中文字幕一级黄色A级片|免费特级毛片。性欧美日本|偷拍亚洲欧美1级片|成人黄色中文小说网|A级片视频在线观看|老司机网址在线观看|免费一级无码激情黄所|欧美三级片区精品网站999|日韩av超碰日本青青草成人|一区二区亚洲AV婷婷

BCS（生物藥劑學(xué)分類系統(tǒng)）根據(jù)化合物的溶解性和滲透性對化合物進行分類。生物藥劑學(xué)分類系統(tǒng)的提出旨在于生物豁免，減少對體內(nèi)生物等效性研究的需求，可以減少不必要的生物等效性研究，加速高質(zhì)量藥品的研發(fā)。在化合物眾多理化性質(zhì)及生物學(xué)性質(zhì)中，選擇化合物溶解性和滲透性作為評價指標，可見兩者對于藥物體內(nèi)吸收，生物利用度和藥效的發(fā)揮起到舉足輕重的作用。

生物藥劑學(xué)分類系統(tǒng)：

根據(jù)BCS對溶解性的分類，即制劑的最大劑量所對應(yīng)的藥物是否能在體積不大于250mL、pH值在1.0～6.8的水溶性介質(zhì)中完全溶解，能完全溶解即為高溶解性藥物，反之則為低溶解性藥物。因此，藥物的溶解性跟最大使用劑量和溶解度有關(guān)，建立測定藥物溶解度的方法有助于合理地對藥物溶解性進行評價。藥物的溶解度在體外很容易可以試驗進行獲得，而藥物的滲透性就顯得不易或許。

滲透性分類與API在人體內(nèi)的吸收程度間接相關(guān)（指吸收劑量的分數(shù)，而不是全身的生物利用度），與API在人體腸道膜間質(zhì)量轉(zhuǎn)移速率直接相關(guān)，或者也可以考慮其他可以用來預(yù)測藥物在體內(nèi)吸收程度的非人體系統(tǒng)（如使用原位動物、體外上皮細胞培養(yǎng)等方法）對滲透性進行分類。當一個口服藥物采用質(zhì)量平衡測定的結(jié)果或是相對于靜脈注射的參照劑量，顯示在體內(nèi)的吸收程度≥85%以上（并且有證據(jù)證明藥物在胃腸道穩(wěn)定性良好），則可說明該藥物具有高滲透性。

原料藥按照BCS分為四類：

BCS I類：高溶解性-高滲透性；

BCS II類：低溶解性-高滲透性；

BCS III類：高溶解性-低滲透性；

BCS IV類：低溶解性-低滲透性。

藥物滲透性評價：Caco2細胞特征

在藥物早期開發(fā)中，使用體外細胞模型去評價藥物體內(nèi)滲透性可以節(jié)省時間和資源，加速藥物drug-like評價。其中細胞單層方法是藥物發(fā)現(xiàn)中最早使用的體外滲透性評價方法，最為為大家所熟知是Caco2。Caco2是可以無限分裂的人結(jié)腸癌細胞系，Caco2頂膜表面形成微絨毛形態(tài)與胃腸道上皮細胞的小腸絨毛比較相似，且表達眾多的細胞轉(zhuǎn)運體，包括p-糖蛋白（p-gp），乳腺癌耐藥蛋白（BCRP）,多藥耐藥蛋白（MPR）等常見的外排型轉(zhuǎn)運蛋白，還包括葡萄糖，氨基酸，寡肽等參與物質(zhì)轉(zhuǎn)運的吸收型蛋白。

小腸上皮細胞線粒體中存在藥物代謝酶CYP3A4，其為肝中CYP3A4活性的70%。正常情況下，Caco2細胞代謝酶表達水平比較低，其中CYP3A4的表達水平也不明顯，這樣Ccao2細胞無法真實指明藥物在胃腸道的系前代謝情況。有研究表明，可以通過藥物的刺激或者CYP3A4基因的轉(zhuǎn)染，來提高Caco2細胞中CYP3A4的表達。Ccao2細胞的結(jié)構(gòu)，轉(zhuǎn)運體及代謝酶與胃腸道上皮細胞相似，比較靠近真實的胃腸道藥物可能“遭受”的吸收與代謝情況，進而用于預(yù)測藥物體內(nèi)的滲透性情況。

圖1 單層Caco2細胞滲透性試驗裝置(來源于參考文獻2)

圖1為細胞的滲透性試驗裝置，將細胞置于上述裝置中，培養(yǎng)細胞生長連接成片，鋪滿整個多孔的濾膜。隨著時間推移，細胞將形成微絨毛，并表達眾多的轉(zhuǎn)運體。測定代謝兩到三周可以加入1a-25-二羥基維生素D誘導(dǎo)CYP3A4的表達。理想狀態(tài)形成單層細胞單層，也可能形成細胞單層與細胞多層的混合。細胞之間一定不能存在縫隙，否則化合物將通過縫隙通過多空濾膜。

