中文字幕一级黄色A级片|免费特级毛片。性欧美日本|偷拍亚洲欧美1级片|成人黄色中文小说网|A级片视频在线观看|老司机网址在线观看|免费一级无码激情黄所|欧美三级片区精品网站999|日韩av超碰日本青青草成人|一区二区亚洲AV婷婷

最小抑菌濃度（MIC）和最小殺菌濃度（MBC）是常常被用于衡量抗菌藥物的研發(fā)和藥敏試驗(yàn)的重要指標(biāo)。通常地最小抑菌濃度（MIC）是指抗菌藥物抑制細(xì)菌生長的最低藥物濃度；最小殺菌濃度（MBC）是指抗菌藥物殺死99%以上細(xì)菌的最低藥物濃度。

 

而對于這兩種濃度，通常是先測定最小抑菌濃度（MIC），然后基于MIC結(jié)果測定最小殺菌濃度（MBC）。下面是分享測定最小抑菌濃度（MIC）和最小殺菌濃度（MBC）的主要實(shí)驗(yàn)步驟和注意事項(xiàng)：

 

2.實(shí)驗(yàn)步驟

2.1 準(zhǔn)備工作

（1）培養(yǎng)基準(zhǔn)備：Middle Brook 7H9肉湯培養(yǎng)基（分枝桿菌）、Middle brook 7H10固體培養(yǎng)基、蒸餾水等

（2）試劑、耗材準(zhǔn)備：96孔板、細(xì)菌培養(yǎng)皿、試管、錐形瓶、接種環(huán)、酒精燈、打火機(jī)、高壓蒸汽滅菌鍋、37℃恒溫培養(yǎng)箱、生物安全柜、超凈工作臺(tái)、恒溫?fù)u床、移液槍、10/200/1000μL tip頭、酒精或DMSO、麥?zhǔn)媳葷峁堋?.22μm過濾器等

（3）菌液制備：配置Middle Brook 7H9肉湯培養(yǎng)基、Middle brook 7H10固體培養(yǎng)基使用高壓蒸汽滅菌法121℃、30min進(jìn)行滅菌處理。

2.2 實(shí)驗(yàn)步驟

（1）將準(zhǔn)備的細(xì)菌培養(yǎng)皿、試管、錐形瓶、接種環(huán)、酒精燈等物品放置在超凈工作臺(tái)打開紫外線照射至少30min。

（2）取涂布的平板或是保存在-80℃的菌種在倒好平板上劃線，正置在恒溫培養(yǎng)箱中30min左右后，倒置培養(yǎng)。

（3）待劃線的平板長出單克隆菌落，使用接種環(huán)挑取單個(gè)菌落，置于液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，通過測定OD600值調(diào)整至對數(shù)期。

（4）使用麥?zhǔn)媳葷峁苷{(diào)整菌液濃度，一般地0.5麥?zhǔn)蠞岫葮?biāo)準(zhǔn)液大概菌數(shù)目約為1.5×108CFU/mL(圖1)，稀釋至1×106CFU/mL。

圖1 麥?zhǔn)媳葷峁軜?biāo)準(zhǔn)管近似濃度（引自https://www.bikeman-bio.com/chanpinzhanshi/8002.html）

（5）稀釋抗菌藥物（以異煙肼、利福平抗分枝桿菌為例）：在超凈工作臺(tái)以無菌的96孔板為藥物濃度梯度稀釋的容器，在96孔板上做好標(biāo)記，首先在第一孔加入100μL藥物母液，后續(xù)剩余孔加入50μL液體培養(yǎng)基，然后從第一孔吸取50μL母液至第二孔，混勻后依次進(jìn)行，最終形成藥物的濃度梯度。

（6）接著，接種菌液按照50μL/孔依次加入96孔板，其中菌濃度大約為5×105CFU/mL。

（7）設(shè)置陰性對照組（液體培養(yǎng)基+菌液）、陽性對照組（液體培養(yǎng)基）。

（8）培養(yǎng)：置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)并觀察菌的生長狀態(tài)。

（9）分析：根據(jù)定義通過肉眼觀察，其中使細(xì)菌無明顯生長的藥物濃度即為最低藥物濃度為MIC。

（10）測定MBC：基于MIC，我們選取包括最低藥物濃度MIC孔在內(nèi)的更高藥物濃度的孔，吸取10~20μL，滴加在固體培養(yǎng)基瓊脂板上，使用涂布棒將其涂勻。

（11）將固體瓊脂板置于恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)并觀察菌的生長狀態(tài)。

（12）分析：根據(jù)定義，我們通過技術(shù)瓊脂板上的單克隆菌落，尋找與接種菌量相比，生長的菌落數(shù)減少量≥99.9%的平板對應(yīng)孔的藥物濃度即為最低藥物濃度MBC。

 

3. 注意事項(xiàng)

（1）操作過程中，要保證無菌操作，避免雜菌影響；全程要穿好實(shí)驗(yàn)服、佩戴好手套、口罩。

（2）通常地，溶解抗菌藥物通常使用DMSO、乙醇等無菌溶劑，并過濾除菌后使用。

（3）使用麥?zhǔn)媳葷峁艿闹饔^性比較強(qiáng)，因此要充分搖勻麥?zhǔn)媳葷峁芎笫褂谩?/span>

（4）對瓊脂板進(jìn)行涂布和劃線時(shí)需要注意力度，要避免劃破瓊脂板。

（5）要注意設(shè)置重復(fù)組（通常3個(gè)），包括孔板藥物濃度設(shè)置，瓊脂板單克隆菌落計(jì)數(shù)。

（6）對稀釋的藥物濃度做好標(biāo)記，避免混淆。