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體積排阻色譜法 (SEC) 是液相色譜的一種主要分離模式，近年來(lái)被廣泛地應(yīng)用在各個(gè)行業(yè)，是研究分子量及分子量分布測(cè)試、研究聚合物分子結(jié)構(gòu)，其原理以及方法優(yōu)化的方法你了解嗎？跟小編一起來(lái)看看吧。

分離原理

尺寸排阻色譜法：是按分子尺寸的差異進(jìn)行分離的一種液相色譜方法，也稱凝膠色譜法。

排阻色譜的固定相多為凝膠。凝膠是一種由有機(jī)分子制成的分子篩 , 其表面惰性 , 含有許多不同大小孔穴或立體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。凝膠的孔穴大小與被分離組分大小相當(dāng) , 對(duì)不同大小的組分分子則可分別滲到凝膠孔內(nèi)的不同深度。尺寸大的組分分子可以滲入到凝膠的大孔內(nèi) , 但進(jìn)不了小孔 , 甚至于完全被排斥，先流出色譜柱。尺寸小的組分分子, 大孔小孔都可以滲進(jìn)去, 最后流出。因此 , 大的組分分子在色譜柱中停留時(shí)間較短, 很快被洗出。小的組分分子在色譜柱中停留時(shí)間較長(zhǎng)。經(jīng)過(guò)一定時(shí)間后, 各組分按分子大小得到分離。

當(dāng)組分X進(jìn)入柱子后,它就要從高濃度的流動(dòng)相向固定相孔隙內(nèi)的流動(dòng)相擴(kuò)散。當(dāng)組分X進(jìn)入色譜固定相達(dá)到擴(kuò)散平衡時(shí)：Xm ? Xn

組分的分配系數(shù)為：

尺寸排阻色譜中任何組分的分配系數(shù)應(yīng)符合：0 ≤ K ≤ 1

固定相

尺寸排阻色譜常用固定相有無(wú)機(jī)和有機(jī)兩大類。

無(wú)機(jī)凝膠：又稱硬質(zhì)凝膠。是具有一定孔徑范圍的多孔性凝膠，如多孔硅膠、多孔玻璃珠等，此類凝膠化學(xué)惰性、穩(wěn)定性及機(jī)械強(qiáng)度均好，耐高溫，使用壽命長(zhǎng)，但裝柱時(shí)易碎，不易裝緊，柱效較低。

有機(jī)凝膠：又稱半硬質(zhì)凝膠。如苯乙烯二乙烯苯交聯(lián)共聚物凝膠，能耐較高壓力，適用于有機(jī)溶劑作流動(dòng)相，有一定可壓縮性，可填得緊密，柱效較高。但在有機(jī)溶劑中有輕度膨脹。新型凝膠色譜填料，克服了傳統(tǒng)軟填料的一些弱點(diǎn)，粒度細(xì)，機(jī)械強(qiáng)度高，分離速度快，效果好，特別是無(wú)機(jī)填料表面鍵合親水性單分子層或多層覆蓋的單糖或多糖型等填料廣泛用于生物大分子的分離。

流動(dòng)相

尺寸排阻色譜流動(dòng)相：從樣品的溶解性考慮，流動(dòng)相應(yīng)與凝膠本身有相似性，黏度低，與樣品的折光率相差大；能潤(rùn)濕凝膠，防止吸附作用。

常用的流動(dòng)相有四氫呋喃、甲苯、N，N’-二甲基甲酸胺、三氯甲烷（凝膠滲透色譜）；水（凝膠過(guò)濾色譜）等。

（可用于分離相對(duì)分子質(zhì)量大的分子，如蛋白質(zhì)、核酸等）