Caco2細胞評價藥物滲透性試驗設(shè)計：

利用這項技術(shù)可以進行多種不同的滲透性實驗。最簡單的實驗是將被試化合能人到加胞單層的頂膜側(cè)（A）緩沖液中，基底側(cè)（B）緩沖液中則不含被試化合物，試化合物從頂膜側(cè)隔室穿過細胞，擴散到基底側(cè)隔室。在1～2小時之后的某個特定到問點，分別從兩側(cè)隔室取一定量的樣品，采用HPLC或液相色譜-質(zhì)譜法（LC／MS）兩側(cè)被試化合物的濃度，計算滲透速率。這種從頂膜側(cè)到基底側(cè)的擴散試驗（A→B）得到吸收方向的滲透速率，可以模擬胃腸道的吸收。一些研究小組已將上述滲透速率（P）與小腸吸收或劑量吸收百分比（FA）關(guān)聯(lián)起來。這種相關(guān)性一旦建立，即可以幫助藥物化學(xué)家預(yù)測其化合物在體內(nèi)的吸收。

另一種實驗是將含被試化合物的緩沖液置于細胞單層基底側(cè)，不含被試化合物緩沖液置于頂膜側(cè)，該實驗用于研究被試化合物依賴細胞膜轉(zhuǎn)運體的滲透性。如果A-B方向的滲透性（PA-B）與B→A方向的滲透性（PB-A）相同，那么該化合物主要通過被動擴散滲透；如果兩個方向的滲透速率存在顯著差異，則可能有轉(zhuǎn)運體參與滲透。一般認為，如果PA-B大于PB-A且PA-B/PB-A≥2，表明化合物可能經(jīng)主動轉(zhuǎn)運攝取。如果PA-B小于PB-A且PB- A/PA-B≥2，表明化合物可能經(jīng)主動轉(zhuǎn)運外排。

圖2 Cell layer efflux assays measure the permeability both the apical to basolateral (A-B) and basolateral to apical (B-A) directions and calculate an efflux or transport ratio. A ratio >2 indicates efflux. (來源于參考文獻2)

細胞單層滲透性測定一直采用多種條件，一些需要考慮的重要變量包括被試化合物濃度、頂膜側(cè)和基底側(cè)隔室水相緩沖液的pH、基底側(cè)隔室隔絕被試化合物所使用的材料和頂膜側(cè)隔室助溶劑的使用。

Caco-2滲透性測定值存在實驗室的差異，但有時也需要制定一個標準去表征測試化合物的滲透性強弱：

低滲透性：Papp<2*10-6cm/s

中等滲透性：2*10-6cm/s <Papp<20*10-6cm/s

高滲透性：20*10-6cm/s <Papp

Caco2模型的驗證

由于Caco2轉(zhuǎn)運體表達的差異，可能造成實驗室的測定數(shù)值的存在區(qū)別，每個實驗室都應(yīng)建立明確外排轉(zhuǎn)運和攝取轉(zhuǎn)運的比值，進行方法的驗證，通過對已知底物進行測試并對得到的數(shù)值進行比較。大多數(shù)公司，使用質(zhì)控化合物進行實驗，分別驗證Caco2細胞對于化合物的外排（例如地高辛），細胞旁路滲透（阿替洛爾），被動轉(zhuǎn)運（普萘洛爾），這樣以確保建立模型可靠性。Caco2細胞表達多個轉(zhuǎn)運體，對于可以通過同時被多個轉(zhuǎn)運體轉(zhuǎn)運的化合物來說，這樣可能造成轉(zhuǎn)運結(jié)果難以判斷，除非使用特異性抑制劑進行對照試驗。

盡管Caco2細胞模型尚存在不足，比如：

細胞培養(yǎng)時間過長（21d），培養(yǎng)過程需要不斷地更換培養(yǎng)液，成本高；

細胞模型本身為純細胞系，缺乏在小腸上皮細胞中的黏液層，無法真實體現(xiàn)胃腸道的真實胃腸道環(huán)境；

缺少細胞培養(yǎng)標準以及試驗操作標準，使不同試驗試驗結(jié)果差異，使得結(jié)果有時缺乏可比性；

由于Caco-2細胞來源于人結(jié)腸，因而該細胞的轉(zhuǎn)運特性、酶的表達以及跨膜電阻相對更能反映結(jié)腸細胞而非小腸細胞等等。

但是，不可否認的是，建立與應(yīng)用Caco2細胞模型可以被認為是藥物吸收研究方面取得的重要成就，而且隨著改進細胞模型的建立和培養(yǎng)裝置、檢測設(shè)備等新技術(shù)的應(yīng)用，其在新藥研發(fā)中必將發(fā)揮出重要作用。藥物發(fā)現(xiàn)階段，通過體外的評價手段，可以加快項目的快速推進，節(jié)省時間與資源的投入。利用人小腸上皮Caco-2細胞單層來進行藥物小腸吸收的細胞水平實驗，已經(jīng)成為一種預(yù)測藥物在人體小腸吸收以及研究藥物轉(zhuǎn)運機制的標準篩選工具。

參考文獻：

1.人體生物等效性試驗豁免指導(dǎo)原則

2.Drug-like Properties: Concepts, Structure Design and Methods : from ADME to Toxicity（Optimization Permeability Methods/ Transporter Methods）