2%、3%、4%）對溶出的影響較小，包衣增重可選擇2%~4%。
3.7 處方重現(xiàn)試驗
根據(jù)以上研究情況，按照相同的處方工藝，重復3 次，如表8 所示，自研制劑與參比制劑在pH 1.0，4.5，6.8 及水4 種介質的溶出結果見表9~12 所示。
結果表明，重現(xiàn)處方樣品在pH 1.0 介質溶出曲線f2 均＞50，與參比制劑相似；在pH 4.5，6.8 和水介質中，15 min 累積溶出量均＞85%，與參比制劑相似。綜上，篩選的處方重現(xiàn)性良好。
3.8 小結
通過研究瑞舒伐他汀鈣片中各輔料對溶出的影響，結果表明乳糖、微晶纖維素型號及來源、硬脂酸鎂用量、包衣粉用量對溶出的影響差異較小，在產品開發(fā)及上市后輔料變更中可作為低風險因素控制；交聯(lián)聚維酮型號及用量、鈣鹽種類對溶出的影響有一定差異，在產品開發(fā)及上市后輔料變更中需作為高風險因素控制。通過處方重現(xiàn)試驗，最終篩選的輔料型號及用量可作為本品開發(fā)及輔料變更的依據(jù)。
4討論
4.1 溶出介質的選擇
瑞舒伐他汀鈣屬于BCS Ⅲ類物質，具有高溶解性[12]。根據(jù)參比制劑在pH 1.0，4.5，6.8 及水4種介質中溶出情況，pH 1.0 介質中溶出速率最慢[7]，自研與參比的相似程度不同，最具有區(qū)分力；其它3 種介質中，自研與參比在15 min 溶出量均達到85%以上[9]，溶出相似，無明顯區(qū)分力。美國FDA 公布的溶出方法參照2018 年溶出指導原則[13]，該指導原則推薦首選0.1 mol·L-1 鹽酸溶液（即pH 1.0 介質）。為使自研與參比在體外溶出相似，減小生物等效性風險，故選擇pH 1.0 介質作為篩選的溶出曲線。
4.2 吸收部位
瑞舒伐他汀鈣絕對生物利用度低，約為 20%，絕大部分以原形藥從糞便及尿液中排泄[4]，目前國內外文獻尚無報道其在人體內的具體吸收部位。日本的原研制劑IF 文件[14]中顯示瑞舒伐他汀鈣在大鼠的整個胃腸道吸收程度相同（胃內74.7%、小腸上段82.4%、小腸中段91.9%、小腸下段78.0%、結腸87.3%、直腸78.1%），由此推測在人體的胃腸道吸收程度類似。因此瑞舒伐他汀鈣在胃內的溶解情況可能對其吸收有影響，為減小生物等效性風險，應提高自研與參比在pH 1.0 介質中的溶出相似性。
4.3 工藝的選擇
已有文獻報道了瑞舒伐他汀鈣片制備工藝[15-18]，瑞舒伐他汀鈣在酸性條件下容易產生降解雜質[7,19]，濕法制粒工藝復雜，對產品的穩(wěn)定性要求較高，風險較大。粉末直壓因工藝簡單、對產品的穩(wěn)定性要求低、生產成本低等優(yōu)點，已逐漸成為制劑工藝的趨勢。故本文采用粉末直接壓片工藝對處方中的輔料進行研究。
4.4 輔料的影響
不同的乳糖型號、微晶纖維素來源、硬脂酸鎂用量、包衣粉用量的處方在pH 1.0 介質中溶出曲線均與參比制劑相似。不同處方均在2 min 內全部崩解，崩解現(xiàn)象基本一致。推測乳糖和微晶纖維素型號及來源不同，粉體性質有差異，但本質和比例未發(fā)生變化，與原料藥混合均勻，壓片后，原有的粉體性質被破壞、重組，形成結構相似的片劑，故溶出現(xiàn)象及溶出曲線相似。硬脂酸鎂和包衣粉占比小，對片劑崩解及溶出難以形成延遲效應，因此溶出曲線相似。
鈣鹽的種類、交聯(lián)聚維酮的型號及用量的處方在pH 1.0 介質溶出有差異。磷酸鈣與無水磷酸氫鈣處方崩解速度與參比制劑基本一致，溶出現(xiàn)象及溶出曲線相似。碳酸鈣處方可能是碳酸鈣與鹽酸反應產生氣體導致片劑上浮，且氣體在片劑內部導致水分不易進入，崩解劑無法充分發(fā)揮作用，致使崩解較慢，影響溶出。交聯(lián)聚維酮XL 比XL-10 粒徑大，崩解作用更強，在用量較低3%~5%時，輔料粒徑的作用更加明顯，從而導致XL（3%、5%）在前15min 的溶出比參比制劑快，與參比制劑不相似；XL-10 粒徑小，崩解作用較弱，用量在3%~5%時，崩解作用差異不大，與參比制劑相似。
4.5 試驗設計及數(shù)據(jù)分析
本文基于粉末直壓工藝及原研制劑處方設計試驗，采用單因素試驗考察輔料對溶出的影響?？紤]到乳糖、微晶纖維素型號較多及產品上市后的輔料變更訴求，選擇粉末直壓用輔料型號，濕法制?；蛘吒煞ㄖ屏５扔猛镜男吞栁戳腥肟疾旆秶?，因此有一定的不足。根據(jù)指導原則[9]，采用非模型依賴法中的相似因子（f2）法進行數(shù)據(jù)分析及比較，選擇3 個取樣點，f2≥50，溶出行為相似；f2＜50，溶出行為不相似。
來源：中國醫(yī)院藥學雜志
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